不同頻率電針對大鼠急性佐劑性關(guān)節(jié)炎的影響

不同頻率電針對大鼠急性佐劑性關(guān)節(jié)炎的影響

以往的許多研究證明，大腦中的內(nèi)諾基諾因堿化合物具有針灸和鎮(zhèn)痛作用，不同頻率的電針具有不同的鎮(zhèn)痛效果和神經(jīng)化學(xué)機(jī)制。然而,這些研究多在毫無病痛的“正?！眲游锝o予短暫的傷害性刺激造成疼痛模型進(jìn)行的。但這種傷害性刺激所引起的疼痛與臨床痛證有所不同,因為前者只是伴隨著傷害性刺激而出現(xiàn),后者則伴隨著病變或機(jī)體功能紊亂而存在。近年來不少研究者采用佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠作為疼痛模型進(jìn)行研究,并認(rèn)為用這種模型進(jìn)行針刺鎮(zhèn)痛的研究更能反映疼痛和鎮(zhèn)痛過程的本質(zhì)。實驗還證明,針刺對關(guān)節(jié)炎大鼠具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用,而且中樞某些神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)節(jié)可能參與這些作用。我們觀察了兩種頻率(5Hz和100Hz)電針對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的鎮(zhèn)痛作用及對下丘腦、垂體、腎上腺、腰髓內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量的影響,以便探討β-內(nèi)啡肽與不同頻率電針鎮(zhèn)痛的關(guān)系及在電針鎮(zhèn)痛中的作用。1材料和方法1.1大鼠外踝關(guān)節(jié)組織中減毒結(jié)核的制備方法2.選用Wistar大鼠,雌雄不拘。體重180~250g,以Freund氏完全佐劑(液體石蠟與無水羊毛脂按2∶1比例加溫至溶解,研磨混勻,每ml加1mg經(jīng)過烘干磨碎的減毒結(jié)核桿菌)100μl,注入大鼠右后肢內(nèi)踝關(guān)節(jié)周圍組織中,20~24小時后實驗,均在上午8:30~10:30進(jìn)行。1.2針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng)測定64只動物隨機(jī)分成正常對照組、致炎對照組、致炎+5Hz電針組、致炎+100Hz電針組。除去健康不良動物,每組動物數(shù)分別為15、13、16、13只。實驗時將動物捆綁在特制鼠架上,以尖端1mm彈簧壓力計按壓右踝關(guān)節(jié)周圍組織,彈簧壓力計起始刻度為120g,每增加一格壓力增加20g,最大施力不超過7格,以免損傷動物。以動物縮肢時刻度為痛閾值,基礎(chǔ)痛閾為兩次痛閾平均值,時間間隔5分鐘。第二次基礎(chǔ)痛閾測定后立即電針。電針穴位為患側(cè)“陽陵泉”穴與同側(cè)前肢“手三里”穴,用導(dǎo)線與57-6D型電針儀連接,頻率分別為5Hz和100Hz,強度(負(fù)載)約3V,連續(xù)波,波寬0.4ms,電針30分鐘,電針組每10分鐘停針測痛1次,共測3次,以3次痛閾平均值比基礎(chǔ)痛閾的百分率作為針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng)。正常組與致炎組除不電針外,余處理與電針組同。1.3免疫組化處理電針完畢后立即斷頭,取全腦、垂體、雙腎上腺、腰髓,放入沸生理鹽水中,煮4~5分鐘取出,按照Glowinski等人方法取出下丘腦。下丘腦、垂體、腰髓稱重后置于玻璃勻漿管中,加入1NHCl1ml,充分勻漿后在室溫中放置100分鐘,然后加入1NNaOH1ml,離心取上清,低溫(-25℃)保存待測。腎上腺稱重后(先去粘膜)加入1mlHCl充分勻漿,勻漿液倒入塑料管中,再用1ml蒸餾水沖洗勻漿器,合并到塑料管中,離心取上清,-25℃保存待測。β-內(nèi)啡肽放免藥盒由第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室提供,測定按說明書操作。1.4t檢驗及相關(guān)分析全部數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,將實驗組與相應(yīng)對照組進(jìn)行t檢驗,并對部分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析。由于動物健康及取材不慎、樣品損壞等原因各組樣品數(shù)有差異。2結(jié)果2.1致炎+5x電針前后痛閾比較致炎20~24小時,大鼠右后踝關(guān)節(jié)周圍紅腫,上可達(dá)腿,下可至足面,出現(xiàn)跛行,患足不能著地。致炎后局部痛閾下降。電針可明顯提高關(guān)節(jié)炎大鼠局部壓力-縮肢閾。