慢性酒精中毒大鼠腦啡肽與水迷宮成績的關(guān)系

慢性酒精中毒大鼠腦啡肽與水迷宮成績的關(guān)系

在本研究中，我們使用了大鼠慢性酒精中毒模型，并使用了一種莫哈布西翁法來觀察諾基諾韋恩對慢性酒精中毒大鼠學(xué)習(xí)和儲存能力的影響。此外，在放射免疫法中，我們檢測了不同腦區(qū)域中甲腦鈉和黎明腦咖啡因的含量變化。研究了參與慢性酒精中毒后的氧化神經(jīng)機制。材料和方法一、分組及處理方法3周齡雄性SD大鼠,體質(zhì)量80～110g。隨機分為4個組:A飲酒/生理鹽水組、B酒精/納洛酮處理組、C飲水/生理鹽水組,D飲水/納洛酮處理組;各10只。二、方法1.慢性酒精中毒模型的建立A、B飲酒組以酒精水溶液作為大鼠唯一水來源,以6%酒精濃度開始,逐日遞增1%至15%以后一直維持該濃度持續(xù)8周。2.給藥第9周開始,A、B組大鼠繼續(xù)飲酒的同時,B、D組腹腔注射鹽酸納洛酮1.0mg/kg;A、C組腹腔注射等量的生理鹽水,連續(xù)10d。3.行為測試用Morris水迷宮檢測動物的空間學(xué)習(xí)記憶情況;具體方法見文獻。4.海馬、嚴格生長監(jiān)測完成行為學(xué)實驗后斷頭取出全腦,置沸生理鹽水中煮5min,取出分離各腦區(qū)(前額葉、海馬、下丘腦、紋狀體)分別稱重,放入1ml的1mol/L醋酸中充分勻漿,室溫擱置100min,再加入1NNaOH,離心(4000×g)20min,取上清液-70℃保存待測。采用放射免疫法,試劑盒由第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)中心提供。5.數(shù)據(jù)處理采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析。數(shù)據(jù)采用方差檢驗和非參數(shù)檢驗,兩兩比較采用LSD;相關(guān)分析利用Pearson相關(guān)。結(jié)果一、第二至七八時段a、b組c逃避刑期經(jīng)過7d的尋找隱匿平臺訓(xùn)練,四組動物的逃避潛伏期均迅速下降,第二至第五個時段A、B組較正常對照組C逃避潛伏期延長(P<0.01或P<0.05);與A組比較,B組納洛酮處理后其中第三至第五個時段逃避潛伏期縮短(P<0.05)。二、c的不同程度c的變化A組和B組下丘腦和海馬內(nèi)的MENK水平較對照組C均出現(xiàn)不同程度的升高,差異有顯著性;而給予納洛酮處理后,B組大鼠海馬內(nèi)MENK含量的變化較A組有部分逆轉(zhuǎn),差異有顯著性(P<0.05)。三、顯著性和顯著性A組海馬內(nèi)的LENK水平較正常對照組C出現(xiàn)升高,差異有顯著性(P<0.05);而給予納洛酮處理后,B組海馬內(nèi)LENK含量的變化較A組出現(xiàn)完全逆轉(zhuǎn),差異有顯著性(P<0.05)。四、腦咖啡因濃度與水迷宮逃避潛伏期的相關(guān)分析表4下丘腦、海馬、紋狀體內(nèi)的腦啡肽水平與逃避潛伏期呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。阿片對大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響本研究結(jié)果顯示慢性酒精攝入后,動物的空間學(xué)習(xí)記憶能力受損;同時下丘腦和海馬內(nèi)的MENK水平以及海馬內(nèi)的LENK水平均出現(xiàn)不同程度的升高;進一步相關(guān)分析顯示腦啡肽水平的變化與逃避潛伏期呈顯著正相關(guān);說明腦啡肽水平的變化與水迷宮成績損害存在相關(guān)性。實驗結(jié)果提示長期酒精攝入改變了部分腦區(qū)內(nèi)阿片肽的合成及釋放,進而改變了阿片系統(tǒng)的活動。國外研究發(fā)現(xiàn)大鼠穿梭回避訓(xùn)練前給予MENK和LENK(δ受體激動劑)不但會損害回避性的操作表現(xiàn),而且還會損害記憶保持能力。本實驗也進一步證實腦內(nèi)腦啡肽水平的變化與動物學(xué)習(xí)成績損害相關(guān)。本實驗還顯示納洛酮能完全或部分逆轉(zhuǎn)腦區(qū)內(nèi)阿片肽水平的變化,與其改善慢性酒精攝入大鼠學(xué)習(xí)記憶能力減退的效應(yīng)一致。目前認為其治療慢性酒精中毒大鼠空間學(xué)習(xí)記憶減退可能的神經(jīng)機制為:1.腦內(nèi)阿片樣物質(zhì)增多會使大腦處于高代謝狀態(tài),并抑制了GABA中間神經(jīng)元的活動,產(chǎn)生興奮性神經(jīng)毒性。納洛酮還能調(diào)節(jié)核酸代謝并由此促進神經(jīng)元的成熟分化及相關(guān)蛋白的合成,納洛酮通過阻斷阿片受體的作用防止或逆轉(zhuǎn)酒精病理效應(yīng)。2.空間學(xué)習(xí)記憶能力依賴于海馬的乙酰膽堿(Ach),Ach水平高則此能力強。納洛酮能明顯增加大鼠