幾種藥劑對南方根結線蟲的生物活性測定

幾種藥劑對南方根結線蟲的生物活性測定

南方根結線蟲是致癌的重要生化生物之一。南方根結線蟲分布廣,在我國南方各省及北方蔬菜生產大省均有分布,如山東、河北、河南、遼寧、黑龍江、新疆等省。南方根結線蟲寄主范圍廣,超過3000種植物,分屬于114科,其中以茄科、葫蘆科、十字花科等植物受害尤為嚴重。為害時受害根部產生大小不等的瘤狀物或根結,地上部分生長緩慢,葉片變黃,植株矮小,甚至枯死。為害嚴重時可造成減產10%~20%,嚴重時可達30%~40%,甚至絕產。目前我國對南方根結線蟲的防治以化學防治為主,但以往可用于防治農作物線蟲的藥劑多為毒性高、殘留期長的藥劑,如甲基異柳磷、涕滅威、氯唑磷等,而且可供選用的藥劑種類少,導致連續(xù)單一使用,殺線蟲產生抗藥性,防治效果差等問題。隨著滅線磷、克百威等高效殺線蟲劑的禁止或限制使用,尋找安全、高效防治藥劑,是防治南方根結線蟲面臨的重要問題。在殺線劑研究與應用方面,國內研究對生防菌復配、阿維菌素與辛硫磷復配做了一些研究,而不同類型殺蟲劑對南方根結線蟲的活性尚缺少系統(tǒng)的研究和評價。為此,本研究對阿維菌素、有機磷、生物源、新煙堿類4類共9種不同作用機理殺蟲劑對南方根結線蟲卵囊及2齡幼蟲(J2)進行毒力測定及二元復配,以期選出防治南方根結線蟲的高效藥劑及復配組合,為生產上科學合理地用藥提供依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1大學昆蟲在番茄體內的分布南方根結線蟲采自廣西南寧市武鳴地區(qū)危害嚴重的番茄病根,經單卵純化后由廣西大學昆蟲所保存和繁殖于番茄根部。取接種50d的番茄根,置于0.5%次氯酸鈉中消毒3min,用無菌水沖洗干凈后挑取卵囊,置于25℃培養(yǎng)箱中孵化3~4d,收集2齡幼蟲(J2)配制成400條/mL的懸浮液備用。1.1.2毒樹葉片83.5%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽原藥(簡稱:甲維鹽,河北威遠生物化工股份有限公司);92%辛硫磷原油(邢臺市農藥有限公司);97%毒死蜱原藥(江蘇常隆農化有限公司);98%噻蟲嗪原藥(瑞士先正達作物保護有限公司);90.2%阿維菌素原藥、95.00%噻蟲胺原藥(河北威遠生物化工股份有限公司);42.75%印楝素原藥(云南潞西市光明印楝產業(yè)開發(fā)有限公司);89.10%噻唑膦原油(日本石原公司);81%多殺菌素原藥(美國陶氏益農公司)。1.2測試方法1.2.1不同藥物的毒性試驗1毒力檢測試驗室內毒力測定采用浸泡殺線蟲法。試驗藥劑用少量丙酮溶解,然后用1%吐溫水溶液配成有效成分含量為10000mg/L的母液,再用0.1%吐溫水溶液稀釋成設計質量濃度。各藥劑對2齡幼蟲的處理濃度經預備試驗后確定。取24孔細胞培養(yǎng)板,將各稀釋藥液加入每孔有1mL的400條/mL懸浮液中混勻,每處理設3個重復,設無菌水溶液處理為對照。置于(25±2)℃培養(yǎng)箱中,于處理后24h觀察,鏡檢線蟲死亡情況,計算校正死亡率,建立毒力回歸方程并計算LC50值。參考萬樹青的方法判斷線蟲死亡與否。2封口膜封嚴法在每個經高溫滅菌的培養(yǎng)皿(直徑6.0cm)中加入3枚大小、發(fā)育一致的卵囊(2000粒卵左右),再分別加入4mL藥液,用封口膜封嚴,以減少液體的蒸發(fā)。置(25±2)℃條件下恒溫培養(yǎng)。5d后在倒置顯微鏡下鏡檢各處理2齡幼蟲孵化數(shù)。計算不同質量濃度對卵孵化的相對抑制率。