《纖維素酶制劑》規(guī)范

4QB/T2583-XXXX纖維素酶制劑本文件規(guī)定了纖維素酶制劑的感官、理化和安全等要求，描述了相應(yīng)的試驗方法，規(guī)定了檢驗規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、運輸和貯存的內(nèi)容，并給出了便于技術(shù)規(guī)定的產(chǎn)品分類。本文件適用于發(fā)酵法生產(chǎn)的纖維素酶制劑的生產(chǎn)、檢驗和銷售。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志QB/T1803工業(yè)酶制劑通用試驗方法QB/T1804工業(yè)酶制劑通用檢驗規(guī)則和標(biāo)志、包裝、運輸、貯存GB1886.174食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑食品工業(yè)用酶制劑3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1纖維素酶cellulase在各種酶組分的協(xié)同作用下，能降解纖維素為纖維寡糖、纖維二糖和葡萄糖的酶。3.2纖維素酶制劑cellulasepreparations以提取、純化的纖維素酶（3.1）為主要催化活性組分，通過制劑等工藝制得的產(chǎn)品。注：制劑工藝中可加入有助于產(chǎn)品貯存、穩(wěn)定和使用的配料。3.3濾紙酶活力單位filterpaperactiveunit，F(xiàn)PA；在特定條件下，1min內(nèi)水解濾紙底物產(chǎn)生相當(dāng)于1μmol葡萄糖的還原糖所需要的酶量。3.4羧甲基纖維素酶活力單位sodiumcarboxymethylcelluloseactiveunit，CMCA；在特定條件下，1min內(nèi)水解羧甲基纖維素鈉底物產(chǎn)生相當(dāng)于1μmol葡萄糖的還原糖所需要的酶量。5QB/T2583-XXXX3.5纖維素酶活力cellulaseactivity纖維素酶制劑的酶活力activityofcellulasepreparations為1g（或1mL）纖維素酶制劑含有的濾紙酶活力單位（3.3）或羧甲基纖維素酶活力單位（3.4）。4產(chǎn)品分類4.1按產(chǎn)品形態(tài)分為固體劑型和液體劑型纖維素酶制劑。按產(chǎn)品應(yīng)用領(lǐng)域分為食品工業(yè)用和其他工業(yè)用纖維素酶制劑。4.2按產(chǎn)品適用pH分為酸性、中性和堿性纖維素酶制劑。5要求5.1感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求類白色至黃褐色，色澤均一5.2理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)FPA[FU/g(或FU/mL)]≥CMCA[CU/g(或CU/mL)]≥干燥失重/%≤ pH—5.3安全要求6QB/T2583-XXXX食品工業(yè)用酶制劑應(yīng)符合GB1886.174規(guī)定，其他工業(yè)用應(yīng)符合相關(guān)要求的規(guī)定。6試驗方法6.1感官取適量樣品于潔凈、干燥白瓷盤或類似容器，觀察、嗅聞做出判斷，做好記錄。6.2酶活力按照附錄A或附錄B進(jìn)行測定。6.3干燥失重按QB/T1803中干燥失重的試驗方法執(zhí)行。6.4細(xì)度按QB/T1803中細(xì)度的試驗方法執(zhí)行，標(biāo)準(zhǔn)試驗篩選擇Φ200×50-0.40/0.25。6.5pH按照QB/T1803中pH的試驗方法執(zhí)行。7檢驗規(guī)則7.1批次同原料、同工藝，同一班次或同一罐次生產(chǎn)的產(chǎn)品為一批。7.2抽樣抽樣的樣本量可按照表3執(zhí)行，或由生產(chǎn)企業(yè)和（或）相關(guān)方確定。每個最小外包裝單位的取樣量應(yīng)不小于300g或300mL，不足時按照比例適當(dāng)加取。充分混合均勻后進(jìn)行檢驗。表3抽樣的樣本量23>50047.3出廠檢驗7.3.1產(chǎn)品出廠前，應(yīng)由生產(chǎn)廠的質(zhì)檢部門負(fù)責(zé)按本文件規(guī)定逐批進(jìn)行檢驗。檢驗符合本文件后方可出廠。7.3.2檢驗項目固體劑型的檢驗項目為感官要求、酶活力、干燥失重；液體劑型的檢驗項目為感官要求、酶活力。7QB/T2583-XXXX7.4型式檢驗檢驗項目為本文件中全部要求項目。一般情況下，同一類產(chǎn)品的型式檢驗每半年至少進(jìn)行一次，有下列情況之一者，亦應(yīng)進(jìn)行：a）原輔材料有較大變化時；b）更改關(guān)鍵工藝或設(shè)備時；c）新試制的產(chǎn)品或正常生產(chǎn)的產(chǎn)品停產(chǎn)3個月后，重新恢復(fù)生產(chǎn)時；d）出廠檢驗與上次型式檢驗結(jié)果有較大差異時；e）國家市場監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)按有關(guān)規(guī)定需要抽檢時。