免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)動物養(yǎng)殖中的應(yīng)用

免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)動物養(yǎng)殖中的應(yīng)用

水生養(yǎng)殖作為一個重要的產(chǎn)業(yè)，受到世界各國的高度重視。隨著科技的發(fā)展,高密度集約化養(yǎng)殖的程度越來越高。它一方面提高了水產(chǎn)品的產(chǎn)量,促進(jìn)了養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展;另一方面也帶來了一個不容忽視的問題,即養(yǎng)殖環(huán)境的惡化,導(dǎo)致魚體對疾病的易感性增加,疾病滋生,嚴(yán)重困擾著養(yǎng)殖業(yè)的步伐。在過去的20年里,人們采用各種抗生素來治療魚類的感染性疾病取得了一定的效果。然而,抗生素產(chǎn)生的負(fù)面影響(如耐藥性、藥物殘留等)又使得這一方法不盡人意。進(jìn)入70年代以來,各種免疫制劑的研制使廣大學(xué)者看到了控制感染性疾病的曙光,如鰻弧菌疫苗、草魚出血病疫苗、甲魚細(xì)菌病疫苗等(楊先樂1989)。疫苗具有針對性強(qiáng)、效果顯著等特點(diǎn),并有效解決了耐藥性及藥物殘留等問題。近年來隨著研究的深入,一類新型的綠色魚藥——免疫增強(qiáng)劑逐漸提上日程并展開了大量工作。免疫增強(qiáng)劑,主要是作用于非特異性免疫因子來達(dá)到防病、抗病目的。雖然其不在魚體內(nèi)產(chǎn)生免疫記憶,但能夠在短時期內(nèi)顯著提高機(jī)體的抗病能力。因此,日益受到國際養(yǎng)殖業(yè)的重視,成為水產(chǎn)保護(hù)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。免疫增強(qiáng)劑具有種類多、應(yīng)用廣、使用方便等特點(diǎn),其日漸受到人們的青睞。各國學(xué)者的研究表明,免疫增強(qiáng)劑在疾病控制方面具有十分重要的意義,并顯示出了良好的發(fā)展前景。本文就目前免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用現(xiàn)狀、存在的問題和發(fā)展趨勢作一綜述,旨在為相關(guān)科研和生產(chǎn)提供有益的參考。1免疫增強(qiáng)劑對克氏原螯蝦免疫反應(yīng)的機(jī)理魚類的免疫系統(tǒng)為較低等的特異性免疫系統(tǒng),分細(xì)胞免疫和體液免疫。魚類的細(xì)胞免疫中有吞噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NKB)以及T、B淋巴細(xì)胞等;在體液免疫中有溶菌酶、溶血素、免疫球蛋白及各種補(bǔ)體等(錢云霞等2000;張永安等2000;聶品1997;李亞南等1995)。與魚類相比,甲殼類則為非特異性免疫系統(tǒng)。免疫增強(qiáng)劑作用于這兩種免疫系統(tǒng)的機(jī)理是多方面的,據(jù)已報道的文獻(xiàn),其機(jī)理大致體現(xiàn)為:在甲殼動物中,免疫增強(qiáng)劑可活化血淋巴中的吞噬細(xì)胞,提高其吞噬病原的能力;刺激血淋巴中抗菌、溶菌活力的產(chǎn)生;激活酚氧化酶原系統(tǒng),產(chǎn)生識別信號及介導(dǎo)吞噬等。在魚類中,免疫增強(qiáng)劑可激活嗜中性粒細(xì)胞和白細(xì)胞的吞噬作用;刺激淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生或分泌淋巴因子,協(xié)調(diào)細(xì)胞免疫和體液免疫;誘發(fā)抗體的產(chǎn)生及補(bǔ)體的生成等(Ortunoetal.2000;Sahooetal.2001;Jangetal.1995;王軍等2001;秦啟偉等2000)。