1.2.2藥劑配比對毒力檢測結果的影響根據(jù)單劑室內毒力測定結果,選擇對線蟲和卵囊有較高活性及具有不同作用機制的毒死蜱、阿維菌素、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、噻唑膦4種藥劑,采用交互測定法,測定其不同配比對線蟲2齡幼蟲(J2)的毒力。各處理中2個單劑的比例見表1,以各自LC50值為100%,然后8等分,分別計算在各比例中的含量。各處理測定結果計算預期死亡率和毒效比,公式如下。毒效比>1.25,表現(xiàn)增效作用;毒效比<0.75,表現(xiàn)拮抗作用;毒效比在1左右為相加作用。根據(jù)毒效比篩選具有增效作用的最佳配比組合。1.2.3聯(lián)合毒力的計算及增效作用選擇毒效比大,增效作用明顯的配比制劑,測定其對線蟲2齡幼蟲(J2)及卵囊的聯(lián)合毒力,采用Sun等(1960)的方法計算共毒系數(shù)(CTC),依據(jù)共毒系數(shù)評價藥劑復配后的增效作用。當CTC≥120時為增效作用;當CTC≤80為拮抗作用;當80<CTC<120時為相加作用。2結果與分析2.1南方根結線蟲j2對甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和噻蟲胺的敏感性各藥劑對南方根結線蟲J2及卵囊的毒力測定的結果見表2。從表2中可看出:測試的藥劑中,對南方根結線蟲2齡幼蟲(J2)的毒力大小依次為甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>阿維菌素>噻唑膦>毒死蜱>辛硫磷>多殺菌素>印楝素>噻蟲嗪>噻蟲胺,即南方根結線蟲J2對甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽最敏感,其次是阿維菌素、噻唑膦、毒死蜱,而對辛硫磷、多殺菌素、印楝素、噻蟲嗪敏感度較低,其對噻蟲胺敏感性最低。不同藥劑對卵囊孵化率的抑制作用大小依次為甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>噻唑膦>阿維菌素>多殺菌素>印楝素>辛硫磷>毒死蜱>噻蟲嗪>噻蟲胺,即甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對南方根結線蟲卵囊的毒力,其次是噻唑膦、阿維菌素、多殺菌素、印楝素,而辛硫磷、毒死蜱、噻蟲嗪毒力較低,以噻蟲胺毒力最低。綜合藥劑對南方根結線蟲J2及卵囊的毒力測定結果,表明阿維菌素類藥劑甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、阿維菌素對南方根結線蟲活性最高,其次是有機磷類藥劑噻唑膦、毒死蜱、辛硫磷,再次是生物源類藥劑多殺菌素和印楝素,新煙堿類藥劑噻蟲嗪、噻蟲胺的效果最差。2.2增效作用的比較不同藥劑按不同比例混配后對線蟲2齡幼蟲(J2)毒力測定結果見表3。結果表明:甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽與噻唑膦混配中,第(5)、(6)組的實際死亡率明顯高于預期死亡率,毒效比分別為1.26、1.54,均大于1.25,具有增效作用,其中第(6)組增效作用明顯;甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽與毒死蜱混配中,第(4)組的實際死亡率明顯高于預期死亡率,毒效比為1.38,大于1.25,具有明顯的增效作用;阿維菌素與噻唑膦混配中,第(3)、(4)組的實際死亡率明顯高于預期死亡率,毒效比分別為1.55、1.37,均大于1.25,表現(xiàn)出明顯的增效作用;毒死蜱與噻唑膦混配中,第(5)組的實際死亡率明顯高于預期死亡率,毒效比為1.41,大于1.25,增效作用明顯。