替米考星在健康成年雜交綿羊體內(nèi)藥動學研究

替米考星在健康成年雜交綿羊體內(nèi)藥動學研究

托米科興星是美國利普公司在20世紀80年代開發(fā)的一種半合成藥物集群。替米考星由于其特殊的抗菌活性和藥動學特征,對所有的革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用。尤其對胸膜肺炎放線桿菌、溶血性巴氏桿菌、多殺性巴氏桿菌以及畜禽霉形體具有比泰樂菌素更強的抗菌活性。不論是內(nèi)服還是皮下注射給藥,吸收迅速,達峰快,血中藥物半衰期長,藥物組織穿透力強,體內(nèi)分布廣,尤其在肺組織和乳中藥物濃度高,維持時間長,半衰期達1～2d。因此,先后在澳大利亞、巴西、法國、馬來西亞、意大利、西班牙、美國等國家被批準上市,臨床用于牛、山羊、綿羊、奶牛、豬、雞等動物由敏感菌引起的感染性疾病,特別是畜禽呼吸道感染,如家畜放線桿菌性胸膜肺炎和巴氏桿菌病、雞霉形病以及泌乳動物乳房炎的防治。但替米考星應用于綿羊的藥代動力學資料很少。本試驗通過研究替米考星靜脈和皮下注射后在綿羊體內(nèi)的藥動學規(guī)律,為制定給藥方案提供科學依據(jù)。1材料和方法1.1實驗試劑和試劑替米考星對照品(含量91.8%)和30%替米考星注射液,由山東濟寧獸藥廠提供;乙腈、甲醇、四氫呋喃(均為色譜純),購自DIKMA公司;二正丁胺(分析純),購自北京瀛海精細化工廠;乙酸胺(分析純),購自天津市天大化工實驗廠;85%磷酸(分析純),購自天津市天河化學試劑廠;純水(色譜純),雙蒸水再經(jīng)Milli-Q過濾。1.2色譜、色譜和質譜條件高效液相色譜儀(裝備有SCL-10AVP系統(tǒng)控制儀、DGU-12A脫氣設備、SPD-M10AVP紫外檢測儀、LC-10ATVP泵、Class-VP工作站和100μL進樣環(huán)),日本Shimadzu公司;色譜柱,C18反相色譜柱,InertsilOSD-3(4.6mm×250mm,粒徑5mm);HPLC工作條件,紫外檢測波長288nm,流動相為乙腈、水、四氫呋喃、二丁胺磷酸緩沖液(130/790/55/25,體積比),流速為1.1mL/min。1.3單次給藥、血藥濃度、單次注射單劑量10.5%10只健康成年雜交綿羊,體重24～34kg,雌雄各半,舍內(nèi)飼喂不含抗菌藥物的全價日糧,自由飲水。給藥前稱重,編號,隨機取4只(雌雄各半),頸靜脈緩慢注射單劑量5mg/kg替米考星注射液。21d后,10只綿羊隨機分為A、B兩組,分別頸部兩側皮下多點注射單劑量10mg/kg和30mg/kg替米考星注射液。1.4血清采血試驗首次給藥前,于羊側頸靜脈采1次空白血樣。靜脈注射給藥后,分別于0.08、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6、12、24、48、96h采血,皮下注射給藥后,分別于0.08、0.25、0.5、1、2、3、4、6、12、24、48、72(30mg/kg組)、96h采血8mL左右,置于聚丙烯離心管中,室溫下靜置2h,以3500r/min離心10min,吸取上層血清于聚丙烯管中,-20℃保存,待用。1.5標準溶液制備替米考星對照品用乙腈溶解并定容制成2.0mg/mL標準貯備液,4℃避光保存。1.6方法的檢測限和定量限用流動相將一定體積的替米考星標準添加液混合稀釋,配成濃度為0.05、0.5、1.0、5、10μg/mL的混合標準溶液,各取100μL進樣,每個濃度進樣3次,然后以替米考星峰面積(Y)與藥物濃度(X)作直線回歸,并確定其最低檢測限和定量限。以0.05、0.5、5μg/mL3個添加濃度測定血清樣品中替米考星的回收率、變異系數(shù)。1.7標準曲線及樣品的制備取10.0mL甲醇預洗SPE柱,10.0mL水平衡,精確吸取2.0mL血清樣品過柱(流速1滴/s),依次分別用35%乙腈-水5.0mL、純水10.0mL、35%乙腈-水5.0mL洗滌,吹干,用2.5mL洗脫液洗脫,收集洗脫液,氮氣吹至近干,流動相定容至1.0mL,渦動混合1min,靜置10min,0.2μm的針筒式濾膜過濾,取100μL進樣,HPLC分析。