斑點酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范

JJF2035—20231斑點酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于斑點酶聯(lián)免疫分析儀的校準(zhǔn),其他板型(48孔板或24孔板等)的斑點酶聯(lián)免疫分析儀可以參照本規(guī)范進行校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:ANSI/SLAS4-2004微孔反應(yīng)板.井位置(Microplates—WellPositions)凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語3.1斑點酶聯(lián)免疫分析儀enzyme-linkedimmunospotanalyzer通過在專用微孔反應(yīng)板上包被抗體,捕獲分泌特定細胞因子的細胞,然后以酶聯(lián)技術(shù)顯色,形成與細胞對應(yīng)的微小斑點,最后對顯色斑點進行自動顯微計數(shù)的分析儀器。4概述斑點酶聯(lián)免疫分析儀(以下簡稱分析儀)主要由成像系統(tǒng)、運動系統(tǒng)、控制處理系統(tǒng)和顯示系統(tǒng)組成。分析時,成像系統(tǒng)獲取微孔反應(yīng)板上孔內(nèi)斑點圖像,然后通過顯示系統(tǒng)進行斑點統(tǒng)計,得到該孔內(nèi)斑點總數(shù)。5計量特性分析儀的計量特性及計量特性指標(biāo)見表1。表1斑點酶聯(lián)免疫分析儀計量特性計量特性計量特性指標(biāo)斑點計數(shù)示值誤差±5.0%重復(fù)性≤2.0%注:以上技術(shù)指標(biāo)不適用于合格判別,僅供參考。6校準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件6.1.1溫度:(15~30)℃;JJF2035—202326.1.2相對濕度:不大于80%;6.1.3供電電源:電壓(220±22)V,頻率(50±1)Hz。6.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)采用國家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),技術(shù)要求如下:在模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)四角設(shè)置4個定位孔,其中印有可識別字符,用來進行檢測器定位;孔板中間散落設(shè)置4個標(biāo)準(zhǔn)計數(shù)孔,每一個標(biāo)準(zhǔn)計數(shù)孔分別含有50個、100個、200個、500個模擬斑點(位置分布可參考附錄A所示),相對擴展不確定度應(yīng)優(yōu)于3.0%(k=2)。7校準(zhǔn)項目和校準(zhǔn)方法校準(zhǔn)前按照分析儀使用說明書進行調(diào)試,將模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)放入分析儀載物倉并固定,采用四角的4個定位孔進行定位(參照附錄A)。7.1斑點計數(shù)示值誤差分別對模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的4個標(biāo)準(zhǔn)計數(shù)孔拍照并計數(shù),每孔重復(fù)測量3次, 按式(1)計算每孔內(nèi)斑點個數(shù)的測量值與標(biāo)準(zhǔn)值之間的相對示值誤差。 ΔNr,i×100%(1)式中:ΔNr,i—第i孔內(nèi)斑點計數(shù)的相對示值誤差,%;Ni—第i孔內(nèi)斑點個數(shù)測量平均值,個;Ns,i—第i孔內(nèi)斑點個數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值,個。7.2重復(fù)性對模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值為200的標(biāo)準(zhǔn)計數(shù)孔連續(xù)拍照并計數(shù)6次,按式(2)計算斑點個數(shù)測量相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,作為分析儀的重復(fù)性表征。RSD=(iN)2××100%(2)式中:RSD—相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,%;Ni—第i次斑點個數(shù)測量的結(jié)果,個;N—6次斑點個數(shù)測量結(jié)果的平均值,個。8校準(zhǔn)結(jié)果表達校準(zhǔn)記錄應(yīng)盡可能詳盡地記載測量數(shù)據(jù)和計算結(jié)果,推薦的校準(zhǔn)記錄格式見附錄B。示值誤差的測量不確定度應(yīng)按JJF1059.1—2012的要求評定,不確定度評定實例見附錄D。經(jīng)校準(zhǔn)的儀器應(yīng)出具校準(zhǔn)證書,校準(zhǔn)證書應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求,校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式見附錄C。JJF2035—202339復(fù)校時間間隔由于復(fù)校時間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等多因素所1年。4附錄A模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)示意圖及孔內(nèi)畫面圖模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外形參照標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板，長為12.7cm,寬為8.5cm,高為1.3cm,外部包括上、下金屬框架，內(nèi)部包括白色背景紙、高透光塑料膜片和玻璃片，上、下金屬框架依靠螺釘連接緊固。高透光塑料膜片孔位與標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板一致，結(jié)構(gòu)如圖A.1所示，其中四角的4個孔為定位孔，孔內(nèi)印有可識別2004),孔內(nèi)分布直徑為(50±8)μm黑色的模擬斑點，量值分別為(50±1)個、(100±1)個、(200±1)個、(500±2)個(k=2),如圖A.2所示。