亞硝酸鈉急性經(jīng)口毒性試驗設(shè)計

亞硝酸鈉急性經(jīng)口毒性試驗設(shè)計實驗?zāi)康?、急性經(jīng)口毒性試驗是評估化學(xué)物毒性特性的第一步，通過短時間經(jīng)口染毒可提供對健康危害的信息。試驗結(jié)果可作為化學(xué)毒性分級和標簽標識以及確定亞慢性毒性試驗和其它毒理學(xué)試驗劑量的依據(jù)。2、此實驗為設(shè)計性實驗，通過此試驗應(yīng)學(xué)會化學(xué)物急性毒性評價試驗的基本程序，并且掌握進行試驗設(shè)計時應(yīng)考慮的各種因素與試驗條件。3、熟悉實驗動物的飼喂技術(shù)及基本要求，掌握實驗動物灌胃的技能，學(xué)會LD50及其可信限的計算方法。4、通過本試驗獲得受試化學(xué)物的半數(shù)致死劑量，并描述試驗過程中實驗動物的各種反應(yīng)及可能的靶器官。二、實驗器材與試劑實驗試劑:苦味酸,酸性品紅,水，動物飼料實驗動物與儀器：小白鼠、灌胃針、天平、飼養(yǎng)室、燒杯、容量瓶、吸量管、手術(shù)剪、托盤、鑷子等實驗步驟實驗動物選擇與管理：選擇50只，2-3月齡，體重在18-22g的健康小鼠，小鼠重量相差在10%以內(nèi)。實驗管理:實驗前動物先適應(yīng)飼料和環(huán)境4d。適應(yīng)期間和試驗期間雌雄分籠飼養(yǎng)，染毒前4小時小鼠必須空腹，染毒后繼續(xù)禁食2-4h，染毒期間飲水不限。實驗條件：飼養(yǎng)室溫度控制在22±3oC,相對濕度在30%-50%之間，無對流風(fēng)，晝夜各半。實驗動物染色與分組：用黃色3%-5%苦味酸，0.5%酸性品紅對動物進行染色標記，黃色和紅色分別代表個位和十位。動物分為左、中、右三區(qū)，左上肢、左中部和左下肢分別表示1、2、3或者10、20、30，以此類推。50只動物分成隨機分5組，分別為A、B、C、D、E每組10只，且雌雄各半。劑量設(shè)計與劑量分組（見下表）：查閱文獻得知小鼠LD50為200mg\kg.亞硝酸鈉為白色至淡黃色粒狀結(jié)晶或粉末，無味，易潮解，有毒，水溶液呈堿性，在水中溶解度為82g/100ml。相對密度（水=1g/cm3）：2.17g/cm3；熔點：271℃；沸點320℃（分解）。將亞硝酸鈉溶于水中，動物按10ml\kg給藥，得到的受試物濃度C=劑量/10（ml/kg）。ABCDE劑量對數(shù)值i=0.2lgLD50-2i1.9lgLD50-i2.1lgLD502.3lgLD50+i2.5lgLD50+2i2.7劑量（mg\kg）等比1.679.0126．0200．0316.0501.0亞硝酸鈉濃度（mg\10ml）79126200316501標準灌胃量(ml/kg)10101010106.灌胃處理：開始做實驗時，開始染毒前3小時禁食，早上8點一次性對動物進行灌胃。以后每天對小鼠進行正常的飼料喂養(yǎng)。灌胃量（mg\kg）=最初的體重（g）*小鼠灌胃容量（10ml\kg）*各組亞硝酸鈉的濃度（mg\10ml）體重-灌胃表AB體重（g）1234567891012345678910灌胃量（mg\kg）CD體重（g）1234567891012345678910灌胃量（mg\kg）E體重（g）12345678910灌胃量（mg\kg）7.試驗周期與觀察：實驗持續(xù)一周時間，染毒后每天下午6點觀察一次，記錄各方面指標的變化。以A組動物體重變化為例子設(shè)計下表，其他組類推：體重變化表標標號體重時間12345678910第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天8.一般體征觀察指標：示例A組觀察指標12345體征可能涉及到的組織器官體征可能涉及到的組織器官體征可能涉及到的組織器官體征可能涉及到的組織器官體征可能涉及到的組織器官鼻孔，呼吸狀態(tài)，呼吸頻率與深度，體表顏色變化運動功能等行為改變反射眼檢查病理學(xué)檢查，對病態(tài)嚴重者進行解剖，觀察器官顏色等變化排泄物分泌物體重的變化其他指標6789109.死亡動物情況死亡動物記錄表ABCDE動物死亡數(shù)量動物死亡時間尸體情況描述五、實驗結(jié)果與數(shù)據(jù)記錄組別劑量/(mg/kg)劑量對數(shù)(x)動物數(shù)/只（n）死亡數(shù)（r）死亡率（p）A791.910B1262.110C2002.310D3162.510E5012.710LgLD50=Xk-d/2(pi+p(i+1))95%可信限(CI)=lgˉ1(lgld50±1.96*Slgld50)六、實驗結(jié)論確定受試物毒性的分級，可能作用的靶器官，