2防水藥物在水產(chǎn)中的研究目前,應(yīng)用于水產(chǎn)動物的免疫增強(qiáng)劑主要有:化學(xué)藥劑、微生物類衍生物、動植物提取物、維生素類及激素、細(xì)胞類因子等。2.1合成磺酸2.1.1降血糖藥的應(yīng)用左旋咪唑,是一種有效的人、畜驅(qū)蟲藥。在水產(chǎn)動物體內(nèi)它主要通過提高吞噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的活性、提高白細(xì)胞的代謝能力以及血清中溶菌酶活力等來增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。Siwicki(1987)報道,鯉魚肌注左旋咪唑后,能增加其巨嗜細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的數(shù)量,并顯著提高血清溶菌酶的水平。Siwicki等(1989)研究了左旋咪唑腹注鯉魚,左旋咪唑能大幅度提高機(jī)體內(nèi)自然殺傷細(xì)胞的能力,對防治鯉魚病毒病效果顯著。Kajita等(1990)也證實了肌注左旋咪唑,能有效增強(qiáng)虹鱒體內(nèi)白細(xì)胞吞噬活力等非特異性免疫功能,達(dá)到防治弧菌病的目的。Baba等(1993)采用左旋咪唑浸泡鯉魚(10μg/ml,24h),實驗組與對照組相比,實驗組感染痘瘡病的幾率由原來的35%下降到28%,降低了7個百分點(diǎn),顯示出了較強(qiáng)的抗病毒能力。另外,Kajita等(1990)還將左旋咪唑作為佐劑肌注虹鱒(0.1～0.5mg/kg),能大幅度提高巨嗜細(xì)胞的吞噬活性,并有效增強(qiáng)抗體在體內(nèi)的免疫原性。2.1.2fac注射FAC(Freund’scompleteadiuvant),是一種能增強(qiáng)抗體在體內(nèi)免疫效果的物質(zhì)。Kajita等(1992)證實用FAC注射鱒魚能大幅度提高其吞噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的活性,并增加紅細(xì)胞的載氧能力,對抵制不良環(huán)境作用顯著。然而,Kawakami等(1998)則報道,FAC腹注黃尾并不能增強(qiáng)其對氣單胞菌病原的抵抗力,并認(rèn)為,FAC的免疫增強(qiáng)效果可能受機(jī)體、病原體或其他多重因素的影響,其原因有待進(jìn)一步研究。2.2微生物類2.2.1小鼠桿菌病毒MDP(N-acetyl-muramyl-L-analyl-D-isoglutamine)即胞壁酰二肽,系從分支桿菌屬提取獲得。在哺乳動物(小鼠)體內(nèi),它通過活化巨嗜細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和促進(jìn)補(bǔ)體生成等來達(dá)到免疫增強(qiáng)作用(趙紅霞2002)。Kodama等(1993)報道,MDP肌注虹鱒能有效增強(qiáng)巨嗜細(xì)胞的活性,提高頭腎細(xì)胞的呼吸熵和游走能力,有效抵制弧菌病原的侵?jǐn)_。另外,Kodama等(1993)也證實了注射MDP的機(jī)體,能有效促進(jìn)腎臟細(xì)胞的分裂增生。2.2.2光蝦體內(nèi)lps的抗菌活性和溶菌活力LPS(lipopolysaccharide)是1種革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁產(chǎn)物,它能有效促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的再生。