乳腺癌患者表皮生長因子受體2、pcna、bcl-2、bax表達與預后的關(guān)系

乳腺癌患者表皮生長因子受體2、pcna、bcl-2、bax表達與預后的關(guān)系

人類表皮生長因子2（人類p-2）是乳腺癌的重要研究因素之一，在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后中發(fā)揮著重要作用。增殖細胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)是判斷細胞增殖活性的內(nèi)源性標志物。已知Bcl-2和Bax是一對作用相反的凋亡抑制基因和促進基因。本文聯(lián)合檢測HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax在乳腺癌標本中的表達,分析其與乳腺癌預后的關(guān)系,探討其作為乳腺癌預后指標的可行性和臨床價值。1材料和方法1.1瘤旁正常乳腺癌組織的he染色病理檢查收集貴陽醫(yī)學院附屬醫(yī)院1997年1月至1997年12月收治的50例乳腺癌根治術(shù)患者的手術(shù)標本,15例經(jīng)病理檢查明確的正常乳腺組織(其中9例取自乳腺纖維腺瘤切除后的瘤旁正常乳腺組織,6例取自乳腺整形手術(shù)后的正常乳腺組織),用10%甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋為存檔蠟塊。所有乳腺癌病例均經(jīng)HE染色病理檢查確診,患者均為女性,年齡31~68歲,中位年齡45歲;其中浸潤性導管癌43例,浸潤小葉癌2例,單純癌3例,粘液腺癌1例,印戒細胞癌1例;腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例。臨床分期Ⅰ期2例,Ⅱ期32例,Ⅲ期14例,Ⅳ期2例。所有病例術(shù)前未接受化療和放療,術(shù)后35例行CMF方案化療,27例行放療,內(nèi)分泌治療資料欠完整。1.2免疫組織化學HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax蛋白的檢測一抗均為鼠抗人單克隆抗體,EnVision免疫組化二步法試劑盒,購自北京中山生物技術(shù)有限公司。1.3預防過氧化物酶存檔蠟塊連續(xù)切片,脫蠟后浸泡于梯度乙醇水化;3%過氧化氫孵育,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;微波抗原熱修復;滴加一抗,37℃孵育1~2h,TBS沖洗;滴加非免疫性血清,37℃孵育20min,TBS沖洗;滴加EnVision二抗,37℃孵育20~30min,TBS沖洗;顯色,沖洗、復染、脫水、封片。1.4細胞陽性細胞染色HER-2陽性染色位于細胞膜,呈棕黃色染色,按HercepTest標準評分。PCNA陽性染色位于細胞核,Bcl-2陽性染色位于細胞漿,Bax陽性染色位于細胞漿。陽性細胞染色為棕黃色或棕褐色,評估標準為:無陽性細胞為“-”;陽性細胞數(shù)<25%為“+”;陽性細胞數(shù)25%~50%為“++”;陽性細胞數(shù)>50%為“+++”。1.5乳腺癌復發(fā)時間從術(shù)后開始定期隨訪,隨訪形式為信訪、電話訪問或門診復查,隨訪日期截至2003年12月,隨訪率100%。隨訪時間最長72個月,平均54個月。乳腺癌復發(fā)是經(jīng)過治療(包括手術(shù)、放化療和內(nèi)分泌治療)后,在原發(fā)灶附近或遠隔器官出現(xiàn)病理性質(zhì)完全相同病灶的現(xiàn)象。本文中所指復發(fā)有原位復發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移,出現(xiàn)其中一項即定義為復發(fā)。1.6生存曲線統(tǒng)計分析以SPSS10.0軟件包進行統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析。應(yīng)用Kaplan-Meier生存曲線進行單因素分析,用log-rank檢驗分析生存曲線的差異。以Cox模型進行多因素生存分析。顯著性檢驗水準P<0.05。2結(jié)果2.1pcna、bcl-2、bax乳腺癌組織中HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax的表達見圖1。其中HER-2陽性率為44.0%(22/50),PCNA為82.0%(41/50),Bcl-2為48.0%(24/50),Bax為54.0%(27/50)。