2.3阿維菌素和噻唑膦混配組合幾種高毒效比的藥劑配比(組合)對南方根結線蟲J2和卵囊的聯(lián)合毒力測定結果見表4。結果表明,對南方根結線蟲J2,甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽與噻唑膦混配組合(6)(有效成分配比25∶75)、阿維菌素與噻唑膦混配組合(3)(有效成分配比70∶30)的共毒系數(shù)均大于120,表現(xiàn)出明顯的增效作用;對南方根結線蟲卵囊,甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽與噻唑膦混配組合(6)、阿維菌素與噻唑膦混配組合(3)的共毒系數(shù)也均大于120,亦表現(xiàn)出明顯的增效作用。說明按這2個藥劑組合配比混配對南方根結線蟲均有增效作用,其中以阿維菌素與噻唑膦混配組合(3)(有效成分配比70∶30)的增效作用最顯著,共毒系數(shù)達159.37。3對南方根結線蟲2齡幼蟲、2南方根結線蟲是我國很多農作物的病原線蟲,近年來危害日趨嚴重,其防治方法雖然有農業(yè)防治、物理防治、生物防治和化學防治等多種方法,但化學防治一直是防治南方根結線蟲的重要手段。以往防治南方根結線蟲的藥劑多為高毒、高殘留藥劑,生產上迫切需要尋找新的高效、安全藥劑。本研究通過室內生物活性測定,篩選出對南方根結線蟲具有較高活性的藥劑種類,并通過交互混配,篩選出有顯著增效作用的混配組合及混配比例,為南方根結線化學防治蟲提供了新的藥劑選擇,同時也為了進一步開發(fā)復配型殺線劑打下了基礎。本研究中,甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對南方根結線蟲2齡幼蟲(J2)和卵囊均表現(xiàn)出很高的生物活性,其對2齡幼蟲(J2)的毒力為阿維菌素的5.36倍、噻唑膦的5.56倍,對卵囊的毒力是阿維菌素的1.56倍、噻唑膦的1.08倍。有關其對南方根結線蟲卵囊的生物活性尚未見有研究報道。在以往的研究報道中,鄒雅新等報道阿維菌素和硫線磷對南方根結線蟲的卵和卵塊的孵化以及2齡幼蟲均有很強的抑制作用,并且阿維菌素的活性較強;漆永紅等采用浸漬法測試得到3%阿維菌素EC和10%噻唑膦GR對南方根結線蟲的卵、卵囊孵化均有抑制作用,其中10%噻唑膦GR對卵囊的孵化率抑制效果較好,3%阿維菌素EC對線蟲2齡幼蟲的殺滅活性較強;丁曉凡等研究結果表明甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對南方根結線蟲2齡幼蟲(J2)毒力高于阿維菌素,本研究中,上述2種藥劑的表現(xiàn)基本相似。表明在南方根結線蟲化學防治過程中,可優(yōu)先選用甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、阿維菌素和噻唑膦作為防治藥劑。這些藥劑與以往常用的一些殺線劑相比,毒性較低,安全性更好。目前市面上防治南方根結線蟲應用較多的藥劑主要為有機磷類和阿維菌素類,但品種少,且長期單一使用,致使防效下降,同時也將面臨著根結線蟲抗藥性的問題。新藥劑開發(fā)難度大、成本高、周期長,因此,從現(xiàn)有殺蟲劑中篩選對線蟲具有較高活性的藥劑種類用于防治南方根結線蟲,尤其是通過復配,篩選具有增效作用的復配型殺線劑,可以提高防治效果,降低單位面積用藥量,從而降低成本,延緩抗藥性,具有重要的現(xiàn)實意義性。本研究通過交互混配,篩選出來甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽與噻唑膦、阿維菌素與噻唑膦混配的兩個組合,