HIV實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理

艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理1精選ppt實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理行政支持行政部門和領(lǐng)導(dǎo)HIV實(shí)驗(yàn)室建設(shè)和開展資金人員監(jiān)督支持人員培訓(xùn)每年市疾控中心組織上崗證環(huán)境條件：實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及其建筑、設(shè)施、設(shè)備必須符合?全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理方法?的要求。HCV，HBV及梅毒等血清學(xué)檢測(cè)在滿足實(shí)驗(yàn)室管理要求和保證生物平安的條件下，可以與HIV檢測(cè)共享空間和設(shè)備，應(yīng)防止交叉污染。2精選ppt實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理樣品采集、運(yùn)送和處理送檢單收樣登記表HIV抗體復(fù)檢檢測(cè)單檢測(cè)方法和試劑的選擇試劑的出入庫(kù)及使用記錄供給品、耗材〔試劑〕質(zhì)量驗(yàn)收記錄表3精選ppt實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)儀器設(shè)備溫度記錄表儀器設(shè)備使用、檢定、維修、維護(hù)記錄本強(qiáng)檢計(jì)量器具周期檢定〔自?！撤桨副砦募臀募芾韺?shí)驗(yàn)原始記錄表結(jié)果報(bào)告樣品登記和保存〔唯一編碼〕4精選ppt實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理文件和文件管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOP〕〔1〕樣品的接收、登記、處理、保存和運(yùn)輸；〔2〕檢測(cè)方法和步驟；〔3〕試劑使用和保存；〔4〕儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)；〔5〕質(zhì)量控制要求及程序；〔6〕結(jié)果解釋與報(bào)告；〔7〕保密程序；〔8〕實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存；〔9〕不確定樣品追蹤和處理；〔10〕實(shí)驗(yàn)室平安防護(hù)及實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒。文件存檔〔保存10年以上〕5精選pptELISA實(shí)驗(yàn)影響因素6精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素樣品溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性

可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)〔紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素〕，在洗滌過程中往往難以完全洗脫，它可使過氧化氫釋放出原生態(tài)氧，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽(yáng)性。輕微溶血沒事，嚴(yán)重溶血的標(biāo)本易產(chǎn)生假陽(yáng)性。受細(xì)菌污染的標(biāo)本因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。7精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素樣品塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性

，最好使用真空采血管或抗凝管。〔抗凝劑會(huì)略有影響，但影響不大〕標(biāo)本凝固不全在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心別離血清，使血清中仍殘留局部纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再別離血清。8精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素按說明書要求，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)取出試劑穩(wěn)定加樣加樣的量要準(zhǔn)確移液器要經(jīng)常清洗定期校準(zhǔn)加樣位置孔壁1/3以下不可濺出不可產(chǎn)生氣泡必須使用一次性TIP頭，嚴(yán)格控制，防止交叉污染先加稀釋液的，加樣時(shí)可用移液器孔內(nèi)吹打混勻移液器的校準(zhǔn)可以送檢，可以自校，自校要有SOP有記錄9精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素孵育時(shí)間嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作容易控制溫度嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作用校準(zhǔn)的溫度計(jì)監(jiān)測(cè)溫度，特別是冬天，防止因溫度過低導(dǎo)致假陰性。封板孵育時(shí)不貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁,難以清洗徹底。