歸脾湯對(duì)抑郁模型大鼠血中agh及cor含量的影響

歸脾湯對(duì)抑郁模型大鼠血中agh及cor含量的影響

抑郁是一種常見的心理障礙疾病，主要表現(xiàn)為長期持續(xù)性情緒低下，表現(xiàn)為慢性和復(fù)發(fā)性。臨床上以顯著抑郁、活動(dòng)能力低下、思維和認(rèn)知功能遲緩為主要特征，伴有語言技能、厭食、睡眠障礙和食欲不振，部分人伴有自主神經(jīng)功能障礙。歸脾湯臨床治療抑郁癥療效確切,并具有副作用小的優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過慢性應(yīng)激和隔離孤養(yǎng)復(fù)制抑郁癥大鼠模型,探討歸脾湯治療抑郁癥的作用機(jī)制。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠60只,雌雄各半,體重180～220g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.1.2以制備工藝規(guī)定為濃度標(biāo)準(zhǔn),把原生藥材質(zhì)地膜質(zhì)譜分析,制備成百優(yōu)解歸脾湯由人參、木香、遠(yuǎn)志各6g,白術(shù)、茯神、當(dāng)歸各9g,黃芪、龍眼肉、炒酸棗仁各12g,炙甘草3g組成,購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院。將以上中藥加10倍量的水浸泡1小時(shí),然后煎煮,水沸后用文火煎40分鐘,過濾;第二次加8倍量的水煎煮,水沸后用文火煎40分鐘,過濾,合并濾液,常壓濃縮至濃度分別為40%、80%、160%的藥液(即每毫升藥液含0.4、0.8、1.6克原生藥材煎出物),冷卻后密封,4℃保存?zhèn)溆谩０賰?yōu)解由禮來蘇州制藥有限公司生產(chǎn),20mg/粒。ACTH(促腎上腺皮質(zhì)激素)放射免疫分析試劑盒(北京福瑞生物工程公司,批號(hào):20081101)及CORT(皮質(zhì)醇)放射免疫分析試劑盒(北京福瑞生物工程公司,批號(hào):20081102)。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1組不同給藥劑量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,參考體重和Open-field評(píng)分,將大鼠隨機(jī)分為6組,每組10只。正常組(0.9%生理鹽水10mL·kg-1)、模型組(0.9%生理鹽水10mL·kg-1)、百優(yōu)解組(1.8mg·kg-1)、歸脾湯低劑量組(3.78g·kg-1)、歸脾湯中劑量組(7.56g·kg-1)、歸脾湯高劑量組(15.12g·kg-1)。各組每日灌胃1次,從第22天開始,連續(xù)21天。1.2.2文獻(xiàn)方法每籠正常對(duì)照組每籠飼養(yǎng)5只,在實(shí)驗(yàn)中不接受任何刺激。按參考文獻(xiàn)方法,其余各組每籠1只。在實(shí)驗(yàn)的21天內(nèi),接受7種(電擊足底、冰水游泳、傾斜鼠籠、潮濕飼養(yǎng)、晝夜顛倒、禁水、禁食)不同的刺激,每天一種,同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)。1.2.3體重測(cè)量每周稱量1次體重。1.2.4檢測(cè)箱及活動(dòng)評(píng)分在實(shí)驗(yàn)開始的第0天、第21天和第42天,于大鼠測(cè)量完體重后用Open-field法(敞箱實(shí)驗(yàn))進(jìn)行檢測(cè)。其檢測(cè)箱為一個(gè)長、寬各1m、高0.5m的木箱,底部有25個(gè)20cm×20cm的小方格。水平活動(dòng)得分以大鼠四肢共同處于一個(gè)方格內(nèi)為標(biāo)準(zhǔn),計(jì)1分,垂直活動(dòng)得分以前肢抬起、后肢直立為標(biāo)準(zhǔn),計(jì)1分。檢測(cè)時(shí)將大鼠放置在箱子中心,統(tǒng)計(jì)3min內(nèi)大鼠水平運(yùn)動(dòng)得分和垂直運(yùn)動(dòng)得分。1.2.5acth和cort含量測(cè)定在實(shí)驗(yàn)第42d,從大鼠股動(dòng)脈取血2mL,置于含10%EDTA·Na230uL、抑肽酶20uL的試管中,4℃、3000rpm離心10min,分離血漿,放置-20℃冰箱保存,采用放射免疫分析法(RIA)測(cè)定ACTH和CORT含量。1.2.6統(tǒng)計(jì)處理計(jì)量資料用xˉ±sxˉ±s表示。用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,組間比較用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1各組大鼠體重比較造模前,各組大鼠體重?zé)o差別(P>0.05)。造模21天后,各造模組與正常組相比,大鼠體重增長緩慢(P<0.05)。給藥21天后,歸脾湯高、中、低劑量組、百優(yōu)解組與模型組相比,大鼠體重增長加快(P<0.01);歸脾湯高劑量組與百優(yōu)解組相比,大鼠體重增長顯著(P<0.05)。結(jié)果見表1。2.2給藥后大鼠運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,造模21天后,各造模組大鼠水平和垂直運(yùn)動(dòng)行為得分均低于空白組(P<0.01)。給藥21天后,歸脾湯高、中、低劑量組、百優(yōu)解組大鼠水平和垂直運(yùn)動(dòng)得分均高于模型組(P<0.01)。結(jié)果見表2、3。2.3各組大鼠acth、cort水平比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠血漿中ACTH、CORT水平高于正常組(P<0.01)。給藥各組大鼠ACTH水平低于模型組(P<0.01);CORT水平亦低于模型組,其中歸脾湯高、中劑量組與模型組相比差異極顯著,歸脾湯低劑量組、百優(yōu)解組與模型組相比差異顯著。