猛烈火球菌中DNA3-磷酸酶的研究和應(yīng)用的開題報(bào)告

猛烈火球菌中DNA3'-磷酸酶的研究和應(yīng)用的開題報(bào)告【開題報(bào)告】一、研究背景與意義猛烈火球菌（Pyrococcushorikoshii）是一種屬于古菌界的嗜熱菌，其生長(zhǎng)溫度可達(dá)到90℃。作為一種常見的外源基因表達(dá)宿主，研究猛烈火球菌中的酶類及其催化機(jī)理對(duì)于發(fā)展分子生物學(xué)技術(shù)和重要藥物研發(fā)具有重要意義。DNA3'-磷酸酶是一種具有核酸酶活性的酶，主要催化DNA鏈的3'-末端磷酸基團(tuán)的去除。當(dāng)前已知較少關(guān)于猛烈火球菌中DNA3'-磷酸酶的研究，因此對(duì)其研究具有重要意義。同時(shí)，該酶也具有廣泛的應(yīng)用，例如在PCR擴(kuò)增反應(yīng)中去除引物結(jié)尾、在DNA測(cè)序過程中去除非目標(biāo)DNA、構(gòu)建DNA文庫(kù)等。因此，我們將對(duì)猛烈火球菌中DNA3'-磷酸酶的基本特征進(jìn)行探究和分析，并研究其在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用，為相關(guān)領(lǐng)域的研究提供有力支持。二、研究?jī)?nèi)容和方法1.猛烈火球菌中DNA3'-磷酸酶的克隆、表達(dá)和純化從猛烈火球菌中提取全基因組DNA，利用PCR方法克隆得到DNA3'-磷酸酶基因，并進(jìn)行表達(dá)。通過進(jìn)行親和層析、離子交換層析和凝膠過濾等多種方法對(duì)DNA3'-磷酸酶進(jìn)行純化。2.DNA3'-磷酸酶的酶學(xué)性質(zhì)分析利用DNA3'-磷酸酶的基礎(chǔ)酶學(xué)測(cè)定方法，對(duì)該酶進(jìn)行活性檢測(cè)、催化機(jī)理分析、適宜溫度和pH等參數(shù)的優(yōu)化等研究工作。3.DNA3'-磷酸酶的應(yīng)用研究通過對(duì)DNA3'-磷酸酶的應(yīng)用研究，包括去除PCR擴(kuò)增反應(yīng)的引物結(jié)尾、去除非目標(biāo)DNA、構(gòu)建DNA文庫(kù)等，探究該酶在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值。三、預(yù)期成果通過對(duì)猛烈火球菌中DNA3'-磷酸酶的研究，我們將得到該酶在酶學(xué)特征和催化機(jī)理上的具體表現(xiàn)，并探究其在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用。預(yù)期成果包括：1.獲得DNA3'-磷酸酶基因和蛋白的序列信息和結(jié)構(gòu)特征。2.通過對(duì)DNA3'-磷酸酶的活性檢測(cè)和酶學(xué)分析，探究該酶的催化機(jī)理和酶學(xué)特征。3.通過對(duì)DNA3'-磷酸酶在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用研究，探究該酶在相關(guān)領(lǐng)域中的應(yīng)用價(jià)值。四、研究進(jìn)度安排1.第一年(1)從猛烈火球菌中提取全基因組DNA，利用PCR方法克隆得到DNA3'-磷酸酶基因。(2)對(duì)DNA3'-磷酸酶進(jìn)行表達(dá)和純化。(3)對(duì)DNA3'-磷酸酶進(jìn)行活性檢測(cè)和初步酶學(xué)特征研究。2.第二年(1)對(duì)DNA3'-磷酸酶進(jìn)行多方位酶學(xué)特征、催化機(jī)理和結(jié)構(gòu)特征研究。(2)探究DNA3'-磷酸酶在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值。3.第三年(1)對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行總結(jié)和分析，完成論文撰寫和發(fā)表。(2)繼續(xù)深入探究DNA3'-磷酸酶的生物學(xué)和醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究。五、參考文獻(xiàn)1.陳詩(shī)奇,嚴(yán)益民,王亞偉.猛烈火球菌3'-磷酸酶特征與研究進(jìn)展[J].遺傳學(xué)報(bào),2012,39(8):726-734.2.高曉暉,黃婷,涂向東,龐鐵,趙爽,王彩霞.基于猛烈火球菌3'-磷酸酶的PCR產(chǎn)物引物剪除實(shí)驗(yàn)[J].中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2015,37(2):247-252.3.張婷,苑曉飛,