恒溫孵育設(shè)備的使用與維護(hù)校準(zhǔn)的溫度計(jì)監(jiān)測(cè)ELISA反響溫度水浴的尤其要注意水位10精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素洗板洗液的量試劑不同，板孔的大小差異會(huì)導(dǎo)致洗液的量的不同，為保證洗的徹底，原那么是量足夠多且不會(huì)逸出。浸泡時(shí)間嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，一般30-60秒，不設(shè)置浸泡時(shí)間或時(shí)間太短，洗脫不徹底的話會(huì)產(chǎn)生“花板〞。保持針孔通暢不阻塞血清中殘留的的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易使洗板機(jī)的針孔處于阻塞狀態(tài)，造成未結(jié)合標(biāo)記酶洗脫不徹底，導(dǎo)致“花板〞。應(yīng)做好洗板機(jī)的維護(hù)工作。拍板11精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素洗板機(jī)的檢定、使用及維護(hù)檢定：注液量和殘留量〔每孔＜5微升〕使用：設(shè)置程序〔注液量、洗板次數(shù)、浸泡時(shí)間、洗板位置〕維護(hù)：消毒液沖洗，蒸餾水沖洗12精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素顯色加底物時(shí)，應(yīng)懸空加液，防止觸及板孔內(nèi)壁造成交叉污染。應(yīng)先加底物緩沖液A再加TMB(四甲基聯(lián)苯胺)底物B，參加順序不能顛倒。已顯淺藍(lán)色的TMB底物堅(jiān)決不能用。個(gè)別試劑要求A、B液先混合后再加。溫度與時(shí)間的控制。13精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素終止及讀板讀板前應(yīng)保證板孔底部干凈，無異物，無水氣，無氣泡，特別是在冬天。酶標(biāo)儀不應(yīng)放置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15-30℃,使用前先預(yù)熱15-30min,測(cè)讀板結(jié)果會(huì)更穩(wěn)定。酶標(biāo)儀必須檢定標(biāo)準(zhǔn)板廠家14精選ppt酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕的影響因素Cutoff值計(jì)算及結(jié)果判定本卷須知嚴(yán)格按照試劑說明書要求的數(shù)量做陰、陽(yáng)性對(duì)照根據(jù)陰、陽(yáng)性對(duì)照的值判定實(shí)驗(yàn)是否成立嚴(yán)格按照試劑說明書要求計(jì)算Cutoff值注意空白15精選ppt原始記錄標(biāo)明空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、外部對(duì)照以及待檢樣品的位置試劑盒廠家、測(cè)定方法、批號(hào)、效期操作人員和復(fù)核人員姓名〔簽名〕檢測(cè)日期其他〔環(huán)境、設(shè)備、實(shí)驗(yàn)依據(jù)等〕注意樣本的溯源性16精選ppt廢棄物處理消毒液〔含氯消毒劑、75%乙醇、2%戊二醛〕干烤消毒〔140℃2-3h〕高壓蒸汽消毒〔121℃15-20min〕高壓滅菌器檢定：溫度和壓力高壓滅菌器使用效果監(jiān)測(cè)：化學(xué)指示卡，生物監(jiān)測(cè)〔嗜熱脂肪桿菌芽孢〕17精選pptELISA實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制18精選pptELISA的質(zhì)量控制試劑盒內(nèi)部對(duì)照：試劑盒內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清。試劑盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測(cè)臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品：為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置的，包括強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽(yáng)性質(zhì)控，以該試劑盒臨界值〔Cut-off〕的2～3倍為宜。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測(cè)的有效性，因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。19精選ppt室內(nèi)質(zhì)控品的來源商品化的室內(nèi)質(zhì)控品實(shí)驗(yàn)室自己制備〔比較經(jīng)濟(jì)〕混合試劑盒內(nèi)部對(duì)照血清，通過做實(shí)驗(yàn)確定陰陽(yáng)性對(duì)照的混合比例，混合，分裝保存?；旌螲IV抗體陽(yáng)性人血清、HIV抗體陰性人血清，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，0.2μm生物濾膜過濾除菌，56℃30分鐘加熱滅活處理。通過做實(shí)驗(yàn)確定陰陽(yáng)性血清的混合比例，混合，分裝保存。高濃度商品化室內(nèi)質(zhì)控品再稀釋20精選ppt室內(nèi)質(zhì)控品的保存一次購(gòu)置或制備量應(yīng)該足夠本實(shí)驗(yàn)室至少一年使用等量分裝，可以按單次使用、單日使用、最長(zhǎng)一周使用的量確定每個(gè)分裝的量不同室內(nèi)質(zhì)控品應(yīng)做好標(biāo)記，最好使用不同顏色的標(biāo)簽，以防止混用應(yīng)存放于-70℃以下，如無條件那么存放于非自動(dòng)除霜的-20℃冰箱一旦融解后應(yīng)存放于2-8℃，一周后必須棄去，不能重新凍存使用21精選ppt樣品的采集、處理、保存、運(yùn)送及接收22精選ppt樣品的采集和處理建議用K2EDTAK3EDTA枸櫞酸鈉的抗凝管采血,不用肝素抗凝管采血血漿1500-3000r/min離心15min，吸上層血漿血清室溫自然放置1-2h，待血液凝固、血塊收縮后1500-3000r/min離心15min，吸上層血清23精選ppt樣品的保存建議用1.5ml-2.0ml的螺口凍存管或離心管保存.