農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之課件

農(nóng)殘檢測常用方法技術(shù)要點安徽省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗測試中心（合肥）★農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)系列之《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之主要內(nèi)容速測方法3準(zhǔn)確定性定量檢測法4當(dāng)前常用檢測方法2前言1《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之以前農(nóng)殘檢測方法的頒布：國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會頒布國家標(biāo)準(zhǔn)（GB）;農(nóng)業(yè)部頒布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY）;國家進出口商品檢驗檢疫總局頒布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，編號為SN。已頒布標(biāo)準(zhǔn)截至目前，已頒布的農(nóng)產(chǎn)品和食品農(nóng)藥殘留檢測方法標(biāo)準(zhǔn)共有390多個。其中：國家標(biāo)準(zhǔn)92個，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)35個，商檢行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)約270個。前言《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之根據(jù)2009年6月1日實施的《中華人民共和國食品安全法》第二十一條和第二十二條的規(guī)定，今后凡涉及食品安全的標(biāo)準(zhǔn)（八個方面），統(tǒng)一由國務(wù)院衛(wèi)生行政部門部制定和頒布，國務(wù)院標(biāo)準(zhǔn)化行政部門提供國家標(biāo)準(zhǔn)編號。對現(xiàn)行的食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)、食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、食品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)食品的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中強制執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)予以整合，統(tǒng)一公布為食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)。農(nóng)殘檢測方法標(biāo)準(zhǔn)全部統(tǒng)一為食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)。前言《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之一、當(dāng)前常用檢測方法《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之NY/T761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》QuEChERSMethod（美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究服務(wù)中心）修訂方法NY/T761-2008、GB/T19648-2006《水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留的測定氣相色譜-質(zhì)譜法》、GB/T20769-2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》等方法糅合在一起的實施細(xì)則2.準(zhǔn)確定性定量檢測法一、當(dāng)前常用檢測方法《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之二、速測方法1．快速檢測程序試樣檢測

陰性陽性復(fù)測（兩次以上）陰性陽性根據(jù)市場規(guī)定處理準(zhǔn)確定量定性分析《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之二、速測方法

GB/T5009.199-2003NY/T448-2001適用范圍

蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）

適用葉菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除蘿卜、茭白等)方法速測卡法(紙片法)和酶抑制率法(分光光度法)酶抑制率法(分光光度法)波長412nm410±3nm酶乙酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）（3min吸光度變化值＞0.3，4℃冰箱保存不超過4天）丁酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）3min吸光度變化值0.4—0.8之間底物硫代乙酰膽堿（蒸餾水溶解，4℃冰箱保存不超過2周）碘化硫代丁酰膽堿（BTCI）（用pH8磷酸緩沖液溶解）顯色劑二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氫鈉緩沖液溶液，4℃冰箱保存二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）緩沖液溶解步驟取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜果取表皮帶肉，剪成1cm左右見方碎片。取樣1g置于小燒杯內(nèi)，加入5mL緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出并靜置3-5分鐘；于小試管內(nèi)分別加入2.5mL樣本提取液、100uL酶液、100uL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上，加入100uL底物，應(yīng)立即倒入儀器比色皿中，記錄3min吸光度變化值。取2g切碎的樣本（非葉菜類取4g）放入提取瓶內(nèi)，加入20mL緩沖液，振蕩1-2min，倒出并靜置3-5分鐘；于小試管內(nèi)分別加入50uL酶液、3mL樣本提取液、50uL顯色劑，于37-38℃下放置30min后分別加入50uL底物，倒入比色皿中，用儀器測定。結(jié)果抑制率≥50%：陽性（陽性樣品需要重復(fù)檢測2次以上，若不合格,用色譜、質(zhì)譜等進一步定性定量分析）抑制率≥70%：陽性（陽性樣品應(yīng)有2次以上的重復(fù)檢測，若不合格,用色譜、質(zhì)譜等進一步定性定量分析）備注1、當(dāng)溫度低于37℃時，酶反應(yīng)速度放慢，加入酶液和顯色劑后反應(yīng)時間應(yīng)該延長，延長時間的確定，應(yīng)以空白對照測試3min吸光度變化值＞0.3方可進行下一步操作。2、3min吸光度變化值＜0.3原因：①酶的活性不夠；②酶的活性太低。3、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。1、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。2、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪磷等農(nóng)藥不太靈敏，檢出濃度均在10mg/kg以上?！掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之二、速測方法2．結(jié)果計算抑制率（%）=

抑制率：酶被抑制的程度△Ac

—對照組3min后與3min前吸光值之差;△As

—樣本3min后與3min前吸光值之差?！掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之二、速測方法3．注意事項2011年首屆全省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)人員大比武現(xiàn)場操作評分細(xì)則（農(nóng)殘速測類）

