高危型人乳頭瘤病毒載量與宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌程度的相關(guān)性研究

高危型人乳頭瘤病毒載量與宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌程度的相關(guān)性研究

高危人類乳頭瘤病毒（h-rp）是宮頸和癌前病變的主要原因，并影響預(yù)后。國(guó)外根據(jù)致癌潛能將HPV分為低危型人乳頭瘤病毒(LR-HPV)和高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV),并指出HPV感染率隨宮頸病變程度的加重而上升。HR-HPV病毒載量與宮頸病變的嚴(yán)重程度成正相關(guān)。本研究通過第2代雜并捕獲實(shí)驗(yàn)(HC-Ⅱ)半定量方法檢測(cè)HR-HPV病毒載量,探討其與宮頸病變進(jìn)展的關(guān)系,以及HR-HPV病毒載量檢測(cè)的意義。1數(shù)據(jù)和方法1.1病例年齡分布納入2006年1月-2011年8月因?qū)m頸病變行陰道鏡活檢或手術(shù)治療的1248例患者,年齡20~78(41.8±10.0)歲。其中145例為宮頸癌患者,鱗癌130例,腺癌15例。根據(jù)宮頸病理及臨床分期將宮頸病變患者分為5組:宮頸炎(n=525)、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ組(n=130)、CINⅡ-Ⅲ組(n=448)、宮頸癌Ⅰ期(n=95)和宮頸癌Ⅱ期(n=50),最終以組織病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn),在治療前均采用HC-Ⅱ方法定量檢測(cè)宮頸HR-HPVDNA含量。1.2強(qiáng)調(diào)cin治療后的臨床表現(xiàn)陰道鏡檢查的指征包括:(1)細(xì)胞學(xué)結(jié)果異常,宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)檢測(cè),該系統(tǒng)診斷標(biāo)準(zhǔn)包括:正?；蛄夹约?xì)胞病變(WNL),未明確診斷的不典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASCUS),低度上皮內(nèi)瘤變(LSIL),高度上皮內(nèi)瘤變(HSIL),鱗狀上皮細(xì)胞癌(SCC),腺癌(AC)。其中,ASCUS及以上病變?yōu)榧?xì)胞學(xué)異常;(2)HR-HPVDNA檢測(cè)陽性;(3)臨床可疑病史或體征如接觸性出血、異常陰道排液,宮頸外觀異常如宮頸假性糜爛(宮頸柱狀上皮移位或不對(duì)稱糜爛)、息肉、白斑、濕疣或可疑癌等;(4)CIN治療后隨診及動(dòng)態(tài)觀察宮頸、陰道和外陰病變。陰道鏡檢查,在異常部位或肉眼觀可疑區(qū)多點(diǎn)活檢,若細(xì)胞學(xué)為高度上皮內(nèi)病變,同時(shí)做頸管內(nèi)膜刮取術(shù)。如未發(fā)現(xiàn)病變,則于3、6、9、12點(diǎn)位置取活檢,標(biāo)本送組織學(xué)檢查。1.4病毒載量檢測(cè)采用美國(guó)Digene公司的HC-ⅡHPV檢測(cè)試劑盒檢測(cè)標(biāo)本中的HPVDNA含量,檢測(cè)探針包括13種高危型HPVDNA亞型(即HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68),單位為RLU/CO。RLU(relativelightunits)為相對(duì)光單位,是待測(cè)樣本的光強(qiáng)度與陽性對(duì)照的比值;CO(cutoff)為陽性對(duì)照的臨界值,是3個(gè)陽性對(duì)照反應(yīng)強(qiáng)度的平均值。以RLU/CO比值≥1.0為陽性,RLU/CO比值<1.0為陰性。將HR-HPV按病毒載量高低分為0~0.99,1.00~9.99,10.00~99.99,100.00~999.99,1000.00~5組。對(duì)于94例宮頸鱗癌ⅠB-Ⅱ期患者則根據(jù)HR-HPV病毒載量分為兩組:HPV<100載量組(n=34)和HPV≥100載量組(n=60),對(duì)HR-HPV病毒載量分級(jí)與宮頸病變的相關(guān)性進(jìn)行分析。