抗體及抗原檢測(cè)的血清或血漿樣品應(yīng)存放于-20℃以下,一周內(nèi)檢測(cè)的樣品2-8℃24精選ppt樣品的保存盡量多分裝保存25精選ppt樣品的運(yùn)送要求樣本量>1ml樣本的質(zhì)量無嚴(yán)重溶血，無微生物污染，無血脂過多，無嚴(yán)重黃疸等管子的質(zhì)量防漏三層包裝單管包裝重新采樣26精選ppt樣品的運(yùn)送要求樣品和送檢單分開專人送樣專門運(yùn)送箱〔實(shí)驗(yàn)室人員號(hào)碼和聯(lián)系方式〕市疾控確證實(shí)驗(yàn)室血清or血漿2-8度運(yùn)送或者凍存狀態(tài)下直接運(yùn)送27精選ppt送樣單要求送樣單打印檢測(cè)者/審核者手簽，單位或?qū)嶒?yàn)室蓋章信息完整(真實(shí)姓名、送檢人群、身份證號(hào)碼、聯(lián)系、現(xiàn)地址及戶籍地址等)詳細(xì)的樣本來源(監(jiān)管場(chǎng)所的具體到哪個(gè)監(jiān)管場(chǎng)所)充分利用備注欄標(biāo)準(zhǔn)性(試劑、cutoff值等)28精選ppt樣品的接收翻開包裝，注意生物平安，個(gè)人防護(hù)核對(duì)樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏記錄一般記錄，另外記錄有無嚴(yán)重溶血，微生物污染、血脂過多及黃疸等情況開蓋生物平安柜中，個(gè)人防護(hù)29精選pptHIV抗體檢測(cè)30精選pptHIV抗體檢測(cè)的目的HIV抗體檢測(cè)可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測(cè)等。以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測(cè)、自愿咨詢檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及變化趨勢(shì)，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群。31精選pptHIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOP〕。篩查試驗(yàn)陽(yáng)性，須做確證試驗(yàn)。篩查試驗(yàn)陰性，不應(yīng)做確證試驗(yàn)。32精選pptHIV抗體篩查試驗(yàn)流程樣品初篩試驗(yàn)篩查試劑陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)均陽(yáng)性反應(yīng)確證試驗(yàn)報(bào)告陰性33精選ppt篩查試劑國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)ELISA試劑批批檢合格，在有效期內(nèi)推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑初篩試劑高敏感性復(fù)檢試劑高特異性34精選ppt35精選ppt36精選ppt37精選ppt篩查樣品血清血漿全血DBS/DPS唾液尿液38精選ppt篩查方法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)〔ELISA〕第三代試劑雙抗原夾心法單純檢測(cè)HIV抗體第四代試劑抗原抗體聯(lián)合診斷試劑同時(shí)檢測(cè)P24抗原和抗HIV-1/2抗體縮短窗口期注意復(fù)檢試劑的選擇化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)快速檢測(cè)〔RT〕39精選ppt篩查試驗(yàn)的結(jié)果報(bào)告HIV抗體篩查試驗(yàn)陰性反響報(bào)告為“HIV抗體陰性〞HIV抗體篩查試驗(yàn)陽(yáng)性反響報(bào)告為“HIV抗體待復(fù)檢〞HIV抗體復(fù)檢試驗(yàn)兩次檢測(cè)均陰性報(bào)告為“HIV抗體陰性〞HIV抗體復(fù)檢試驗(yàn)兩次檢測(cè)均陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)報(bào)告為“HIV抗體待確證〞40精選pptHIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒嬰兒會(huì)由于被動(dòng)攜帶母親的抗體而連續(xù)幾個(gè)月至十幾個(gè)月出現(xiàn)抗體陽(yáng)性。嬰兒滿12個(gè)月進(jìn)行第一次HIV抗體檢測(cè)。使用兩種不同原理或不同廠家篩查試劑進(jìn)行抗體檢測(cè)，兩種篩查試劑檢測(cè)結(jié)果均為陰性反響，報(bào)告HIV抗體陰性，可排除感染。檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)陽(yáng)性反響〔一種為陰性反響一種為陽(yáng)性反響或兩種均陽(yáng)性反響〕，不能排除感染，應(yīng)繼續(xù)追蹤隨訪，至兒童滿18個(gè)月時(shí)再次進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)。41精選pptHIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒嬰兒滿18個(gè)月時(shí)應(yīng)再次進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)。使用兩種不同原理或不同廠家篩查試劑進(jìn)行抗體檢測(cè)。