Solem等(1995)報道,LPS能活化吞噬細(xì)胞,提高大西洋鮭巨嗜細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平,降低疾病的感染。Neumann(1995)將LPS應(yīng)用于鯽魚,也獲得了類似的結(jié)果。Srtunyalucksana等(1998)研究證實了斑節(jié)對蝦口服LPS能顯著提高其血淋巴的抗菌活力、酚氧化酶活力和凝集效價。江曉露(1999)報道了中國對蝦經(jīng)體腔注射LPS48h后,中國對蝦血淋巴細(xì)胞的吞噬率提高11.4%,吞噬指數(shù)提高39.7%;血清中抗菌活力和溶菌活力也比對照組有明顯提高,且維持到96h仍有較高水平。另外,其血清凝集紅細(xì)胞的活性也有所增加,證明LPS對中國對蝦的非特異性免疫系統(tǒng)有較顯著的增強(qiáng)作用。2.2.3英美法上的2-羥基丙酰四肽FK-565(Heptanoyl-y-D-glutamyl-L-meso-diaminopimelyl-D-alanine),為2-羥基丙酰四肽的一種衍生物,系從橄欖灰鏈球菌菌株中分離獲得。它能有效增強(qiáng)機(jī)體對微生物病原的抗感染率。Kitao等(1986)研究報道,FK-565能大幅度提高虹鱒吞噬細(xì)胞的活性,激活機(jī)體非特異性免疫系統(tǒng),增強(qiáng)對沙門氏菌的抗感染力。此外,Kitao(1987)也證實了在使用抗體進(jìn)行免疫時,加入適量的FK-565能起到較好的協(xié)同作用,增強(qiáng)抗體的免疫原性,提高免疫效果。2.2.4鏈球菌病原致病性弧菌疫苗,是海水養(yǎng)殖中最有效的疫苗之一。它免疫性廣,且服用方便,口服、肌注、浸泡都能起到良好的免疫效果。Sakai等(1995c)報道用此類疫苗免疫虹鱒,能有效抵制鏈球菌病原的侵襲。Itami等(1989)通過用福爾馬林滅活的弧菌疫苗浸泡日本對蝦,能有效降低已感染弧菌病對蝦的死亡率。Horne等(1995)研究了弧菌疫苗在斑節(jié)對蝦中的抗病作用,結(jié)果顯示,實驗組與對照組相比,其血淋巴活性與游走速度大大加快,對防治斑節(jié)對蝦暴發(fā)性疾病作用明顯。不過,有關(guān)弧菌疫苗在魚類、甲殼動物非特異性免疫中的免疫增強(qiáng)機(jī)制仍不甚明了。此外,弧菌疫苗中能增強(qiáng)對蝦非特異性免疫的確切成分也有待進(jìn)一步研究(Horneetal.1995)。2.2.5免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用葡聚糖的免疫增強(qiáng)效果,在水產(chǎn)動物中進(jìn)行了較為廣泛而深入地研究。其中尤以酵母葡聚糖、β-1,3葡聚糖的研究居多。大西洋鮭腹腔注射酵母葡聚糖,能顯著增強(qiáng)其對殺鮭弧菌的抵抗力(Robertsenetal.1990)。Chen等(1992)報道肌注酵母葡聚糖能增強(qiáng)溝鯰(Ictauruspunctatus)對皰疹病毒的抵抗力。Raa等(1992)研究了口服酵母葡聚糖,能有效降低鏈弧菌病對大西洋鮭的感染率。在甲殼類的應(yīng)用中,酵母葡聚糖浸泡斑節(jié)對蝦(0.5～1.0mg/ml),能增加顆粒細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù),并使得體內(nèi)的酚氧化酶水平有較大程度的提高,對抵抗白斑綜合征病毒(WSSV)的感染作用明顯(Sungetal.1994)。在β-1,3葡聚糖作為免疫增強(qiáng)劑的研究中,Anisworth等(1994)報道了溝鯰口服β-1,3葡聚糖后,體內(nèi)溶菌酶活力和血細(xì)胞中超氧化物歧化酶活性大大提高,并起到了良好的介導(dǎo)吞噬及抗細(xì)菌性病原的作用。Sahoo等(2001)選用彩鯉為研究對象,口服(0.1%)或肌注(1.25mg/kg)β-1,3葡聚糖均能顯著提高其自然殺傷細(xì)胞的吞噬活性,對抵抗愛德華氏菌病原作用顯著。