1.5妊娠合并妊娠期各分期受檢者宮頸細(xì)胞按異型的程度和范圍依次分為宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宮頸癌Ⅰ期、宮頸癌Ⅱ期。根據(jù)受檢者手術(shù)后病理結(jié)果分為低分化癌、中分化癌、高分化癌。1.6結(jié)構(gòu)方差分析數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以表示,服從正態(tài)分布時(shí)組間比較采用多因素方差分析;計(jì)數(shù)資料以%表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1pv的感染率1248例患者中,宮頸癌患者145例,包括鱗癌130例、腺癌15例。高分化癌4例,中分化癌58例,低分化癌44例,另外39例宮頸癌患者病理結(jié)果未顯示分化程度。病理診斷為宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宮頸癌Ⅰ期、宮頸癌Ⅱ期的HPV感染率分別為52.8%、82.3%、94.6%、95.8%和90%,基本呈遞增趨勢(shì)。不同宮頸病變程度的HPV病毒載量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),CIN和宮頸癌患者HPV病毒載量顯著高于宮頸炎患者(P<0.05),而CINⅠ、宮頸癌Ⅰ期HPV病毒載量高于CINⅡ-Ⅲ患者(P<0.05,表1)。2.2hr-pv載量與妊娠合并患者cin-及妊娠期發(fā)生率的關(guān)系以宮頸炎為陰性對(duì)照,CIN及宮頸癌的HPV各級(jí)別病毒載量分布為:當(dāng)HR-HPV載量在1.00~9.99及10.00~99.99分布,時(shí)各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);當(dāng)HR-HPV載量在100.00~999.99分布時(shí),CINⅡ-Ⅲ發(fā)生率高于CINⅠ及宮頸癌Ⅰ期(P<0.05);HR-HPV載量在1000.00~分布時(shí),CINⅠ及宮頸癌Ⅰ期發(fā)生率高于CINⅡ-Ⅲ(P<0.05),即HPV病毒載量不隨宮頸病變程度加重而上升(表2),HR-HPV病毒載量與宮頸病變病理分級(jí)無正相關(guān)。當(dāng)HR-HPV載量在100.00~999.99及1000.00~分布時(shí),CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宮頸癌Ⅰ期及宮頸癌Ⅱ期較宮頸炎的危險(xiǎn)度增加,CINⅠ組OR值分別為1.62、4.09;CINⅡ-Ⅲ組OR值分別為3.67、3.08;宮頸癌Ⅰ期組OR值分別為2.45、5.26;宮頸癌Ⅱ期組OR值分別為2.53、3.51(表3)。2.3最大直徑4cm的危險(xiǎn)度當(dāng)HPV病毒載量≥100時(shí),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)度增大(P<0.05,OR=2.9);腫瘤最大直徑≥4cm的危險(xiǎn)度增大(P<0.05,OR=2.92)。當(dāng)HPV病毒載量≥100時(shí),患者年齡、組織學(xué)分化程度、宮頸肌層癌浸潤(rùn)深度及淋巴管癌栓都有不同程度增加,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表4)。3pv與妊娠預(yù)后宮頸癌常發(fā)生于子宮頸鱗狀上皮或腺上皮部位,發(fā)生率占我國(guó)女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位,早期宮頸癌的治愈率在90%以上,晚期則療效明顯下降。因此,如何早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌是提高治愈率的關(guān)鍵。持續(xù)感染高危型HPV是導(dǎo)致宮頸癌和癌前病變的主要病因,尤其是HPV16類型的持續(xù)感染。以往研究表明HPV感染與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。許多文獻(xiàn)報(bào)道在CIN尤其是CINⅡ、CINⅢ的篩查中,HPV檢測(cè)比宮頸細(xì)胞學(xué)檢查具有更高的敏感性。