雞神經(jīng)病靶酯要點

成年雞神經(jīng)病靶酯酶的同一性和特征描述1Contents小結(jié)實驗結(jié)果所選用的材料與方法文章的主要內(nèi)容總結(jié)文章出處及作者簡介2文章出處及作者簡介文章出處：GENE2021.01作者及其簡介：常平安，伍一軍等伍一軍，男，安徽桐城人。佐治亞醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)與遺傳學(xué)系基因調(diào)控專業(yè)博士后，現(xiàn)任中國科學(xué)院動物學(xué)研究所研究員，中科院研究生院教授，博士研究生導(dǎo)師。主持分子毒理學(xué)實驗室，專業(yè)方向為分子毒理學(xué)，主要研究領(lǐng)域為神經(jīng)毒理學(xué)、環(huán)境毒理學(xué)以及藥物引起的神經(jīng)疾病。主要研究興趣在于環(huán)境有害化學(xué)物質(zhì)的神經(jīng)毒性機(jī)制；神經(jīng)病靶標(biāo)酯酶引發(fā)遲發(fā)性神經(jīng)毒性的分子機(jī)理；3文章的主要內(nèi)容總結(jié)這篇文章主要講NTE的基因排序。NTE的基因中的活性部位。NTE的基因中不同部位被GFP標(biāo)記后主要在哺乳動物中的分布。GFP標(biāo)記的cNTER可以被macroautophagy和蛋白酶體這兩種東西破壞，而導(dǎo)致其含量下降。4NTE的概念及其根本特點神經(jīng)病變靶標(biāo)酯酶(neuropathytargetesterase,NTE)是在研究有機(jī)磷化合物引起的遲發(fā)性神經(jīng)病變(organophosphate2induceddelayedneuropathy,OPIDN)的發(fā)生機(jī)制過程中發(fā)現(xiàn)的。通常認(rèn)為NTE的抑制和“老化〞是OPIDN發(fā)生的前提[。NTE是一個由1327個氨基酸組成的跨膜蛋白。將不同的NTE肽段在大腸桿菌中重組表達(dá),發(fā)現(xiàn)具有有機(jī)磷敏感性和戊酸苯酯水解活性的重組多肽至少含有727-1216氨基酸序列,這一重組多肽被稱為NTE酯酶活力域(NTEesterasedomain,NEST)。以往的研究結(jié)果提示,NTE除了具有酯酶活力外,NEST在神經(jīng)細(xì)胞分化和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中起著重要作用。NTE不僅存在于腦、脊髓和周圍神經(jīng)，在外周淋巴細(xì)胞內(nèi)含量也很高。5所選用的材料與方法成年雞及各個實驗用的一些根本試劑。1.分子克隆雞NTE基因的調(diào)控序列。2.雞NTE序列的擴(kuò)展和延伸。3.質(zhì)粒的構(gòu)建4.細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染5.給細(xì)胞施加MG132,AC,3-MA,雷帕霉素等處理因素。6.Westernblotting分析。7.NTE活性檢8.共聚焦顯微鏡測定簡介6實驗結(jié)果7雞的完整的NTE序列是4501bp組成〔basepairkilo-basepairDNA堿基對數(shù)目生物學(xué)上描述DNA常用的kb、nt、bpkb=千堿基對kilobasent＝核苷酸nucleotidebp＝堿基對basepair〕雞的NTE有兩個不同的區(qū)域，其中一個是推定的調(diào)節(jié)區(qū)〔cNTER〕,另外一個是催化區(qū)，也叫NTE酶的活性區(qū)域序列分析說明，雞的NTE的排列與人和鼠的NTE排列有高度的相似性，其中與人有80%的相似性，與鼠有79%的相似性。8實驗結(jié)果二，cNEST是有NTE活性的，而不是cNTER是用細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法來證明的。就是用GFP來標(biāo)記cNEST和cNTER的羧基端，48h的轉(zhuǎn)染后，用Westernblot法來測定下她們的分子量，結(jié)果說明他們的分子量分別為65和83kDaNTE活性測定是在HEK293Tcells中看GFP的表達(dá)。9DistributionofGFPtaggedcNTERandcNESTproteinin

mammaliancells因為cNTERandcNEST都用GFP來標(biāo)記，所以cNTERandcNEST的分布可以用熒光顯微鏡直接分析出來10熒光顯微鏡結(jié)果11NTER和NEST分子量的測定12不同處理因素對cNTER的影響131415Discussion

相對于哺乳動物的PNPLAs，雞的PNPLAs尚未引起足夠的重視。盡管成年母雞常被用作OPIDN的動物模型。但是關(guān)于NTE的排序和分子特征知道的很少。在目前的研究中，雞的NTE被完整的別離出來，并且在氨基酸水平與人和小鼠有高度的相似性。另外，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和區(qū)域與人也有高度的相似性。16AnERlikelocalizationofpcNTER-GFPwasobservedandcNTEwasreasonablyconsideredtobeanER-anchoredprotein.

cNTEmaybedegradedbymacroautophagy.

17.ChickenNTEwasanER-anchoredproteinAnERlikelocalizationofpcNTER-GFPwasobservedandcNTEwasreasonablyconsideredtobeanER-anchoredprotein.Therefore,cNTEmaybedegradedbymacroautophagy.18thatcNTEwasdegradedbytheproteasomeandthesimilarD-boxsequencesmayactasrecognitionsignalfordegradation.However,furtherstudiesarerequiredtodeterminewhethertheseresiduesaffectthedegradationofcNTE.19總結(jié)Insummary,chickenNTEgenewasfirstlyidentified.BycharacterizationoftheregulatoryandesteraseactivitydomainofchickenNTE,chickenNTEwasconfirmedtobeanER-anchoredproteinandbedegradedbymacroautophagyandtheproteasomepathway.Theseresultsmayprovideso