兩種篩查試劑的檢測(cè)結(jié)果均為陰性反響，報(bào)告HIV抗體陰性，可排除感染。檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性反響〔一種為陰性反響一種為陽(yáng)性反響或兩種均呈陽(yáng)性反響〕，進(jìn)一步進(jìn)行確證試驗(yàn)，根據(jù)確證試驗(yàn)的結(jié)果判斷是否感染HIV。做好檢測(cè)后咨詢。42精選pptHIV抗體檢測(cè)結(jié)果解釋HIV抗體陰性—未發(fā)生感染〔排除“窗口期〞〕HIV抗體不確定非特異性的反響感染早期感染晚期HIV抗體陽(yáng)性—發(fā)生感染〔排除疫苗使用〕43精選pptHIV抗體快速檢測(cè)44精選pptHIV抗體快速檢測(cè)快速檢測(cè)，是艾滋病實(shí)驗(yàn)室多了一種檢測(cè)方法快速檢測(cè)，是為了更多更快的發(fā)現(xiàn)感染者快速檢測(cè)，不是為了取代實(shí)驗(yàn)室，但不能因?yàn)橛辛藢?shí)驗(yàn)室而放棄使用快速檢測(cè)快速檢測(cè)手段能否成為新型檢測(cè)-咨詢模式，或基于醫(yī)療機(jī)構(gòu)的有效的檢測(cè)方法----取決于檢測(cè)的質(zhì)量45精選pptHIV抗體快速檢測(cè)方法—PA明膠顆粒凝集試驗(yàn)〔PA〕：將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反響，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種:同時(shí)檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體以及分別檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體。有效試驗(yàn)必須有陰性和陽(yáng)性質(zhì)控。46精選pptHIV抗體快速檢測(cè)方法—免疫滲濾試驗(yàn)免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)ELISA和斑點(diǎn)免疫膠體金〔或膠體硒〕快速試驗(yàn)。以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點(diǎn)狀固定在膜上，加待檢樣品。陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)。反響時(shí)間在10分鐘以內(nèi)。有效試驗(yàn)的質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。47精選pptHIV抗體快速檢測(cè)方法—免疫層析試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品〔血液或唾液〕沿著固相載體遷移，陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。48精選ppt結(jié)果判讀—嚴(yán)格參照試劑說明書反響區(qū)和質(zhì)控區(qū)均出現(xiàn)紅色條帶為陽(yáng)性。質(zhì)控區(qū)有條帶，反響區(qū)無條帶為陰性。質(zhì)控區(qū)無條帶那么實(shí)驗(yàn)無效。49精選pptHIV抗體快速檢測(cè)的外部質(zhì)控外部對(duì)照質(zhì)控品，可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽(yáng)性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保存的陽(yáng)性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗(yàn)的外部質(zhì)控品。以下情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號(hào)；更換檢測(cè)人員；更換包裝；每個(gè)檢測(cè)日；更換試劑廠家。建議：每個(gè)檢測(cè)日檢測(cè)一次陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測(cè)量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控。50精選ppt快速檢測(cè)的本卷須知不提倡個(gè)人在家中檢測(cè)。應(yīng)由經(jīng)培訓(xùn)的專業(yè)人員操作，注意生物平安操作，防止職業(yè)暴露發(fā)生。在質(zhì)控窗口內(nèi)應(yīng)出現(xiàn)質(zhì)控帶，如實(shí)驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無效，樣品須重檢。出現(xiàn)以下問題，提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理?yè)p傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯(cuò)誤、缺失或字跡模糊〔特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號(hào)和貨號(hào)，失效期或/和生產(chǎn)日期〕；缺失目錄；泄漏或污染；不適宜的存放條件；保護(hù)包裝紙破損或污染。51精選ppt快速檢測(cè)的本卷須知環(huán)境溫度,尤其是在冬天血清/血漿全血稀釋緩沖液樣本的量反響的時(shí)間生物平安廢棄物處理做好實(shí)驗(yàn)的原始記錄52精選ppt不同廠家的快檢試劑操作要求廠家樣品要求血量(ul)樣品稀釋是否加緩沖液最小反應(yīng)時(shí)間(分鐘)最大反應(yīng)時(shí)間(分鐘)試劑儲(chǔ)存要求明膠顆粒法(PA)血清/血漿251:32N120/2-10℃DETERMINE血清/血漿/全血50N用全血時(shí)加1滴15602-30℃SD血清1