地黃不同炮制品對糖尿病大鼠降糖作用的影響

地黃不同炮制品對糖尿病大鼠降糖作用的影響

增液湯是吳茱通在《溫病條約》中記錄的一個例子，它有助于降低血糖。鑒于地黃有鮮地、生地和熟地之分,因加工炮制方法不同,其化學成分及其含量則有所不同,推測地黃不同炮制品的組方藥效亦可能存在差別。地黃生熟異用后增液湯降血糖作用是否有變化?目前尚未見到報道。本文首次將地黃不同炮制品納入增液湯中進行地黃在復方中降血糖作用對比研究,旨在揭示地黃生熟異用對增液湯降血糖作用的區(qū)別,研究鮮地黃、生地黃和熟地黃降糖功效的差異,指導中醫(yī)臨床用藥。鮮地-增液湯、生地黃、鮮單一克氏原試劑ss1.實驗動物SD雄性大鼠,清潔級,體質量180-220g,由鄭州大學醫(yī)學院動物實驗中心提供,動物許可證號:SCXK(豫)2010-0002,合格證號:0008680。2.實驗儀器UV-3200紫外分光光度計(上海美譜達儀器有限公司);BMG型多功能酶標儀(江蘇萬科科教儀器有限公司)。3.藥品與試劑鏈脲佐菌素(streptozotozin,STZ)(Sigma,批號:S0130);鹽酸二甲雙胍片(上海信誼藥廠有限公司,批號:111128);肝糖原試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號:20120706);胰島素(insulin,INS)試劑盒(批號:20120701A),葡萄糖激酶(glucokinase,GK)試劑盒(批號:20120701A),葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase)試劑盒(批號:20120701A),丙酮酸激酶(pyruvatekinase,PK)試劑盒(批號:20120701A),果糖激酶-1(fructokinase-1,PFK-1)試劑盒(批號:20120701A),均為美國RD公司。4.灌胃藥液的制備4.1生地-增液湯取玄參30g,生地黃24g,麥冬24g,加10倍量水,煎煮0.5h,過濾,再加8倍量水,煎煮0.5h,過濾,合并濾液,濃縮制得0.78g/mL。4.2鮮地-增液湯其他制備方法同“4.1”項下,把生地黃換成鮮地黃48g(依據中國藥典2010版鮮地用量加倍),壓榨鮮地黃汁兌入即得。4.3熟地-增液湯取熟地黃24g,其他制備方法同“4.1”項下。大鼠血糖代謝關鍵酶活性檢測1.分組及用藥SD雄性大鼠70只,適應性喂養(yǎng)1周后,隨機抽取10只為正常組,其余60只大鼠給予自制高脂飼料(蛋黃3%、蔗糖20%、豬油19%、基礎飼料59%),4周后禁食12h,腹腔注射STZ溶液(35mg/kg),正常組注射同劑量的0.1mol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH為4.2-4.5)。72h后測空腹血糖(FBG),以血糖≥11.1mmol/L為成模標準,選擇50只造模成功大鼠,以血糖值為依據,隨機分為模型組、對照組、鮮地-增液湯組、生地-增液湯組、熟地-增液湯組,每組10只。鮮地-增液湯組灌胃劑量為10.2g/kg;生地-增液湯組和熟地-增液湯組灌胃劑量均為7.8g/kg;對照組灌胃鹽酸二甲雙胍,給藥劑量為0.15g/kg;正常組、模型組灌胃等體積的0.9%氯化鈉溶液。連續(xù)灌胃給藥3周,每周稱體質量1次,根據體質量調整用藥量。2.檢測指標2.1血糖檢測于給藥前及給藥1、2、3周后用葡萄糖試劑盒檢測FBG。2.2胰島素敏感性檢測于給藥3周后檢測。即:大鼠禁食12h后,背部皮下注射0.4U/kgINS,剪尾取血,觀察30、60、120min時血糖的變化情況。2.3血清胰島素水平的測定末次給藥后大鼠禁食12h,腹主動脈取血,按照試劑盒說明測定血清INS水平。