1.8二,三室同時以權重1/c,1/c23種情況計算藥時數(shù)據(jù)利用中國藥理學會數(shù)學專業(yè)委員會編制的3p97藥代動力學程序軟件,采用Marquardt法對一,二,三房室分別以權重1,1/C,1/C23種情況進行計算。根據(jù)殘差平方和(WSS)與AIC值最小、擬合度(R2)最大判斷最適藥代動力學模型。2回收率、精密度、藥代動力學2.1替米考星的色譜峰峰形尖銳且對稱,樣品中雜質分離良好,無明顯干擾峰。線性回歸方程為y=120517x+3407.9,相關系數(shù)r=0.9998。按信噪比S/N=3計算,方法的最低檢測限LOD為0.025μg/mL;按S/N=6計算,定量限LOQ為0.05μg/mL。綿羊血清在0.05、0.5、5μg/mL添加水平,平均回收率范圍在92.3%～101.0%之間;日內(nèi)變異系數(shù)范圍在4.7%～8.0%(n=5);日間變異系數(shù)為3.0%～5.1%之間。2.2綿羊單劑量靜脈和皮下注射替米考星后未見不良反應。靜脈注射5mg/kg替米考星后血藥濃度時間數(shù)據(jù)見表1,從表中可以看出,給藥96h有部分樣品的色譜峰有干擾,血藥濃度已低于檢測限。藥時數(shù)據(jù)經(jīng)藥代動力學程序軟件3p97處理,符合無吸收二室開放模型,其理論方程為C=3.803e-1.136t+0.253e-0.03t,藥代動力學數(shù)據(jù)見表2。2.3皮下注射10、30mg/kg替米考星后血藥濃度時間數(shù)據(jù)見表1,藥時數(shù)據(jù)經(jīng)藥代動力學程序軟件3p97處理,符合有吸收二室開放模型,其理論方程分別為C=0.962e-0.443t+0.724e-0.031t-1.686e-7.341t和C=2.063e-0.531t+1.873e-0.035t-3.936e-8.195t,藥代動力學數(shù)據(jù)見表3。3替米考星在養(yǎng)羊業(yè)單次給藥后的生物利用度和藥物動力學3.1試驗研究表明,替米考星靜脈注射后,藥物在綿羊體內(nèi)的吸收、分布很快,消除較為緩慢,藥時數(shù)據(jù)基本符合二室開放模型。分布半衰期和消除半衰期分別為0.611h和23.215h,比國外報道的分別為0.27h和4.36h要長。但二者比較來看,消除半衰期均遠遠大于分布半衰期。中央室表觀分布容積V(c)值為1.241L/kg,穩(wěn)態(tài)表觀分布容積Vd(ss)值為14.2L/kg,均大于1L/kg,這說明替米考星在綿羊體內(nèi)組織穿透力強,血管外組織分布廣泛。3.2替米考星綿羊皮下注射后的藥時數(shù)據(jù)符合有吸收二室開放模型,與國外有關報道一致。10、30mg/kg劑量組的t1/2α、t1/2β分別為1.751±0.557h、22.896±2.747h和1.342±0.244h、20.052±1.236h,經(jīng)t檢驗2劑量間差異不顯著(P>0.05)。2劑量組分別在0.5±0.065h和0.437±0.039h達到最大血藥濃度(Cmax),二者差異不顯著(P>0.05)。其Cmax分別為1.424±0.156μg/mL和3.343±0.512μg/mL。但Modric等報道的給綿羊和牛皮下注射10mg/kg替米考星,Tmax分別為3.9h和0.5h,與本試驗結果不太一致,可能與制劑、注射部位等有關。2劑量組的曲線下面積(AUC)分別為25.828±1.479(μg/mL)·h和57.575±6.7602(μg/mL)·h,Cmax和AUC基本成正比關系,這表明替米考星在綿羊體內(nèi)的藥物動力學呈一級動力學過程。3.3以10、30mg/kg給綿羊皮下注射后,吸收迅速,消除緩慢,吸收半衰期(t1/2Ka)分別為0.1