結(jié)果見表4。3基于歸脾湯治療抑郁癥的研究目前有關(guān)抑郁癥的動(dòng)物模型較多,主要包括藥理學(xué)模型、腦損傷模型、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型、孤養(yǎng)和分養(yǎng)動(dòng)物模型、應(yīng)激模型等。應(yīng)激模型是通過改變周圍環(huán)境誘發(fā)動(dòng)物行為異常建立的抑郁動(dòng)物模型,力圖模擬抑郁病人環(huán)境誘因,進(jìn)行抑郁癥發(fā)病機(jī)理及抗抑郁藥藥效評(píng)價(jià)的研究,目前已成為一類有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。其中包括?xí)得性無助抑郁模型、行為絕望抑郁模型、慢性不可預(yù)見性的應(yīng)激抑郁模型和慢性輕度不可預(yù)見性的應(yīng)激抑郁模型四種。慢性輕度不可預(yù)見性的應(yīng)激抑郁模型是將幾種不同的應(yīng)激因子(如晝夜顛倒、禁食、禁水、電擊、強(qiáng)迫游泳等)在實(shí)驗(yàn)全程中應(yīng)用,順序隨機(jī),使動(dòng)物不能預(yù)料刺激的發(fā)生,是目前國內(nèi)外文獻(xiàn)中廣泛使用的模型。本實(shí)驗(yàn)采用了此種造模方法,具有一定的科學(xué)性與可靠性。中醫(yī)典籍中沒有抑郁癥這一病名的明確記載,根據(jù)抑郁癥臨床癥狀判斷,與中醫(yī)情志疾病“郁證”相似。本病初期多由于情志失調(diào),肝郁氣滯所致。肝氣郁滯,橫逆乘脾,脾為后天之本,氣血生化之源,脾虛則氣血生化不足,日久導(dǎo)致心失所養(yǎng),神不守舍,形成心脾兩虛。歸脾湯具益氣補(bǔ)血,健脾養(yǎng)心之功,是治療抑郁癥的常用方劑。抑郁癥患者臨床上多有厭食、消瘦表現(xiàn),故本實(shí)驗(yàn)選擇大鼠體重變化作為觀察指標(biāo)。通過前述數(shù)據(jù)可以看出,模型組大鼠體重增長緩慢,這與抑郁癥患者厭食、消瘦的表現(xiàn)相似。慢性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠體重增長緩慢,可能是HPA(下丘腦-垂體-腎上腺軸)被激活,下丘腦分泌的CRH(促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素)引起的食欲減退以及在應(yīng)激條件下,能量消耗增加,兩種因素雙重作用的結(jié)果。CRH不但可以刺激垂體釋放ACTH,而且是調(diào)節(jié)能量平衡和體重的重要因子。在行為學(xué)檢測(cè)中,水平運(yùn)動(dòng)得分反映大鼠的活動(dòng)度,垂直運(yùn)動(dòng)得分反映大鼠對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠行為學(xué)得分與正常組相比顯著下降,反映了大鼠的活動(dòng)度及對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度降低。由于大鼠的趨暗習(xí)性,其活動(dòng)區(qū)域有一定的規(guī)律性,即中心強(qiáng)光區(qū)域經(jīng)過較少,四周較暗區(qū)域活動(dòng)較多。因此觀察大鼠的活動(dòng)區(qū)域可以考察大鼠對(duì)周圍環(huán)境的關(guān)注和反應(yīng)程度。本實(shí)驗(yàn)觀察到正常組大鼠進(jìn)入檢測(cè)箱后,均迅速離開中心強(qiáng)光區(qū)域,到達(dá)一側(cè)較暗區(qū)域后,先在原地觀察一段時(shí)間,再沿檢測(cè)箱四周的暗光區(qū)域進(jìn)行搜索,在3min的檢測(cè)時(shí)間內(nèi)多數(shù)大鼠一直處于運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。與此相對(duì)照,模型組大鼠進(jìn)入檢測(cè)箱后,多停留在中心強(qiáng)光區(qū)域,待觀察一段時(shí)間后才緩慢爬向周圍暗光區(qū)域,在檢測(cè)箱內(nèi)搜索時(shí)經(jīng)常通過中心強(qiáng)光區(qū)域,多數(shù)大鼠靜止于一個(gè)角落直到檢測(cè)結(jié)束。這說明模型組大鼠對(duì)周圍環(huán)境的反應(yīng)較正常組遲鈍。實(shí)驗(yàn)第42天,歸脾湯高、中、低劑量組及百優(yōu)解組與模型組比較,水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)得分均增加,表明歸脾湯能夠改善模型大鼠的行為學(xué)狀態(tài)。HPA軸能夠調(diào)節(jié)食欲、睡眠及對(duì)應(yīng)激的適應(yīng),與抑郁癥關(guān)系密切。應(yīng)激是機(jī)體在受到各種強(qiáng)烈因素刺激時(shí)所出現(xiàn)的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng),以及由此而引起的各種機(jī)能和代謝的改變。當(dāng)機(jī)體受到強(qiáng)烈刺激時(shí),就會(huì)出現(xiàn)以交感神經(jīng)興奮、兒茶酚胺分泌增多和HPA軸相應(yīng)激素分泌增多為主的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng),以適應(yīng)強(qiáng)烈刺激,提高機(jī)體的抗病能力。實(shí)驗(yàn)通過對(duì)大鼠HPA軸激素水平變化的觀察,發(fā)現(xiàn)模型組大鼠與正常組比較,血中ACTH、CORT含量增高,證實(shí)了HPA軸對(duì)抗應(yīng)激反應(yīng)的功能,即增強(qiáng)機(jī)體對(duì)外來刺激的耐受。歸脾湯高、中、低