28E圖A.1模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)示意圖5(b)B6孔內(nèi)畫面圖(d)E9孔內(nèi)畫面圖圖A.2模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)孔內(nèi)畫面圖JJF2035—20236附錄B校準(zhǔn)原始記錄參考格式送校單位校準(zhǔn)地址儀器型號儀器編號制造廠商校準(zhǔn)日期環(huán)境溫度℃相對濕度%校準(zhǔn)人核驗人技術(shù)依據(jù)主要測量設(shè)備名稱/型號測量范圍不確定度/準(zhǔn)確度等級/最大允許誤差檢定/校準(zhǔn)證書編號/有效期B.1斑點計數(shù)示值誤差孔位斑點個數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值個斑點個數(shù)測量值/個平均值個斑點計數(shù)示值誤差%擴展不確定度/%(k=2)E350B6100G6200E9500B.2重復(fù)性孔位斑點個數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值個斑點個數(shù)測量值/個平均值/個重復(fù)性/%G6200JJF2035—20237附錄C校準(zhǔn)證書內(nèi)頁推薦格式C.1校準(zhǔn)證書內(nèi)頁證書編號××××××—××××校準(zhǔn)環(huán)境條件及地點:溫度℃地點相對濕度%其他校準(zhǔn)使用的主要設(shè)備名稱/型號測量范圍不確定度/準(zhǔn)確度等級/最大允許誤差檢定/校準(zhǔn)證書編號/有效期第×頁共×頁JJF2035—20238C.2校準(zhǔn)證書校準(zhǔn)結(jié)果頁證書編號××××××—××××校準(zhǔn)結(jié)果被校項目及校準(zhǔn)結(jié)果:校準(zhǔn)項目校準(zhǔn)結(jié)果斑點計數(shù)示值誤差標(biāo)準(zhǔn)值個測量平均值個示值誤差%%擴展不確定度(k=2)%重復(fù)性/%以下空白第×頁共×頁JJF2035—20239附錄D斑點計數(shù)示值誤差測量結(jié)果的不確定度評定示例D.1測量模型ΔNr×100%(D.1)式中:ΔNr—斑點計數(shù)相對示值誤差,%; N—斑點個數(shù)測量平均值,個;Ns—斑點個數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值,個。D.2合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計算公式分析儀測量重復(fù)性引入的不確定度u(N)、模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度u(Ns)之間不相關(guān),所以標(biāo)準(zhǔn)不確定度可按式(D.2)得到:uc=2u2(N)+-2u2(Ns)(D.2) D.3.1重復(fù)性引入的不確定度 D.3.1重復(fù)性引入的不確定度u(N)。D.3.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度u(Ns)。D.4不確定度分量的計算D.4.1重復(fù)性引入的不確定度u(N)對模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中的同一孔位,重復(fù)進行6次測量,考察測量方法由重復(fù)性引入的實驗標(biāo)準(zhǔn)偏差,檢測數(shù)據(jù)及計算結(jié)果見表D.1。表D.1斑點計數(shù)的6次測量結(jié)果單位:個標(biāo)準(zhǔn)值Ns測量值實驗標(biāo)準(zhǔn)偏差s505050504950500.4110010099991001001000.522001991982002001991990.755004974984994994985001.05斑點計數(shù)示值誤差的實際校準(zhǔn)工作中,以3次測量平均值為測量結(jié)果計算示值誤差,因此斑點計數(shù)示值誤差校準(zhǔn)中測量重復(fù)性引入的不確定度計算見公式(D.3),計算結(jié)果見表D.2。u(N)=(D.3)JJF2035—202310表D.2斑點計數(shù)示值誤差校準(zhǔn)中重復(fù)性引入的不確定度單位:個標(biāo)準(zhǔn)值Ns測量值平均值N u(N)50504949490.241001009999990.312001992001991990.445004984994974980.61D.4.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度u(Ns)根據(jù)模擬斑點計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供的擴展不確定度Us和包含因子ks,按照公式(D.4)計算,計算結(jié)果見表D.3。表D.3u(Ns)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度(D.4)單位:個標(biāo)準(zhǔn)值Ns擴展不確定度Us包含因子ksu(Ns)50120.50100120.50200120.50500221.00D.5標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)不確定度見表D.4。表D.4標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)值Ns/個u(N)/個靈敏系數(shù)u(Ns)/個 靈敏系數(shù)-500.240.020.50-0.01961000.310.010.50-0.00992000.440.0050.50-0.00505000.610.0021.00-0.0020D.6合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度以標(biāo)準(zhǔn)值50為例,按照公式(D.2)進行計算合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc,其他計算結(jié)果見表D.5。uc=2u2(N)+-2u2(Ns)==1.1