陽會軍等(2001)證實了在斑節(jié)對蝦飼料中添加不同濃度的β-1,3葡聚糖,能不同程度地提高其增重率、存活率及抗WSSV的能力,并降低了餌料系數(shù)。2.2.6對血淋巴和蝦池的人工感染肽聚糖作為免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)上的應(yīng)用也很廣泛。肽聚糖能激活黃尾白細(xì)胞的吞噬活力而起到抵抗嗜產(chǎn)氣腸球菌病的作用(Itamietal.1996)。Boon等(1995)報道了肽聚糖在斑節(jié)對蝦黃頭桿狀病毒病中的作用,也取得了較為滿意的結(jié)果。Toshiaki等(1998)報道日本對蝦口服肽聚糖,實驗組比對照組有更高的酶活性和吞噬活力。當(dāng)用弧菌病原進(jìn)行人工感染時,實驗組的存活率比對照組高出22個百分點(diǎn)。孟凡倫等(1999)研究了SB900肽聚糖對中國對蝦免疫功能的影響,結(jié)果表明,SB900肽聚糖對血淋巴中的溶菌酶、過氧化酶、超氧化物歧化酶均有不同程度的誘導(dǎo)作用。并在體外證明了SB900對酚氧化酶原系統(tǒng)有一定的激活作用。此外,王秀華等(2003)最新實驗結(jié)果表明,凡納對蝦通過攝食添加肽聚糖的餌料可顯著提高血淋巴中的酚氧化酶、酸堿性磷酸酶,同時可顯著提高凝集素凝集效價,這些因子均對對蝦非特異性免疫有積極的調(diào)節(jié)作用。王秀華等(2003)在不同的養(yǎng)殖場,用6hm2中國對蝦養(yǎng)殖池進(jìn)行A3α肽聚糖(由黃海水產(chǎn)研究所病害室生產(chǎn))抗病應(yīng)用中試,試驗池養(yǎng)殖超過100d,投喂A3α-PG的蝦池發(fā)病率在0～40%之間,而對照蝦池(未添加A3α-PG)的蝦池發(fā)病率在80%～100%之間。關(guān)于肽聚糖在蟹類的應(yīng)用,崔青曼等(2001)證實了肽聚糖能增強(qiáng)河蟹吞噬細(xì)胞的活性和抗菌活力,使抗病能力得以有效提高。2.3動植物提取物2.3.1幾丁質(zhì)注射黃尾的抗病力幾丁質(zhì)是從甲殼動物或昆蟲外殼中提取的一種活性多糖類物質(zhì)。Sakai等(1992)報道了注射幾丁質(zhì)的虹鱒其吞噬細(xì)胞活性大大提高,并顯著增強(qiáng)對鰻吸蟲病的抵抗力。Kawakami等(1998)也報道了幾丁質(zhì)注射黃尾的抗病力研究,結(jié)果表明,幾丁質(zhì)能有效提高黃尾對病原Pasteurella.piscicida的抵抗力,且有效期在45d以上。脫乙酰幾丁質(zhì)也是一種重要的免疫增強(qiáng)劑,同樣具有顯著的免疫增強(qiáng)效果。鱒魚通過脫乙酰幾丁質(zhì)注射或浸泡,均能有效降低病毒性出血病對機(jī)體的感染率(Andersonetal.1995)。同年,Anderson(1995)進(jìn)一步研究了脫乙酰幾丁質(zhì)的免疫增強(qiáng)機(jī)理,其主要是活化了血液中自然殺傷細(xì)胞的能力,增加了NBT陽性細(xì)胞數(shù),激活了體內(nèi)髓過氧化物酶活性,并提高了免疫球蛋白的濃度。2.3.2使用阿斯匹林或阿波/阿蘇氏原螯蝦疫苗EF-203是雞胚胎細(xì)胞的發(fā)酵產(chǎn)物?？诜﨓F203能增強(qiáng)鱒魚體內(nèi)白細(xì)胞的吞噬活性,并能有效控制鏈球菌病原的感染(Yoshidaetal.1993)。Sakai等(1995f)報道了在鮭弧菌疫苗中加入適量的EF-203,與沒有加入EF-203的疫苗相比,前者能更好的活化頭腎細(xì)胞的吞噬活性,使NBT陽性細(xì)胞數(shù)大大增加,體現(xiàn)了EF-203良好的免疫增強(qiáng)作用和協(xié)同作用。同時,Sakai等(1995f)也觀察到,在感染了痘瘡病的鱒魚中,服用加入了EF203疫苗的機(jī)體,其血清凝集抗體滴度在對照組與實驗組中沒有顯著差異,且實驗組中的存活率并沒有得到明顯提高。