7.5判定規(guī)則7.5.1抽取樣品經(jīng)檢驗，所檢項目全部符合要求，判該批產(chǎn)品符合本文件。7.5.2檢驗結(jié)果如有兩項以上指標(biāo)不符合要求，判定該批產(chǎn)品不符合本文件。如有一項至兩項不符合要求，應(yīng)重新自同批產(chǎn)品中抽取樣本量的兩倍進(jìn)行復(fù)驗，以復(fù)驗結(jié)果為準(zhǔn)。若仍有一項不符合要求，判定該批產(chǎn)品不符合本文件。7.5.3當(dāng)供需雙方對檢驗結(jié)果有異議時，可由雙方協(xié)商解決，或委托有關(guān)單位進(jìn)行仲裁檢驗，以仲裁檢驗結(jié)果為準(zhǔn)。8標(biāo)志、包裝、運輸和貯存按照QB/T1804中的規(guī)定執(zhí)行。8QB/T2583-XXXX附錄A（規(guī)范性）纖維素酶活力的測定方法濾紙法A.1原理纖維素酶在一定溫度和pH條件下，將濾紙底物水解出還原糖。在沸水浴條件下，3，5-二硝基水楊酸（DNS試劑）與還原糖發(fā)生顯色反應(yīng)，其吸光值與還原糖含量成正比。通過測定其540nm下的吸光值，可得到還原糖的生成量，進(jìn)而計算岀纖維素酶的濾紙酶活力。A.2試劑和溶液除特殊說明外，所用的試劑均為分析純，水均為符合GB/T6682中規(guī)定的二級水。A.2.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10.0mg/mL）稱取1.00g（精確至0.1mg）103℃±2℃烘干2h的無水葡萄糖，用水溶解并定容至100mL。4℃密封保存，臨用現(xiàn)配。A.2.2葡萄糖系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別吸取0.5mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL和3.00mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（A.2.1）于10mL容量瓶中，蒸餾水定容并搖勻。配制成每0.5mL溶液中含有0.25mg、0.50mg、0.75mg、1.00mg、1.25mg和1.50mg的葡萄糖系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。A.2.3氫氧化鈉溶液(200.0mg/mL)稱取20.0g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL。A.2.4氫氧化鈉溶液(4.0mg/mL)稱取0.4g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL。A.2.5鹽酸溶液（0.1mol/L）移取0.86mL濃鹽酸于盛有90mL蒸餾水的100mL容量瓶中，蒸餾水定容并搖勻。A.2.6檸檬酸緩沖液（pH4.8，適用于酸性纖維素酶制劑）稱取4.83g一水檸檬酸，溶于約800mL水中，在攪拌情況下，加入7.94g檸檬酸三鈉，用水定容至1000mL。調(diào)節(jié)溶液的pH至4.8±0.05備用。A.2.7磷酸緩沖液（pH6.0，適用于中性纖維素酶制劑）分別稱取2.10g一水磷酸二氫鈉1和21.9g二水磷酸氫二鈉，將其溶解在1000mL蒸餾水中。調(diào)節(jié)溶液的pH至6.0±0.05備用。室溫下可保存一個月。A.2.8硼酸緩沖溶液（pH10.5，適用于堿性纖維素酶制劑）稱取9.54g硼酸鈉、1.60g氫氧化鈉于燒杯中，加水900mL，攪拌至均勻，定容至1000mL。調(diào)節(jié)pH至10.5±0.05。A.2.9濾紙底物將濾紙底物放入干燥器中平衡24h以上，將平衡后的濾紙裁制成1.0cm×6.0cm的無毛邊濾紙條（濾紙條質(zhì)量為50mg±1.0mg）。短邊對折后，對稱剪為32片，備用。A.2.10DNS試劑稱取3.15g3，5-二硝基水楊酸，加入500mL蒸餾水，攪拌3s～5s，45℃水浴。然后緩慢加入100mL氫氧化鈉溶液（A.2.3），同時不斷攪拌，直到全部溶解（注意：在加入氫氧化鈉溶液過程中，溶液溫度不超過48℃)。再緩慢加入91.0g四水酒石酸鉀鈉、2.50g苯酚沃特曼一號濾紙。給出這一信息是為了方便本文9QB/T2583-XXXX和2.50g無水亞硫酸鈉。期間不斷攪拌，直到完全溶解。停止加熱并冷卻至室溫后，蒸餾水定容至1000mL。用燒結(jié)玻璃過濾器過濾。取濾液，儲存在棕色瓶中，避光保存。室溫下存放7天后使用，有效期為180天。警告：處理酸堿和配制DNS試劑時，應(yīng)在通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的房間進(jìn)行，戴上護(hù)目鏡和乳膠手套，一A.3儀器與設(shè)備A.3.1分光光度計。