(2011年)中對取樣部位、處理方法等內(nèi)容進行詳細(xì)的分項打分，這些打分項都是平時檢測中需要注意的地方。適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）；農(nóng)藥：有機磷和氨基甲酸酯類。所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對結(jié)果可能存在影響。一批上機樣品同時檢測，共用一個對照。檢測前一定要檢查酶液活性（3min吸光度變化值＞0.3）；酶液反復(fù)解凍最多不超過兩次,否則會影響酶活性?！掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之二、速測方法4．如何看待農(nóng)殘快速測定方法何為快速檢測方法？

指檢測速度相對較快、便于現(xiàn)場篩查的檢測方法。其主要適合于定性和半定量測定，檢測準(zhǔn)確度相對要差一些。法律地位

《中華人民共和國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》第三十六條規(guī)定“……采用國務(wù)院農(nóng)業(yè)行政主管部門會同有關(guān)部門認(rèn)定的快速檢測方法進行農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督抽查檢測，被抽查人對檢測結(jié)果有異議的，可以自收到檢測結(jié)果時起四小時內(nèi)申請復(fù)檢。復(fù)檢不得采用快速檢測方法?！?/p>

《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之二、速測方法5．農(nóng)殘速測與色譜、質(zhì)譜等方法的結(jié)果比較時間：從2005年至2007年。項目：農(nóng)業(yè)部開展的省份間農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全例行監(jiān)測互查。要求：承擔(dān)任務(wù)的37個部級中心分別用農(nóng)殘速測進行初步篩查，并把所有樣品用NY/T761等方法進行色譜、質(zhì)譜定量檢測。目的：想驗證速測與色譜檢測的相關(guān)性，如果有相關(guān)性，就可以先用速測初步篩查，然后把陽性（超標(biāo)的）樣品再用色譜等方法準(zhǔn)確定量，那樣可以大大減少工作量。結(jié)論：速測結(jié)果和色譜等定量檢測結(jié)果幾乎沒有任何相關(guān)性。說白了就是速測超標(biāo)的，色譜檢測不出來，速測不超標(biāo)的，色譜可能會超標(biāo)。因為沒有什么相關(guān)性，農(nóng)業(yè)部在省部級檢測中心這個層級最終導(dǎo)致放棄速測方法?！铩锼裕贉y僅僅是法律認(rèn)可的一項工作，不要較真，如被檢方有異議，更不能拿速測陽性結(jié)果進行處罰和仲裁?！掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之二、速測方法6．為什么采用農(nóng)殘快速檢測法

（非官方解釋——最實在的理解）①鮮活農(nóng)產(chǎn)品不宜長時間保存，快速檢測方法克服了當(dāng)前所有準(zhǔn)確定量方法（色譜、質(zhì)譜方法等）檢測周期過長的問題。【時限性考慮】②我國研究院所和各地市針對特殊樣品，采用酶抑制法取得了與準(zhǔn)確定量方法（色譜、質(zhì)譜方法等）一致性結(jié)果。【所謂的科學(xué)依據(jù)】③快速檢測方法是經(jīng)過農(nóng)業(yè)部會同有關(guān)部門認(rèn)定發(fā)布的，經(jīng)法律認(rèn)可的方法，具有權(quán)威性和統(tǒng)一性（不過可靠性談不上）。【法律依據(jù)】④快速檢測方法所需設(shè)備簡單，易掌握，平時運營成本相對較低，選用該法主要是從我國從業(yè)人員素質(zhì)、經(jīng)濟狀況的國情出發(fā)來考慮的（不可能要求大家都去買質(zhì)譜、色譜等設(shè)備）?！痉椒ń?jīng)濟性、操控性】⑤明知快速檢測方法準(zhǔn)確度不高，選用該法，主要是在縣級、鄉(xiāng)鎮(zhèn)等一級進行普及，讓經(jīng)營戶、老百姓發(fā)現(xiàn)有人在抓農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，更主要的是起到震懾作用?！菊饝刈饔谩俊掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之【案例】河南省鄭州市農(nóng)殘快速檢測網(wǎng)絡(luò)《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之【案例】河南省鄭州市農(nóng)殘快速檢測網(wǎng)絡(luò)《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之三、準(zhǔn)確定性定量檢測法1．基本步驟：檢測前工作準(zhǔn)備提取凈化、濃縮定容標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和測定結(jié)果計算《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之三、準(zhǔn)確定性定量檢測法2．提取條件的優(yōu)化：QuEChERS方法選擇單一乙腈為提取溶劑。含水量低或含糖量高的樣品應(yīng)加入一定量的水后再進行提取，以提高提取效率。乙腈對N-三鹵甲硫基殺菌劑類農(nóng)藥，具有降解作用，如克菌丹、抑菌靈等；通過加入1%的醋酸，調(diào)節(jié)pH值，能夠抑制上述農(nóng)藥的分解?！掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之三、準(zhǔn)確定性定量檢測法3．鹽析：鹽析劑種類：氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；鹽析劑能與水結(jié)合使游離水分子減少，減少了農(nóng)藥在水相中的溶解度；鹽析劑能減少有機溶劑在水中的溶解度；鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離。《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之三、準(zhǔn)確定性定量檢測法4．脫水劑的選擇：無水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高3倍。無水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進農(nóng)藥的萃取。無機鹽加入量（g）乙腈中的水分（加入前，%）乙腈中的水分（加入后，%）NaCl2g/27mL276.0Na2SO40.8g/4mL63.9MgSO40.8g/4mL60.6《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之三、準(zhǔn)確定性定量檢測法5．凈化劑的選擇：PSA提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質(zhì)干擾；主要用來消除各種有機酸、色素以及一些糖和脂肪酸。為了減少儀器的維護，往往在PSA的基礎(chǔ)上加C18凈化。PSA可去除90％以上的脂肪酸和50％左右的色素。GCB可去除90％以上的色素，但對脂肪酸的凈化能力僅有10％左右。對于一些含色素高的樣品，將兩者聯(lián)合使用。但用量要適當(dāng)，否則會吸附一些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，影響回收率，如六氯苯、百菌清等。凈化劑去雜種類PSA糖、有機酸、色素等C18油脂、非極性干擾物等GCB色素、甾醇、非極性干擾物等《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法1：NY/T761-2008方法名稱及來源：《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法》NY/T761-2008。農(nóng)藥種類和個數(shù)：有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥等共104種。使用儀器：GC、LC?！掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之檢測步驟：加入2mL丙酮丙酮定容至5.0mLGC檢測（FPD）加入2mL正己烷5mL丙酮＋正己烷(10＋90)淋洗，重復(fù)一次依次5mL丙酮+正己烷(10+90),5mL正己烷預(yù)淋弗羅里矽柱50℃水浴氮吹近干正己烷定容5.0mLGC檢測（ECD）加入2mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)2mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)淋洗，重復(fù)一次4mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)預(yù)淋氨基柱50℃