2.4肝糖原含量的測定處死大鼠后,立即剝取大鼠肝臟,置液氮中冷凍后-70℃保存,按照試劑盒說明測定肝糖原含量。2.5肝臟糖代謝關鍵酶活性的測定肝臟用0.9%氯化鈉溶液勻漿后按照試劑盒說明測定肝臟糖代謝關鍵酶GK,PFK-1,G-6-Pase,PK的活性。3.統計學方法應用SPSS17.0統計分析軟件。計量資料數據以ue0af±s表示,組間比較用方差分析,以P<0.05為差異具有統計學意義。對大鼠血清中的關鍵酶活性的影響1.對給藥前后糖尿病大鼠FBG的影響見表1。與正常組比較,模型組FBG顯著升高(P<0.01),說明造模成功;與模型組比較,生地-增液湯組FBG在給藥第7天顯著降低(P<0.01),鮮地-增液湯組FBG在給藥第14,21天顯著降低(P<0.05),熟地-增液湯組無顯著性差異;與生地-增液湯組比較,熟地-增液湯組FBG在給藥第7,14,21天均具有顯著性差異(P<0.01,P<0.05)。3.對糖尿病大鼠INS及肝糖原含量的影響見表3。與正常組比較,模型組血清INS水平和肝糖元極顯著降低(P<0.01);與模型組比較,生地-增液湯組血清INS水平和肝糖原含量極顯著性升高(P<0.01),鮮地-增液湯組肝糖原含量顯著性升高(P<0.05),熟地-增液湯組無顯著性差異;與生地-增液湯組比較,鮮地-增液湯和熟地-增液湯組血清INS水平具有極顯著性差異(P<0.01),熟地-增液湯對肝糖元含量具有顯著性差異(P<0.05)。4.對肝臟糖代謝關鍵酶活性的影響見表4。與正常組比較,模型組GK、PFK-1、PK顯著降低(P<0.01),G-6-Pase顯著升高(P<0.01),說明造模成功;與模型組比較,生地-增液湯組能極顯著升高GK、PFK-1、PK和降低G-6-Pase(P<0.01),鮮地-增液湯組能顯著性升高GK、PK和降低G-6-Pase(P<0.05);與生地-增液湯相比,鮮地-增液湯對PFK-1具有顯著性差異(P<0.01),熟地-增液湯對GK、PFK-1、G-6-Pase、PK具有極顯著性差異(P<0.05,P<0.01)。本研究結果顯示生地-增液湯和鮮地-增液湯能升高血清INS水平和肝糖原含量來降低血糖和改善INS敏感性,說明這種作用的機制與減少INS抵抗大鼠肝糖原的合成,增加肝臟中降低的GK、PFK-1、PK活性,降低G-6-Pase活性有關,而熟地-增液湯對糖代謝的幾個關鍵酶活性影響不大。本實驗研究結果說明鮮地黃和生地黃具有降低血糖的作用,熟地黃降低血糖作用不明顯,因此建議在臨床降血糖方劑中應用鮮地黃和生地黃,不用或少用熟地黃。本次實驗用藥的劑量確定是根據《中華人民共和國藥典》規(guī)定的人常用量按照人∶大鼠=1∶6換算而來,鮮地黃由于富含水分,取樣量加倍。研究結果證明不僅熟地黃與生地黃作用有異,鮮地黃、生地黃之間也有差別,因此地黃不同炮制品在增液湯方劑中化學成分的差異有待進一步的研究。2.對給藥后糖尿病大鼠INS敏感性的影響見表2。與正常組比較,模型組INS敏感性極顯著升高(P<0.01);與模型組比較,生地-增液湯組和鮮地-增液湯組INS敏感性在30、60、120min時顯著降低(P<0.01,P<0.05);與生地-增液湯組比較,鮮地-增液湯INS敏感性在30、60、120min時有顯著性差異(P<0.01,P<0.05),熟地-增液湯在30、60min時有顯著性差異(P<0.01,P<0.05)。增液湯以養(yǎng)肝2型糖尿病是由于INS的分泌絕對不足或是由于某些抗INS作用的因素影響其生理作用而導致的一種內泌代謝性疾病。其典型癥狀是多尿、多飲、多食及消瘦,與中醫(yī)的“消渴”病相似?！跋省钡牟C主要是陰津虧損,燥熱偏盛,每以清熱生津、滋陰治之。增液湯由玄參(30g)、生地黃(24g)、麥冬(2