DB13-T 5625-2022 規(guī)?；膛霾剪斒暇艋夹g(shù)規(guī)范

65.020.30CCS

B

4113 DB

13/T

5625—2022規(guī)模化奶牛場布魯氏菌病凈化技術(shù)規(guī)范 河北省市場監(jiān)督管理局發(fā)

布DB

13/T

5625—2022 本文件按照GB/T

1.1—《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1定起草。本文件由河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件起草單位：河北省畜牧獸醫(yī)研究所、河北省動物疫病預(yù)防控制中心、唐山市動物疫病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：王曉芳、邵麗瑋、徐華、郭建軍、馬宏偉、劉天駒、顧文源、符樂、孫鳳莉、薄玉琨、李惠敬、邳明偉、劉嫣然、馮曼、劉澤、崔雪霞、李彥龍、張曉利。DB

13/T

5625—20221 范圍本文件規(guī)定了規(guī)?；膛霾剪斒暇〉膶嶒炇覚z測、凈化檢測、凈化標(biāo)準(zhǔn)和凈化維持等技術(shù)要求。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用適用于本文件。GB/T

18646 動物布魯氏菌病診斷技術(shù)NY/T

1467 PCR診斷技術(shù)NY/T

5049 無公害食品

奶牛飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則《畜禽標(biāo)識與養(yǎng)殖檔案管理辦法》（2006年農(nóng)業(yè)部令第67號）《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2007〕12號）《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號）3 術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4 實驗室檢測血清學(xué)4.1.1 血清4.1.1.1 樣品要求A19疫苗皮下注射接種超過18個月或使用S2疫苗口腔噴服接種超過6個月的奶牛。4.1.1.2 檢測方法RBTi-ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗（c-ELISA），補(bǔ)體結(jié)合試驗（），按GB/T

18646-2018執(zhí)行。對于不符合4.1.1.1要求的血清，采用瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗（NH-GD）進(jìn)行鑒別檢測，方法見附錄A。4.1.2 乳樣4.1.2.1 樣品要求A19疫苗皮下注射超過18個月或使用S2疫苗口腔噴服接種超過6房炎及其他乳房疾病患病牛的乳樣。4.1.2.2 檢測方法采用全乳環(huán)狀試驗（MRT），按GB/T

18646執(zhí)行。病原學(xué)DB

13/T

5625—20224.2.1 樣品要求道分泌物等。采樣過程應(yīng)當(dāng)采取措施防止病原微生物擴(kuò)散。4.2.2 檢測方法采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（），按NY/T

1467執(zhí)行。感染判定4.3.1 對臨床健康奶牛，采用

或

i-ELISA、MRT

中任一方法，檢測結(jié)果陽性的判為疑似感染陽性。4.3.2 對臨床健康奶牛，采用

、c-ELISA、

中任一方法檢測結(jié)果陽性的，判為感染陽性。4.3.3 對免疫布魯氏菌病疫苗未超過

NH-GD

檢測結(jié)果陽性的，判為感染陽性。4.3.4 對流產(chǎn)母牛、流產(chǎn)胎兒，采用

4.2.2

檢測結(jié)果陽性的，判定為病例。5 凈化檢測本底調(diào)查按照預(yù)期感染率3%95%比例分配，覆蓋到每個棟舍。技術(shù)路線5.2.1牛群布魯氏菌病感染率，循環(huán)檢測，隔離淘汰患病?；蚋腥娟栃耘！?.2.2 牛群布魯氏菌病感染率≥，可接種布魯氏菌疫苗，跟蹤檢測感染率<2%后停止免疫，并按5.2.1

執(zhí)行。方法組合5.3.1 串聯(lián)檢測 對于感染率≥的奶牛群或在凈化初期，采用

或

RBT、

方法檢測初

c-ELISA

或

SAT、

初篩、

確診組合。5.3.2 并聯(lián)檢測 對于感染率

、、、c-ELISA

種以上方法平行檢測，任一方法檢測結(jié)果陽性或可疑視為感染陽性牛。檢測頻率5.4.1 外引牛引入前在輸出地檢測一次，引入后隔離

d～60

d，混群前再檢測一次。5.4.2 流產(chǎn)牛 對流產(chǎn)母牛進(jìn)行血清學(xué)檢測，對流產(chǎn)物進(jìn)行病原學(xué)檢測。5.4.3 感染牛群

2～4

個月普檢一次，連續(xù)三次檢測均為陰性視為假定凈化牛群。5.4.4 假定凈化牛群 每隔

4～6

個月普檢一次，連續(xù)兩次檢測均為陰性，視為凈化牛群。檢出感染陽性牛時按

5.4.3

執(zhí)行。5.4.5 凈化牛群

3～6

5.1

執(zhí)行，檢出感染陽性牛時按

執(zhí)行。6 凈化標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)2管理條件。7 凈化維持種源管理7.1.1 國內(nèi)引進(jìn)種用牛、乳用牛、精液、胚胎，應(yīng)來源于取得《種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營許可證》的單位，DB

13/T

5625—2022優(yōu)先選擇“國家級布魯氏菌病凈化場”。7.1.2 疫系統(tǒng)出具的《入境貨物檢驗檢疫證明》。追溯管理人員管理7.3.1本場職工無布魯氏菌病等人畜共患病，定期體檢并取得健康證明。7.3.2 不得將生鮮的牛羊肉、乳等風(fēng)險產(chǎn)品帶入場區(qū)。7.3.3 從事接觸奶牛、污染物等感染材料的工作時，做好個人防護(hù)。消毒管理消毒工作按照NY/T

5049要求執(zhí)行。無害化處理等按《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》處理。DB

13/T

5625—2022

附 錄 A（規(guī)范性）布魯氏菌抗體瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗A.1 原理光滑型布魯氏菌經(jīng)三氯乙酸提取獲得2Lipopolysaccharide，一種是稱為天然半抗原（Native

Hapten，NH）的多聚糖。LPS抗原免疫原性強(qiáng)，自然菌和疫苗菌均可刺激機(jī)體產(chǎn)生LPS抗體。NH產(chǎn)生NH抗體，而疫苗菌很難產(chǎn)生NH抗體?？乖c血清抗體均可在瓊脂凝膠上擴(kuò)散，結(jié)合形成復(fù)合物時在瓊脂界面出現(xiàn)可見沉淀線。NH抗原分子量小、擴(kuò)散快，沉淀線則靠近被檢血清端。據(jù)此可以鑒別自然感染抗體和疫苗免疫抗體。A.2 材料A.2.1 儀器與耗材恒溫恒濕培養(yǎng)箱，10

μL～100

μL的移液器及吸頭。A.2.2 試劑和陰性對照血清。A.2.3 被檢血清牛的新鮮血清。A.3 操作步驟A.3.1

將試劑盒恢復(fù)至室溫；A.3.2

在瓊脂平板的中心孔加入

μL

LPS和NH混合抗原（圖1“”孔）；A.3.3

在瓊脂平板周圍孔的其中一孔加入15

μL陽性對照血清（圖1A.3.4

在瓊脂平板周圍孔的另一孔加入15

μL陰性對照血清（圖1“?”孔）；A.3.5

在瓊脂平板周圍孔的剩余孔每孔加入15

μL被檢血清（圖1“1～4”孔）；A.3.6

將瓊脂平板置于恒溫恒濕培養(yǎng)箱，22

3

℃孵育

h～

h后觀察結(jié)果。圖1 加樣示意圖A.4 結(jié)果判定DB

13/T

5625—2022A.4.1 AgAgLPS抗原抗NH?2所示）試驗