A.3.2pH計，精度0.01。A.3.3恒溫水浴鍋。A.3.4電子天平，感量0.1mg。A.3.5磁力攪拌器。A.3.6電爐。A.3.7具塞刻度試管，25mL。A.3.8移液器：100μL和1000μL。A.4分析步驟A.4.1繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取0.5mL蒸餾水（空白）和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（A.2.2）于25mL具塞刻度試管中，加入1.5mL緩沖溶液（A.2.6、A.2.7或A.2.8）和3.0mLDNS試劑（A.2.1）混勻。同時置于沸水浴中，反應(yīng)10min，隨后取出，流水沖洗冷卻至室溫，再蒸餾水定容至25mL，蓋塞，混勻。以空白為對照，在540nm處測定吸光值。以葡萄糖質(zhì)量（mg）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。A.4.2樣品的測定稱取1.00g樣品（精確至0.1mg）于100mL容量瓶中，加入相應(yīng)緩沖溶液（A.2.6、A.2.7或A.2.8）溶解并定容，攪拌30min。取適量樣品溶液用相應(yīng)緩沖液（A.2.6、A.2.7或A.2.8）進(jìn)行稀釋。以空白為對照，稀釋后樣品溶液的吸光值應(yīng)為0.3～0.4之間。A.4.3操作程序空白樣品加入1.50mL緩沖溶液（A.2.6、A.2.7或A.2.8）將32片濾紙片放入每支試管的底部，渦旋3s-5s，使其全部浸沒于液面下50℃±0.1℃平衡5min/加入0.50mL待測酶液50℃±0.1℃,準(zhǔn)確反應(yīng)60min。（反應(yīng)期間可在恒溫水浴振蕩器中保持振蕩）加入3.0mLDNS試劑，混勻加入0.50mL待測酶液，混勻/沸水浴中，加熱10min，取出，迅速冷卻至室溫，蒸餾水定容至25mL，搖勻測定540nm波長的吸光值，記為AB測定540nm波長的吸光值，記為AEA.5結(jié)果計算濾紙酶活力（FPA）按式（A.1）計算。QB/T2583-XXXX···········································································（A.1)式中：X1——樣品的濾紙酶活力（FPA），u/g；A——根據(jù)吸光度變化（AE-AB）在標(biāo)準(zhǔn)曲線上査得的還原糖的質(zhì)量（以葡萄糖計），單位為毫克（mg100——樣品溶解體積，單位為毫升（mL）；n——酶樣的稀釋倍數(shù)；1000——毫摩爾與微摩爾的換算系數(shù)；m——樣品的質(zhì)量，單位為克（g0.5——待測酶液的取樣體積，單位為毫升（mL）；180.16——葡萄糖的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾（g/mol）；60——酶解反應(yīng)時間，單位為分鐘（min）。A.6精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過平均值的15%。QB/T2583-XXXX（規(guī)范性）纖維素酶活力的測定方法羧甲基纖維素鈉法B.1原理纖維素酶在一定溫度和pH條件下，將纖維素底物(羧甲基纖維素鈉)水解，釋放出還原糖。在堿性、煮沸條件下，3，5-二硝基水楊酸(DNS試劑)與還原糖發(fā)生顯色反應(yīng)，其顏色的深淺與還原糖(以葡萄糖計)含量成正比。通過在540nm測其吸光度，可得到產(chǎn)生還原糖的量，計算出纖維素酶的酶活力。B.2試劑和溶液除特殊說明外，所用的試劑均為分析純，水均為符合GB/T6682中規(guī)定的二級水。除以下試劑外，其余試劑同濾紙法附錄A.2B.2.1羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)B.2.2CMC-Na底物溶液稱取1.50g羧甲基纖維素鈉（精確至0.0001g緩緩加入相應(yīng)的緩沖液(A.2.6、A.2.7或A.2.8)約80mL并緩慢加熱至沸騰，邊加熱邊攪拌，直至CMC-Na全部溶解，冷卻后，相應(yīng)的緩沖液(A.2.6、A.2.7或A.2.8)定容到100mL，攪拌均勻。B.2.3其余試劑同濾紙法A.2B.3儀器與設(shè)備同濾紙法A.3。B.4分析步驟B.4.1繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線同濾紙法A.4.1。B.4.2樣品的測定稱取1.00g樣品（精確至0.1mg）于100mL容量瓶中，加入相應(yīng)緩沖溶液（A.2.6、A.2.7或A.2.8）溶解并定容，攪拌30min。取適量樣品溶液用相應(yīng)緩沖液（A.2.6、A.2.7或A.2.8）進(jìn)行稀釋。以空白為對照，稀釋后樣品溶液的吸光值應(yīng)為0.33-0.35之間。B.4.3操作程序空白樣品加入2.