水浴氮吹近干甲醇定容2.50mLHPLC檢測（柱后+熒光）過2μm濾膜25g樣品，加入50mL乙腈高速勻漿2min過濾到添加5~7g氯化鈉的100mL具塞量筒劇烈震蕩1min后靜置30min（實踐中10min即可）分取10mL有機相，旋蒸近干，洗耳球吹干或80℃水浴氮氣揮干方法1：NY/T761-2008《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法方法名稱及來源：

NY/T761-2008、GB/T19648-2006和GB/T20769-2008等，其中以GB/T19648-2006為主。農(nóng)藥種類和個數(shù)：有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和苯并咪唑類農(nóng)藥等800多種。使用儀器：

GC、LC、GC-MS/MS和LC-MS/MS。《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之檢測步驟：所有洗脫液氮吹儀吹干；或旋蒸近干，洗耳球吹干5mL乙腈+甲苯預(yù)淋石墨化炭黑氨基柱（色素少，可用氨基柱代替）丙酮定容5.0mL移取2.5mL氮吹儀吹干，正己烷定容2.5mLGC-MS/MS和GC檢測用2mL乙腈＋甲苯(3+1)涮洗濃縮瓶并倒入SPE小柱，重復(fù)2次剩余約20mL乙腈+甲苯分次或1次倒入，淋洗小柱移取2.5mL氮吹儀吹干，用甲醇+水（1+1）定容2.5mLLC-MS/MS和HPLC檢測過0.22μm濾膜25g樣品，加入50mL乙腈高速勻漿2min過濾到添加5~7g氯化鈉的100mL具塞量筒中劇烈震蕩1min后靜置30min（實踐中10min即可）分取10mL有機相，旋蒸或50℃水浴氮氣至近干，加入2mL乙腈＋甲苯(3+1)洗脫液用量約為25mL方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法3：優(yōu)化后的QuEChERSMethod方法名稱及來源：在美國農(nóng)業(yè)部的QuEChERSMethod基礎(chǔ)上做了優(yōu)化和調(diào)整。

農(nóng)藥種類：有機磷，有機氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥等多殘留檢測。使用儀器：GC-MS/MS、LC/MS/MS?！掇r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法3：優(yōu)化后的QuEChERSMethod原理：

與固相萃取(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達到除雜凈化的目的。優(yōu)點：

⑴回收率高，對大量極性及揮發(fā)性的農(nóng)藥品種的回收率大于85%；⑵精確度和準(zhǔn)確度高；⑶可分析的農(nóng)藥范圍廣；⑷速度快；⑸溶劑使用量少，污染小，價格低廉且不使用含氯化物溶劑；⑹操作簡便；⑺使用很少的玻璃器皿，裝置簡單。《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之方法3：優(yōu)化后的Qu