草莓汁中農(nóng)藥殘留的提取與富集

草莓汁中農(nóng)藥殘留的提取與富集

1濁點(diǎn)萃取法的應(yīng)用在一定溫度下，親水活性劑溶液的極限濃度大于表面活性劑的流動(dòng)和加熱，導(dǎo)致相分離，并形成兩個(gè)透明相（表面活性劑相和水相）。其中的膠束相可以富集樣品中的待分析組分,這就稱為濁點(diǎn)萃取法(cloudpointextraction,CPE)。濁點(diǎn)萃取法與目標(biāo)物的作用機(jī)理已有不少報(bào)道,但其機(jī)制還沒有完全確定。濁點(diǎn)萃取法與傳統(tǒng)的萃取方法相比具有能夠減少揮發(fā)性有機(jī)溶劑的使用,操作簡單,快速,不需專門的裝置等優(yōu)點(diǎn)。濁點(diǎn)萃取法已經(jīng)應(yīng)用在環(huán)境樣品中金屬離子的測定、蛋白質(zhì)的分離與純化等領(lǐng)域。濁點(diǎn)萃取法作為農(nóng)藥殘留前處理分析方法,報(bào)道不多,其處理的樣品多為水樣。本實(shí)驗(yàn)將這一方法應(yīng)用于草莓汁樣品中農(nóng)藥的提取,并在CPE過程中加入了一定的有機(jī)添加劑,能明顯降低表面活性劑的濁點(diǎn)溫度,常溫下就可以發(fā)生濁點(diǎn)現(xiàn)象,從而避免了熱不穩(wěn)定農(nóng)藥的降解。國際上先后制定了草莓中的多種農(nóng)藥最高殘留限量(MRL),如日本政府規(guī)定的草莓中一些農(nóng)藥的MRL為:克百威為3mg/kg,甲霜靈為1mg/kg,殺撲磷為0.2mg/kg,敵草隆為0.05mg/kg,烯酰嗎啉為5mg/kg等。從草莓汁中濁點(diǎn)萃取以上7種農(nóng)藥,然后用HPLC方法檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本方法符合以上7種農(nóng)藥殘留檢測要求,能夠?qū)锌赡艽嬖诘倪@7種農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測。2實(shí)驗(yàn)部分2.1u3000藥品和溶液LC-20AT高效液相色譜儀、SPD-M20A檢測器、LCsolution工作站(日本島津公司);色譜柱為LichrospherODSC18(250mm×46mm,5μm);HH-S26S數(shù)顯恒溫水浴鍋;SUPELCO固相萃取儀?？税偻?、異丙威、甲霜靈、殺撲磷、敵草隆、烯酰嗎啉和苯噻酰草胺純度為94%~99%(江蘇省農(nóng)藥研究所);上述7種農(nóng)藥均用甲醇溶解,配制成濃度是400mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,在冰箱中保存;聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯(Tween-20),配制成30%(V/V)的水溶液;Na2SO4、CuSO4、正丁醇、丙酮均為分析純,甲醇為色譜純,實(shí)驗(yàn)用水均為二次重蒸水。2.2樣品處理2.2.1正丁醇、1.8gna2so4模型取市售草莓汁樣品10mL于25mL刻度試管中,分別加入1.5mL30%Tween-20水溶液、0.15gCuSO4,用二次蒸餾水定容至15mL,在70℃水浴中加熱5min,冷卻至室溫,過0.45μm濾膜,將濾液轉(zhuǎn)入20mL離心管中,再分別加入0.75mL正丁醇、1.8gNa2SO4,搖勻,然后在50℃水浴中平衡40min,可得到透明的兩相;下層為水相,上層為表面活性劑富集相,農(nóng)藥即被增溶于該相中。吸去水相,剩余表面活性劑膠束層的體積約為0.5mL,即所測樣品的濃度提高了20倍。2.2.2分液濃縮、蒸發(fā)取10mL市售草莓汁樣品于250mL具塞三角瓶中,加入50mL丙酮,超聲提取15min,轉(zhuǎn)移到分液漏斗中,過濾。再用50mL丙酮分?jǐn)?shù)次洗滌殘?jiān)?并將洗液倒入分液漏斗中,合并濾液,并用無水硫酸鈉干燥,然后將提取液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約1mL,待凈化。固相萃取柱經(jīng)預(yù)活化后,加樣,用5mL甲醇在重力條件下洗柱,最后定容至5mL,待用。2.3檢測波長和v水液相色譜紫外檢測條件:流動(dòng)相為V(甲醇)∶V(水)=70∶30,用前過0.45μm濾膜,流速為0.6mL/min,檢測波長為215nm;柱溫為室溫,進(jìn)樣量為20μL。