出現(xiàn)這一結(jié)果的原因可能是鱒魚免疫并不僅取決于吞噬活性和抗體的免疫應(yīng)答,而是有其他影響因素的存在。2.3.3增加免疫增強(qiáng)劑另一些動植物的提取液,如海水被囊類動物(Ecteinascidaturbinate)中提取的Ete物質(zhì)(一種糖蛋白)、鮑魚(Haliotasdiscushannai)體內(nèi)提取的Hde活性物質(zhì)、以及植物中所提取的甘草甜素,都是有效的免疫增強(qiáng)劑。鰻鱺肌注Ete后,不僅能提高其吞噬細(xì)胞的吞噬作用而且能提高其存活率(Davisetal.1994)。Sakai等(1992)研究了注射Hde對虹鱒機(jī)體的影響,結(jié)果表明,Hde能有效增強(qiáng)吞噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的吞噬活力,提高對感染弧菌病后的存活率。植物中提取的免疫刺激物-甘草甜素,是一種糖基-皂莢苷,在醫(yī)學(xué)上用于抗炎癥和抗腫瘤作用。Jang等(1995)報道了甘草甜素能增強(qiáng)虹鱒體內(nèi)質(zhì)體的呼吸率和淋巴細(xì)胞的增殖應(yīng)答,對抵抗細(xì)菌性病原具有重要意義。David等(2001)報道了另一種植物提取液Ergosan注射Stripedsnakehead(Channastriate)時,能顯著增強(qiáng)其免疫保護(hù)力。對危害嚴(yán)重的流行性潰爛綜合征,實驗組的存活率比對照組高55.2%。2.4vc對青石斑魚細(xì)胞免疫的影響大量實驗證明,部分維生素對魚類具有抗病及促生長作用。Liu等(1989)報道了在飼料中適量添加VC能刺激斑點(diǎn)叉尾體內(nèi)補(bǔ)體的生成,有效增強(qiáng)斑點(diǎn)叉尾對愛德華氏菌病原的抵抗力。Thompson等(1993)和Roberts(1995)分別研究了鮭和大菱鲆服用VC的免疫增強(qiáng)效果,結(jié)果顯示,VC能不同程度地激發(fā)吞噬細(xì)胞活力和淋巴細(xì)胞的活性。Orjuno(2000)報道了真鯛口服一定量的Vc(1200mg/kg)能明顯提高其頭腎細(xì)胞的吞噬能力和呼吸熵。李愛杰(1998)研究表明,在飼料中適量添加VC能有效增加中國對蝦的生長,并顯著提高其自身的免疫保護(hù)率。秦啟偉(2000)研究了VC對青石斑魚的非特異性免疫調(diào)節(jié)作用,VC能提高血液中白細(xì)胞的數(shù)量和吞噬活性,并能促進(jìn)機(jī)體的生長,對青石斑魚的非特異性免疫系統(tǒng)有明顯的調(diào)節(jié)作用。王軍(2001)用含Vc的營養(yǎng)添加物投喂大黃魚也獲得了類似的結(jié)果。VE也是一種能增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫的物質(zhì)。Aardie等(1990)分別用虹鱒和大西洋鮭作了服用VE和不服用VE的對比實驗,結(jié)果表明,服用VE的個體,其體內(nèi)吞噬細(xì)胞活性顯著高于對照組。Wise等(1993)也證實了溝鯰口服高劑量的VE時,能增強(qiáng)介導(dǎo)吞噬作用并促進(jìn)白細(xì)胞中過氧化物陰離子的產(chǎn)生。在B族維生素中,王安利(1994)研究報道了VB12對中國對蝦的抗病能力有積極作用。2.5激素、細(xì)胞因素和乳鐵蛋白2.5.1細(xì)胞活力的研究激素類物質(zhì)在脊椎動物內(nèi)分泌調(diào)控和免疫調(diào)節(jié)中具有重要意義。生長激素GH(Growthhormone)和催乳素PRL(Prolactin)因直接參與和影響免疫細(xì)胞(吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞)的活力,所以研究較多。