熒光分析測定維生素c

熒光分析法測定維生素C維生素C及維生素C的測定原理熒光分析法測定維生素C實驗熒光分析法測定維生素C應用講解人：賀政軒1精選可編輯ppt一、維生素C及維生素的測定原理1.1維生素C

維生素C又名抗壞血酸,是維持機體正常生理功能的重要維生素之一,而人體不能自身合成，只能從食物和藥物中攝取，因此，食品、藥物中維生素C的分析具有重要意義。1.2維生素C測定方法

維生素C的測定常用的方法有光度法

、電化學法、滴定法、酶法、色譜法等。

本實驗提出了一種新的測定維生素C的熒光分析方法：維生素C被Cu2

+氧化為脫氫

抗壞血酸，再與苯甲酸及十六烷基三甲基溴化銨產(chǎn)生熒光協(xié)同增敏作用，通過對體系熒光強度的測定進行維生素C的定量分析。2精選可編輯ppt二、熒光分析法測定維生素C實驗

1實驗1.1主要儀器與試劑

分子發(fā)光儀:LS-55型

酸度計:pH-211型

榨汁機:CW-JE04型

電熱恒溫水浴鍋:HH.SY11-Ni1型

CuSO4溶液:2.0×10-3gm/L

十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)溶液:6.0×10-4g/mL苯甲酸溶液：1.0×10-4gm/L

維生素C標準儲備液:5.0×10-4g/mL,2～8℃（避光保存）；

維生素C標準溶液:1.0×10-5g/mL,2～8℃（避光保存）；

NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液:pH=6.0；

3精選可編輯ppt1.2實驗步驟

（1）配置待測樣品及空白對照

在25mL比色管中依次加入0.6mLCuSO4溶液，2.0mL十六烷基三甲基溴化銨溶液，2.0mL苯甲酸溶液，一定體積的維生素C標準溶液，5.0mLNaOH-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液,用蒸餾水定容，搖勻；以不含維生素C溶液為

空白對照。（2）水浴加熱

在35℃恒溫水浴中加熱30min，

將溶液流水冷卻至室溫。（3）熒光分析

將待測樣品放置于樣品架上，設定激發(fā)波長為308nm，發(fā)射波長為408nm，測量熒光強度F，以不含維生素C的試劑空白為F0

，計算F測=F-F0

。4精選可編輯ppt2結果與討論

2.1激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

取3.0mL維生素C標準溶液,按實驗方法進行操作,分別在290～330nm、360～460nm內掃描得到激發(fā)光譜和發(fā)射光譜如圖1、圖2所示。從圖1、圖2中可看出,當激發(fā)波長為308nm,發(fā)射波長為408nm時體系的熒光強度最大,試劑空白的熒光值比較低且穩(wěn)定,故本實驗選擇激發(fā)波長為308nm,發(fā)射波長為408nm。

1—Cu2

++BA+緩沖溶液+CTMAB;2—Cu2

++BA+維生素C+緩沖溶液+CTMAB1—Cu2

++BA+緩沖溶液+CTMAB;2—Cu2

++BA+維生素C+緩沖溶液+CTMAB激發(fā)光譜發(fā)射光譜5精選可編輯ppt2.2試劑加入順序

按照實驗方法操作,在各試劑加入量相同的情況下,試驗了試劑的不同加入順序對熒光強度的影響。試驗結果表明,當所加試劑順序依次為CuSO4溶液、苯甲酸溶液、維生素C標準溶液、NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液時,體系的熒光強度最大，因此選用此加入順序為最佳試劑加入順序。6精選可編輯ppt2.3

緩沖溶液

溶液的pH值對體系熒光強度有較大的影響，試驗了不同的pH值對熒光強度的影響。由pH值—熒光強度的曲線可知,

當pH

值為5.9

～

6.2

時,熒光強度達到最大值且比較穩(wěn)定,因此確定最佳pH值為

6.0。緩沖溶液的種類對體系的熒光強度也有一定的影響。試驗了以下幾種pH

值為6.0

的緩沖溶液:NaOH-KH2PO4、KH2PO4-硼砂、KH2PO4-Na2HPO4、NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀、Na2HPO4-檸檬

酸、NaOH-檸檬酸鈉、HAc-NaAc等。試驗結果表明,當所加的緩沖溶液為NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀時,熒光強度最大且穩(wěn)定。因此本實驗選擇NaOH-

鄰苯二甲酸氫鉀為緩沖溶液,其最佳用量為5.0mL。2.4

加熱溫度和加熱時間

試驗了不同溫度對體系熒光強度的影響。結果表明,

當加熱溫度為35℃時，既有利于提高體系反應速度，又不使反應物與產(chǎn)物結構受到破壞。改變加熱時間進行試驗,結果發(fā)現(xiàn)，在35℃水浴中加熱30min，體系熒光強度達到最大值且相對穩(wěn)定。

7精選可編輯ppt2.5

硫酸銅和苯甲酸的用量其它條件不變，試驗了硫酸銅和苯甲酸的用量對體系熒光強度的影響。結果表明，當硫酸銅的用量為0.6mL、苯甲酸的用量為2.0mL

時，體系熒光強度最大。2.6

表面活性劑

分別試驗了十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)、十二烷基磺酸鈉及β

-環(huán)糊精對體系熒光強度的影響。結果表明,表面活性劑對體系的熒光強度有一定的增敏效果，其中CTMAB

對體系的增敏效果最好。進一步試驗了CTMAB

的用量對體系的熒光強度的影響,

當CTMAB

的用量為2.0mL

時,

體系熒光強度最大。

8精選可編輯ppt三、熒光分析法測定維生素C應用

樣品測定

取一片維生素C藥片，研細，混勻，準確稱取0.1520g溶于二次蒸餾水中

，轉移至

500mL容量

瓶中定容，配成水溶液。再準確移取10mL此溶液，將其稀釋成100mL的溶液，作為樣品稀釋液。

對樣品稀釋液進行測定并做加標回收試驗。

同時利用本法對西紅柿和果珍進行測定。準確稱取一定量的果珍，將其配成100mL的溶液。將清洗干凈的西紅柿榨汁，稱取一定量的西紅柿汁，

將其配成100

mL的溶液。

其它步驟和維生素

C藥片的測定方法

相同。

9精選可編輯ppt樣品測定結果列于表3表3

樣品測定結果(n

=3)。由表3可知，用熒光分析法測定維生素C藥片、西紅柿和果珍中維生素C的含量，回收率為96.

7%～

100.5%準確度較高。表3樣品測定結果(n=3)

熒光分析法測定維生素C具有操作簡單,精密度高,檢出限低等優(yōu)點,該法可以應用于水果、蔬菜和藥物中維生素C的檢測,適于推廣。10精選可編輯ppt謝謝觀賞！

Theend11精選可編輯ppt利用某些物質受光照射時所發(fā)生的熒光特性和強度，進行物質的定性分析或定量分析的方法，稱為熒光光譜分析。使激發(fā)光的波長和強度保持不變，而讓熒光物質所發(fā)生的熒光通過發(fā)射單色器照射于檢測器上，調節(jié)發(fā)射單色器至各種不同波長