而正常乳腺組織中HER-2陽性率為13.3%(2/15),PCNA為6.7%(1/15),Bcl-2為26.7%(4/15),Bax為73.3%(11/15)。2.2死亡病例及死亡病例的情況全組中位生存期62個月,其中無瘤生存19例,復發(fā)22例,死亡9例,死亡病例均死于乳腺癌進展。5年總生存率為82%(41/50),無瘤生存率為38%(19/50),死亡率為18%(9/50)。2.3患者預后分析2.3.1總生存率和總生存率分析對50例HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax表達不同的患者的Kaplan-Meier生存曲線進行分析(圖2~9),各指標水平的無瘤生存率曲線及總生存率曲線的差異用log-rank檢驗進行比較(表1、2)。從單因素生存分析的結(jié)果看,HER-2、Bax對乳腺癌復發(fā)有影響作用(P﹤0.001);PCNA的統(tǒng)計量接近臨界值,但無統(tǒng)計學意義。Bcl-2對總生存率的影響的統(tǒng)計量接近臨界值,但無統(tǒng)計學意義;各指標對總生存率的影響均無統(tǒng)計學意義。2.3.2影響乳腺癌預后的因素應(yīng)用多因素Cox模型分析中逐步向后篩選法,HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax均進入方程,進入水準為0.05,刪除水準為0.1,選出影響乳腺癌預后的獨立因素(表3、4)。影響復發(fā)的因素中HER-2、Bax被篩選出來,回歸系數(shù)為正值,提示該指標表達的乳腺癌患者易復發(fā)。影響生存期的因素中Bcl-2、Bax被篩選出來,Bcl-2回歸系數(shù)為負值,提示該指標表達的乳腺癌患者生存期較長;而Bax回歸系數(shù)為正值,是預示生存期短的指標。3復配前后乳腺癌生存期大多數(shù)研究認為HER-2、PCNA、Bax陽性表達者腫瘤侵襲性高,復發(fā)率轉(zhuǎn)移率高,無瘤生存期短。理論上Bcl-2基因表達越強,腫瘤凋亡越受抑制,惡性程度越高,其病理生物學特性越差。然而許多國內(nèi)外學者的研究結(jié)果表明Bcl-2的表達往往與腫瘤較好的生物學特性呈正相關(guān)。本研究應(yīng)用單因素及多因素Cox模型綜合分析以上指標與乳腺癌預后的關(guān)系,探討其能否作為判斷乳腺癌復發(fā)和生存期長短的有效指標。本研究單因素分析中將HER-2、PCNA、Bcl-2、Bax各水平的Kaplan-Meier無瘤生存率曲線及總體生存率曲線分別進行比較,發(fā)現(xiàn)HER-2與Bax對腫瘤復發(fā)有顯著影響作用,是評價乳腺癌是否早期出現(xiàn)復發(fā)、轉(zhuǎn)移的指標。在上述指標中未發(fā)現(xiàn)明顯對乳腺癌生存期有影響的因素;Bcl-2的生存曲線統(tǒng)計量比較接近臨界值,雖然差異無統(tǒng)計學意義,但可觀察到Bcl-2表達者生存期較長的趨勢。多因素Cox模型分析中對腫瘤復發(fā)有影響的因素為HER-2和Bax,對生存期有影響的因素為Bcl-2和Bax,它們可作為判斷乳腺癌預后的獨立影響因素,其中HER-2、Bax表達是判斷預后不良的指標,Bcl-2表達是預后良好的指標(回歸系數(shù)為負值)。多因素分析進一步證實了HER-2、Bax表達者乳腺癌易發(fā)生復發(fā)、轉(zhuǎn)移,Bax、Bcl-2可作為判斷乳腺癌生存期長短的指標,Bax表達預示患者生存較短,Bcl-2表達預示患者生存期較長。解釋此種現(xiàn)象的一種觀點是Bcl-2基因不僅抑制細胞凋亡,而且還延長細胞周期,由此延緩腫瘤細胞增殖,因此Bcl-2基因表達時其總的結(jié)果與好的病理生物學行為有關(guān)。另外一種觀點是Bcl-2蛋白是由雌激素調(diào)節(jié),此蛋白多局限在ER陽性的乳腺癌細胞中,而ER陽性又是內(nèi)分泌治療的必要條件,所以Bcl-2蛋白表達患者預后好可能是由于對激素治療反應(yīng)好所致。單因素分析中為何沒有體現(xiàn)上述指標對總生存率(即生存期)的影響作用,可能是在單因素分析中未控制其它因素對乳腺癌預后的影響,所以統(tǒng)計學上未發(fā)現(xiàn)明顯影響生存期的因素。目前大多數(shù)研究認為HER-2改變常提示腫瘤復發(fā)早,生存期短。本研究中多因素分析顯示HER-2對復發(fā)有明顯影響作用,對生存期的影響作用不明顯,這可能是本研究中病例數(shù)較少,未體現(xiàn)出HER-2對生存期的影響,也有可能是HER-2在評價腫瘤復發(fā)方面比評價生存期更有意義,或者