柴胡疏肝散抗抑郁癥作用的實(shí)驗(yàn)研究

柴胡疏肝散抗抑郁癥作用的實(shí)驗(yàn)研究

抑郁與中醫(yī)辨證分型幾乎相似。主要治療以肝臟為基礎(chǔ)，通常采用平肝理氣法。中藥治療抑郁癥的作用是通過(guò)多途徑、多靶點(diǎn)、多層次來(lái)實(shí)現(xiàn)的,并且副作用少,患者依從性好,復(fù)發(fā)率低,尤其重要的是,中藥從整體觀角度來(lái)治療抑郁癥,與抑郁癥發(fā)病機(jī)制的多樣性相吻合。柴胡疏肝散是疏肝理氣代表方,具有疏肝理氣解郁之功效。本文通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察柴胡疏肝散抗抑郁癥的作用,觀察柴胡疏肝散對(duì)抑郁模型大鼠海馬乙酰膽堿酯酶(AChE)與單胺氧化酶(MAO)活性的干預(yù)作用,探討抑郁癥的發(fā)病機(jī)制和柴胡疏肝散的抗抑郁癥作用。1材料和方法1.1材料表面1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與原料4~5月齡清潔級(jí)SD雄性大鼠60只,體重360~380g,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供,許可證編號(hào):SCXK(京)2007-0001。1.1.2胡疏肝散飲片免疫組化染色(SABC)試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司);MAO與考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程有限公司);柴胡疏肝散飲片(黑龍江省中藥材公司),飲片按柴胡:枳殼:白芍:川芎:炙甘草:香附:陳皮為6∶5∶5∶5∶3∶5∶6的比例,冷水浸泡藥材2h,常規(guī)兩煎,第一次1.5h,第二次1h,兩次水煎液混合并過(guò)濾,經(jīng)水浴蒸發(fā)濃縮成含生藥0.7g/ml的濃縮藥液,高壓滅菌后冷藏備用;鹽酸氟西汀膠囊(中美合資中化藥品工業(yè)有限公司)。1.1.3x31rbsf光學(xué)顯微及圖像分析系統(tǒng)UV-2550型紫外分光光度計(jì)(日本島津),CX31RBSF光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS),圖像分析系統(tǒng)(美國(guó)Alphaimager公司)。1.2方法1.2.1環(huán)境適應(yīng)性放養(yǎng)動(dòng)物在安靜、溫暖(18~20℃)、自然光照、通風(fēng)良好、無(wú)噪音的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1w,自由進(jìn)食水。通過(guò)敞箱實(shí)驗(yàn)將水平運(yùn)動(dòng)次數(shù)加垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)不足30次或超過(guò)120次的大鼠剔除,隨機(jī)分為正常組、模型組、氟西汀組和中藥組,每組15只。1.2.2中藥組大鼠的一般情況模型組、西藥組和中藥組單籠飼養(yǎng),進(jìn)行21d慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激刺激(CUMS):電擊足底(電流強(qiáng)度1mA,電壓45mV,10s/次,間隔1min,共30次)、冰水游泳(4℃,5min)、搖晃(1次/s,15min)、夾尾(3min)、熱應(yīng)激(45℃,5min)、禁食+噪聲、禁水+異物、晝夜顛倒、束縛(8h)、禁食+潮濕墊料(每100g墊料中加入200ml水)與禁水+傾斜鼠籠。每日隨機(jī)安排1種刺激方式,每種刺激在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用不超過(guò)3次。正常組大鼠不予任何刺激,每5只1籠。造模同時(shí),中藥組按2ml·kg-1·d-1灌胃給予柴胡疏肝散,每1次/d,共21d。氟西汀組按1.2mg·kg-1·d-1灌胃給予鹽酸氟西汀,每1次/d,共21d。1.2.3動(dòng)物網(wǎng)格劃分Open-field-test測(cè)定方法:實(shí)驗(yàn)裝置為高40cm、底邊長(zhǎng)80cm、周壁涂黑、底板為白色的無(wú)蓋方箱,底板用黑線劃成16cm×16cm的25個(gè)方格。