肝郁氣滯證乳腺增生大鼠模型的建立

肝郁氣滯證乳腺增生大鼠模型的建立

現(xiàn)代醫(yī)學認為，乳房增生是一種非炎癥和腫瘤的增生性疾病。許多國內外學者認為，其病因與分泌功能障礙和心理因素密切相關。這是乳腺癌的危險因素之一。它被認為是早期化療，因此引起了人們的關注。在中醫(yī)文獻中乳腺增生病與“乳癖”的描述相似,在明代,陳實功就認為此病“由思慮傷脾,惱怒傷肝,郁結而成也”,指出本病的發(fā)生與肝氣郁結有關。本研究初步建立了肝郁氣滯證乳腺增生大鼠模型,并觀察了該模型大鼠血清中激素水平的變化,現(xiàn)總結如下:1實驗材料1.1實驗動物SD大鼠,雌性,未孕,體質量180~220g,由南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。合格證號:SYXK(蘇)2002-0053。1.2黃體酮注射液苯甲酸雌二醇注射液,每支2mg,由上海通用藥業(yè)股份有限公司生產,批號:051122;黃體酮注射液,每支20mg,由浙江仙琚制藥股份有限公司生產,批號:050916。E2、P、PRL、T、ACTH放免試劑盒均由南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院提供。1.3高速離心系統(tǒng)自動放免儀由南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院提供;臺式高速離心機由上海安亭科學儀器廠生產;DHG-9053A型電熱恒溫干燥箱由上海醫(yī)用恒溫設備廠生產;DHZ-C型大容量恒溫振蕩器由上海精勝儀器廠生產。2實驗方法2.1模型設計2.1.1外加黃體酮5.按照文獻復制大鼠乳腺增生模型:肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg(體質量),1次/d,連續(xù)20天。繼而改用黃體酮5mg/kg(體質量),1次/d,連續(xù)5天。對照組每只肌注生理鹽水0.2mL,連續(xù)注射25天,停藥后飼養(yǎng)10天。2.1.2教育時間安排按照文獻改進、復制不可預知的慢性應激刺激肝郁氣滯大鼠模型:斷食、斷水24小時各5次;冰水游泳5分鐘,共5次;45℃熱環(huán)境5分鐘,共5次;160次/min水平震蕩30分鐘,共5次;夾尾刺激1分鐘,共5次;24小時明暗顛倒,共5次。上述刺激每日1種,隨機安排,使大鼠不能預知次日的刺激,以避免產生適應,刺激時間共35天。2.2預測模型的復制SD未孕雌性大鼠,正常光照條件,自由飲水、飲食,在本實驗室適應性飼養(yǎng)1周后,隨機分為4組:(1)正常對照組8只,封閉盒整群飼養(yǎng),每日肌注生理鹽水0.2mL;(2)EP組8只,封閉盒整群飼養(yǎng),按2.1.1法復制乳腺增生模型;(3)S組8只,封閉盒單只飼養(yǎng),按2.1.2法復制肝郁氣滯模型;(4)EP+S組8只,封閉盒單只飼養(yǎng),按2.1.1法復制乳腺增生模型,同時按程序施加造模刺激。2.3指標報告2.3.1血清品質測定各組大鼠在末次處理后,禁食12小時,于眼眶后靜脈叢取血2mL,37℃水浴15分鐘,于2000r/min離心15分鐘后分離血清,采用放免法測定血清E2、P、PRL、T含量。2.3.2血漿acth含量測定各組大鼠在末次處理后,禁食12小時,于眼眶后靜脈叢取血1mL,置肝素抗凝管中,及時搖勻防止凝血,于1500r/min離心5分鐘分離血漿,采用放免法測定血漿ACTH含量。2.4統(tǒng)計方法3結果3.1對大鼠血中兩種指標的影響表1顯示,EP組大鼠血中E2、PRL水平升高,P、T水平降低,與正常對照組比較差異明顯(P<0.05);S組大鼠血中E2、ACTH水平升高,與正常對照組比較差異明顯(P<0.05);EP+S組大鼠血中E2、PRL、ACTH水平升高,P、T水平降低,與正常對照組比較差異顯著(P<0.01);EP+S組大鼠血中E2、ACTH水平升高,與EP組相比差異明顯(P<0.05)。4肝郁氣功證模型的構建西醫(yī)認為,周期性的性激素分泌失調與乳腺組織對激素的敏感性增高是乳腺增生的主要發(fā)病機制。一方面,乳腺增生患者體內雌激素分泌增多,孕激素分泌不足;另一方面,患者體內泌乳素水平升高,泌乳素對乳腺組織有直接刺激作用,其還可抑制黃體期孕酮的分泌,刺激雌二醇的合成,從而導致雌孕激素比例失調。在雌激素持續(xù)刺激下,使乳腺組織增殖過度,導致乳腺增生。而中醫(yī)理論認為發(fā)生乳腺增生病是由于肝失疏泄,沖任失調而致氣血運行不暢,氣滯血瘀痰凝結聚而成。古人認為“婦人之病,多起于郁”,這是由婦女易為情志變化的心理特點所決定的。國外文獻報道,情緒的不穩(wěn)定與女性乳房小葉增生有一定關系。近年來,在對乳腺增生及乳腺癌與人的個性的關系進行研究時發(fā)現(xiàn),乳腺增生的患者大多具有緊張、不安、易怒等個性特征。隨著醫(yī)學模式的轉變,乳腺增生病因的研究已突破了“內分泌障礙所致乳腺實質增生”純生物學的定論,而更重視其社會、心理的致病性。應激理論與中醫(yī)七情學說類似,不良生活事件所形成的心理應激的實質是情志病因,同時中醫(yī)認為情志與肝的關系最為密切,在對心理應激的調節(jié)過程中肝起著決定性的作用。慢性應激動物模型也常被用作抑郁癥的動物模型,因此用慢性應激的方法制作肝郁氣滯證模型比較符合中醫(yī)臨床實際。在本研究中,筆者把造模雌鼠孤養(yǎng),同時隨機給予不同應刺激,包括斷食、斷水、冰水游泳、45℃熱環(huán)境、60次/min水平震蕩、夾尾、24小時明暗顛倒。一方面可使動物不能預知未來的刺激,避免適應現(xiàn)象的發(fā)生;另一方面更好地模擬臨床情志異常引發(fā)肝郁氣滯證的過程。傳統(tǒng)的乳腺增生病模型多采用外源性雌激素造模,這僅適用于乳腺增生“病”這個“病”的模型,而“病”“證”結合的動物模型更符合現(xiàn)代中醫(yī)研究的需要。本研究的結果顯示:S組雌鼠血中應激激素ACTH、性激素E2水平升高,與正常對照組比較有明顯的差異,表明本研究所用的不可預知的應激刺激可明顯升高下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸活性,同時可刺激雌性大鼠雌激素的分泌。病癥結合模型組,即EP+S組雌鼠血中E2、PRL、ACTH水平升高,P、T水平降低,與正常對照組有顯著性差異,同時該組大鼠血中E2、ACTH水平升高,與EP組相