3結(jié)果與討論3.1樣品檢測波長的確定研究了在不同的流動(dòng)相配比下7種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液的分離,結(jié)果表明,以70%甲醇作流動(dòng)相時(shí),只有峰2和峰3沒有達(dá)到基線分離,其它幾種農(nóng)藥都能較好的分離。在215nm波長下,每種農(nóng)藥均有適宜的吸收強(qiáng)度,所以實(shí)驗(yàn)選擇的檢測波長為215nm,結(jié)果見圖1a。在草莓汁樣品中加入以上7種農(nóng)藥,按2.2.1方法處理,按2.3色譜條件分離檢測,結(jié)果見圖1b。從圖1a和圖1b比較可以看出,CPE處理過程對(duì)這7種農(nóng)藥的色譜分析幾乎無影響。3.2樣品前處理?xiàng)l件的選擇3.2.1回收率的測定為了考察表面活性劑濃度對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響,改變Tween-20的濃度,其濃度為2%~7%(V/V)。實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)表面活性劑濃度為3%時(shí),各農(nóng)藥的回收率達(dá)到最大;當(dāng)表面活性劑濃度再增大,對(duì)回收率基本沒有影響,且在較大濃度時(shí),增大了表面活性劑富集相的粘度,不利于色譜分離與分析,在以后實(shí)驗(yàn)中,Tween-20的濃度為3%(V/V)。3.2.2tween-20用量對(duì)回收率的影響實(shí)驗(yàn)了Na2SO4和正丁醇兩種添加劑對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響,結(jié)果表明,添加劑能夠加快相分離行為、降低濁點(diǎn)萃取體系的溫度。在加入Na2SO4和正丁醇后,Tween-20在常溫下即能夠達(dá)到濁點(diǎn),產(chǎn)生相的分離。但是較大量的添加劑能夠降低富集倍數(shù),而對(duì)回收率的影響較小。實(shí)驗(yàn)中所用Na2SO4、正丁醇的濃度分別為12%(m/V)和5%(V/V)。3.2.3水浴中的衡時(shí)間實(shí)驗(yàn)探討了不同平衡時(shí)間對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響。樣品在優(yōu)化條件下處理后,改變平衡時(shí)間,在水浴中分別平衡20~70min。當(dāng)平衡時(shí)間為40min時(shí),各個(gè)農(nóng)藥的回收率達(dá)到最大;當(dāng)平衡時(shí)間過長,會(huì)導(dǎo)致濁點(diǎn)萃取向相反方向變化,表面活性劑相又慢慢消失。在兩相完全分離的情況下,平衡40min即可。3.2.4影響大的因素溫度對(duì)于表面活性劑膠束的性質(zhì),尤其是分相后形成的凝聚相體積和含水量均有較大的影響。樣品按照前面優(yōu)化條件處理后,在20~70℃水浴中分別平衡40min。實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)平衡溫度達(dá)到50℃時(shí),各個(gè)農(nóng)藥的回收率均達(dá)到最大;高于50℃后,回收率基本保持不變,故實(shí)驗(yàn)采用的濁點(diǎn)萃取溫度為50℃。3.3分析參數(shù)的確定按照2.2.1節(jié)的方法,對(duì)7種農(nóng)藥的定量范圍和標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行檢測,以各農(nóng)藥的峰面積(Y)對(duì)濃度(X,mg/kg)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,濁點(diǎn)萃取法的各種分析參數(shù)見表1。同時(shí)做樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn),每個(gè)濃度平行實(shí)驗(yàn)9次,結(jié)果見表2。按照2.2.2方法,計(jì)算固相萃取法的回收率,結(jié)果見表3。比較表2、表3可以看出,濁點(diǎn)萃取法對(duì)7種農(nóng)藥的回收率比固相萃取法的回收率略高,可能是因?yàn)楣滔噍腿》ú僮鞑襟E較多、對(duì)被分析物造成損失,并