在安靜環(huán)境下進(jìn)行,將大鼠輕放于方箱底板中心,每只動(dòng)物單獨(dú)進(jìn)行測(cè)定,每次測(cè)定時(shí)間為3min,兩只動(dòng)物之間用體積分?jǐn)?shù)為10%的酒精清洗方箱周壁及底板。以大鼠穿越底面格數(shù)為水平活動(dòng)得分,大鼠4只腳均在同一格子內(nèi)為一格,穿越一格計(jì)1分,如大鼠沿線行走,以每10cm為1分;以大鼠直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分,雙足離開底面為標(biāo)志。1.2.4大鼠紅糖偏好度計(jì)算24h的禁食禁水后,測(cè)定1h動(dòng)物飲用1%蔗糖水和純水的量,然后應(yīng)用公式:1%蔗糖水消耗量/(1%蔗糖水消耗量+純水消耗量)×100%,計(jì)算出各組大鼠糖水偏愛(ài)度值。1.2.5積分光密度檢測(cè)大鼠行為學(xué)測(cè)試后,全身灌注固定,斷頭取腦,分離海馬,固定,包埋,切片,PBS沖洗,滴加3%H2O2,封閉,加一抗,加二抗,加標(biāo)記物,顯色,復(fù)染,脫水,封片,光鏡下觀察并用MoticMed6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算積分光密度。1.2.6比色法測(cè)定了mao活性1.3統(tǒng)計(jì)方法2結(jié)果2.1表1顯示了各組大鼠的行為評(píng)估。表4顯示了每組的老鼠行為評(píng)估2.2大鼠海馬區(qū)ache蛋白表達(dá)水平各組積分光密度,與模型組比較(14.04±3.67),正常組大鼠海馬區(qū)AChE蛋白表達(dá)顯著升高(7.67±1.45)(P<0.05);與模型組比較,氟西汀組、中藥組AChE蛋白表達(dá)明顯降低(7.85±1.52、8.29±2.06)(P<0.05)。見(jiàn)圖1。2.3氟西汀對(duì)u/mgpert的影響與對(duì)照組MAO活性比較[(24.19±8.03)U/mgprot],模型組[(39.85±10.16)U/mgprot]明顯升高(P<0.05),氟西汀組與中藥組[(26.39±6.57),(27.28±5.88)U/mgprot]較模型組降低(P<0.05)。3胡椒疏肝散對(duì)慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠mao和ache活性的影響現(xiàn)代病理研究表明,抑郁癥是一類受遺傳因素影響,以生物學(xué)為基礎(chǔ),以社會(huì)、心理、文化等因素為“觸發(fā)媒介”,是多種因素作用的綜合病理產(chǎn)物。本文結(jié)果顯示,模型組大鼠大鼠活動(dòng)減少,興趣喪失,快感缺乏,說(shuō)明造模成功。而中藥組和西藥組均能明顯增加動(dòng)物的水平活動(dòng)和垂直活動(dòng)次數(shù),提高抑郁大鼠的糖水偏愛(ài)度,增加大鼠的體重。表明柴胡疏肝散能改善大鼠的抑郁狀態(tài),能起到良好的抗抑郁作用,與氟西汀相似本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,造模可以明顯升高M(jìn)AO與AChE活性,而柴胡疏肝散可以明顯降低兩個(gè)酶的活性。這說(shuō)明,AChE活性可能是抑郁癥的發(fā)病原因之一。研究表明,柴胡疏肝散對(duì)抑郁癥有明確療效,并且藥理研究已經(jīng)證實(shí)柴胡疏肝散在產(chǎn)生顯著抗抑郁療效的同時(shí),柴胡疏肝散能抑制應(yīng)激導(dǎo)致大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素、β-內(nèi)啡肽水平升高的變化,提示柴胡疏肝散對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠的下丘腦-垂體-腎上腺軸功能具有一定的調(diào)節(jié)作用。推測(cè)柴胡疏肝散可能是通過(guò)調(diào)節(jié)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)與單胺類神經(jīng)系統(tǒng),進(jìn)而調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺軸,降低皮質(zhì)醇水平,進(jìn)而發(fā)揮抗抑郁作用。鑒于