HPV應(yīng)該在婚后3年進(jìn)行篩查,HPV檢測(cè)已成為宮頸癌普查初篩的重要手段。HC-Ⅱ作為HPV-DNA負(fù)荷半定量測(cè)定方法,已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)并廣泛應(yīng)用,RLU與陽性對(duì)照平均值的比值≥1為陽性,此方法具有高度敏感性、客觀性、可重復(fù)性,因簡(jiǎn)單易操作被廣泛用于臨床。Saunier等采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)了173份HPV16陽性宮頸標(biāo)本中的病毒載量,預(yù)測(cè)當(dāng)HPV16DNA在103個(gè)細(xì)胞中有22000拷貝數(shù)時(shí)即可作為預(yù)測(cè)高級(jí)別宮頸病變的指標(biāo)之一。Wu等研究發(fā)現(xiàn),HPV病毒載量與宮頸病變程度明顯相關(guān),病毒載量越高,宮頸病變加重的風(fēng)險(xiǎn)越大。近來研究發(fā)現(xiàn)HPV病毒載量可以作為區(qū)分宮頸是否存在嚴(yán)重病變的一種方法。然而也有發(fā)現(xiàn)HPVDNA病毒載量與宮頸病變程度無顯著相關(guān)性的報(bào)道。因此,HC-Ⅱ檢測(cè)HPV病毒載量與宮頸病變嚴(yán)重程度之間的關(guān)系尚存爭(zhēng)議。在本研究中,CINⅠ和宮頸癌Ⅰ期的病毒載量高于CINⅡ-Ⅲ,分析認(rèn)為CINⅠ時(shí)期正處于HPV病毒感染的急性期,HPVDNA作為游離基因出現(xiàn)在宿主細(xì)胞內(nèi),進(jìn)行自我復(fù)制并產(chǎn)生新的病毒顆粒,此時(shí)HPV自我復(fù)制能力最強(qiáng)。而當(dāng)CINⅠ轉(zhuǎn)變?yōu)镃INⅡ-Ⅲ時(shí)病毒載量降低,表明HPV的自我復(fù)制可能達(dá)到穩(wěn)定期。從CINⅡ-Ⅲ轉(zhuǎn)變成宮頸癌Ⅰ期的過程中,HPV基因整合到宿主細(xì)胞DNA上,具備了轉(zhuǎn)化細(xì)胞的潛力,是CIN向微小浸潤(rùn)癌轉(zhuǎn)化過程中的關(guān)鍵機(jī)制。一旦出現(xiàn)HPV基因整合,用HC-Ⅱ方法不易檢出HPV病毒,這與HPV病毒載量在宮頸癌Ⅰ期的增多不相符,因?yàn)镠PV16整合只占所有宮頸癌的72%,證明宮頸癌的發(fā)生尚存在其他相關(guān)致病機(jī)制。周瑾等報(bào)道新疆地區(qū)宮頸癌的高發(fā)可能與HPV16E6基因突變有關(guān)。我們將HR-HPV按病毒載量高低分為0~0.99、1.00~9.99、10.00~99.99、100.00~999.99、1000.00~5組,當(dāng)HR-HPV病毒載量≥100RLU/CO時(shí),CIN及宮頸癌的發(fā)生危險(xiǎn)度基本隨病毒載量的增加而增加。然而,宮頸癌前病變與HR-HPV病毒載量之間的關(guān)系卻與此不同,可能原因是我們研究的樣本量是13種高危型HPV的病毒載量,而先前的研究?jī)H僅強(qiáng)調(diào)HPV16病毒載量與宮頸病變嚴(yán)重程度相關(guān)。Park等報(bào)道HR-HPV病毒載量≥100RLU/CO時(shí),HPV持續(xù)感染及復(fù)發(fā)率明顯增強(qiáng)。Baser等和Bakhidze等報(bào)道,淋巴結(jié)HPV陽性與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),并且可能影響宮頸癌的預(yù)后。而我們的研究證實(shí),HR-HPV病毒載量≥100RLU/CO是影響宮頸癌預(yù)后的關(guān)鍵因素,當(dāng)HPV病毒載量≥100RLU/CO時(shí),宮頸鱗癌IB-Ⅱ期患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤直徑≥4cm的危險(xiǎn)性增大。表明HPV病毒載量與宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),但因病例數(shù)較少,需要進(jìn)一步的探索及實(shí)驗(yàn)研究證明。綜上所述,通過對(duì)宮頸炎、CINⅠ、