致炎+5Hz電針組痛閾較針前提高45.3±4.7%(P<0.01);致炎+100Hz電針組痛閾較針前提高42.1±4.5%(P<0.01),兩種頻率均能提高關(guān)節(jié)炎大鼠痛閾,兩者間差異無明顯意義(P>0.05),見表1。2.2電針與痛閾百分率正常組大鼠下丘腦β-內(nèi)啡肽含量為48.1±18.9pg/mg組織濕重,致炎組為29.1±11.0pg/mg組織濕重,致炎組較正常組雖有下降,但未達(dá)統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表2。致炎+5Hz電針組下丘腦β-內(nèi)啡肽含量為81.7±18.3pg/mg組織濕重,致炎+100Hz組為71.3±15.8pg/mg組織濕重,與致炎組相比,均有顯著性升高(P<0.05),兩種頻率間差異無顯著意義(P>0.05),見表2。兩種頻率電針升高痛閾百分率與下丘腦β-內(nèi)啡肽含量作相關(guān)性分析,5Hz針效與β-內(nèi)啡肽相關(guān)系數(shù)為r=0.86(P<0.01),回歸方程y=4.6x-129.2(見圖1);100Hz針效與β-內(nèi)啡肽相關(guān)系數(shù)為r=0.78(P<0.01),回歸方程y=5.7x-130.0(圖2)。即兩種頻率針效與下丘腦β-內(nèi)啡肽含量間顯著相關(guān)。2.3各組大鼠腰髓-內(nèi)啡肽表達(dá)情況正常組垂體β-內(nèi)啡肽含量為459.5±75.9pg/mg組織濕重,致炎組垂體β-內(nèi)啡肽為370.5±90.2pg/mg組織濕重,致炎組雖較正常組有下降,但其差異未達(dá)統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表2。正常組腎上腺β-內(nèi)啡肽含量為19.4±11.7pg/mg組織濕重,致炎組為32.7±14.1pg/mg組織濕重,雖較正常組有升高,但差異未達(dá)統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表2。正常組腰髓β-內(nèi)啡肽含量為2.0±0.6pg/mg組織濕重,致炎組為0.6±0.3pg/mg組織濕重,雖較正常組有下降,但差異未達(dá)統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表2。致炎+5Hz電針組垂體β-內(nèi)啡肽為437.8±97.8pg/mg組織濕重,腎上腺β-內(nèi)啡肽為32.5±12.0pg/mg組織濕重,腰髓為2.9±1.4pg/mg組織濕重,與正常組或致炎組相比,其差異均無顯著意義(P>0.05),見表2。致炎+100Hz電針組垂體β-內(nèi)啡肽為228.5±37.5pg/mg組織濕重,腎上腺為6.5±2.3pg/mg組織濕重,腰髓為0.4±0.2pg/mg組織濕重,與正常組或致炎組相比,其差異均無顯著意義(P>0.05),見表2。3內(nèi)-內(nèi)啡肽在針刺鎮(zhèn)痛中的作用已有實驗證明,電針可以明顯提高關(guān)節(jié)炎大鼠下丘腦和垂體甲腦啡肽含量;靜脈或腹腔注射納洛酮能翻轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)炎大鼠耳針和電針的鎮(zhèn)痛作用,說明內(nèi)源性阿片樣系統(tǒng)參與關(guān)節(jié)炎大鼠的針刺鎮(zhèn)痛機(jī)制。本實驗觀察到5Hz和100Hz兩種頻率電針對急性實驗性關(guān)節(jié)炎大鼠均有明顯的鎮(zhèn)痛作用,而且可以顯著升高下丘腦β-內(nèi)啡肽的含量,這兩種頻率電針的鎮(zhèn)痛作用均與下丘腦內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量升高有顯著的相關(guān)性,說明下丘腦內(nèi)β-內(nèi)啡肽參與這兩種頻率電針的鎮(zhèn)痛作用。但這兩種頻率電針間的鎮(zhèn)痛和升高下丘腦β-內(nèi)啡肽含量的作用沒有明顯差異。實驗沒有發(fā)現(xiàn)這兩種頻率電針引起垂體、腰髓和腎上腺內(nèi)β-內(nèi)啡肽含量的明顯變化。關(guān)于下丘腦在針刺鎮(zhèn)痛中的作用,鄒岡等人用Halazz小刀環(huán)切法將下丘腦和其它腦區(qū)游離,觀察到下丘腦游離可以削弱,但不能完全取消針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng),認(rèn)為下丘腦參與針刺鎮(zhèn)痛過程。有人進(jìn)一步證明下丘腦內(nèi)甲啡肽和亮啡肽可能在電針鎮(zhèn)痛中具有重要作用;針刺鎮(zhèn)痛可能部分通過下丘腦室旁核、視上核和弓狀核內(nèi)β-內(nèi)啡肽實現(xiàn)的。血液中的β-內(nèi)啡肽主要來源于垂體。北出利勝等人報道,在針麻過程中沒有看到血液中β-內(nèi)啡肽濃度明顯變化以及它們與痛閾的相互關(guān)系,似乎排除了垂體中β-內(nèi)啡肽參與針刺