Sakai等(1996c)證實了外源生長激素注射虹鱒,能有效促進(jìn)其體內(nèi)淋巴細(xì)胞分裂和自然殺傷細(xì)胞活力的產(chǎn)生,對吞噬過程中活性氧的產(chǎn)生也有一定的激活作用。而且,注射外源生長激素的魚體,不僅能提高其血清中溶血素的含量,還能有效控制溶藻膠弧菌病的發(fā)生。催乳素PRL也是一種有效的免疫增強(qiáng)劑,Sakai等(1996b)報道了大麻哈魚口服PRL,能有效誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的促細(xì)胞分裂反應(yīng),并能促進(jìn)白細(xì)胞中超氧化物陰離子的產(chǎn)生。同年,Sakai等(1996a)用虹鱒代替大麻哈魚作為實驗材料也獲得了相似的結(jié)果。2.5.2蛋白類和微生物指標(biāo)細(xì)胞類因子(Cytokines)是多肽或糖蛋白類物質(zhì),在免疫系統(tǒng)中主要起調(diào)節(jié)作用。Tamai等(1993)報道的1種類白細(xì)胞介素——2樣蛋白,證實了該樣蛋白能有效控制彈狀病毒對機(jī)體的影響。邵健忠等(2001)對草魚干擾素(Grasscarpinterfereon,GcIFN)的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行了研究,GcIFN對草魚巨噬細(xì)胞(Mφ)具有顯著的激活作用,對提高M(jìn)φ內(nèi)、H2O2和酸性磷酸酶(ACP)的活性與含量,促進(jìn)Mφ的吞噬和殺菌能力作用明顯。孫志良等(1999)將人-α干擾素作用于中國對蝦,實驗組感染W(wǎng)SSV的幾率較對照組大幅降低,證實了人-α干擾素良好的免疫保護(hù)作用。2.5.3增強(qiáng)噬菌作用乳鐵蛋白(Lactoferrin)是1種由單肽鏈組成的物質(zhì),分子量大約為87000,廣泛存在于哺乳動物的體液中。在哺乳動物的體液免疫中,乳鐵蛋白常被視為能增強(qiáng)吞噬作用和抗菌活力的重要因子之一。Sakai等(1993)將乳鐵蛋白作為免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于虹鱒上,通過口服一定劑量的乳鐵蛋白,能刺激吞噬細(xì)胞活力和白細(xì)胞中超氧化物陰離子的產(chǎn)生,而且還顯示出對溶藻膠弧菌病原較高的耐受性和抵抗力。Kukuta等(1996)也報道了虹鱒口服乳鐵蛋白的實驗,研究證實了乳鐵蛋白能增加血液中粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的數(shù)量,并能促進(jìn)機(jī)體黏液的分泌,增強(qiáng)對Cryptocaryonirritans病原的抵抗力。3免疫增強(qiáng)劑的作用范圍使用免疫增強(qiáng)劑能不同程度提高存活率或延長存活時間。其對各類疾病或病原的免疫作用有報道的研究工作見表1。4影響免疫增強(qiáng)劑使用的因素影響免疫增強(qiáng)劑作用的因素主要有給藥時間、給藥劑量、給予途徑及服用期等。4.1使用肽葡聚糖的增強(qiáng)劑用藥時間對免疫增強(qiáng)劑的作用效果有重要影響。一般來說,在預(yù)防期或疾病萌發(fā)期使用最為有效。Anserson(1992)證實,免疫增強(qiáng)劑應(yīng)在疾病大規(guī)模暴發(fā)之前使用,以有效控制其蔓延。Boon等(1995)報道,斑節(jié)對蝦在氣溫較低的秋冬季投喂肽聚糖時,因環(huán)境脅迫因子的存在,其體內(nèi)免疫因子活性增強(qiáng)不顯著,在春季水溫回升后服用肽葡聚糖,這一現(xiàn)象得到有效改善,并顯示出對溶氧、鹽度及環(huán)境更高的耐受性。此外,有學(xué)者研究了Ete在防治鰻鱺疾病時,感染前兩天投喂,白天的效果要顯著好于夜間(Davis1994)。4.2浸泡法中的作用因素在給予途徑方面,眾多學(xué)者報道了注射和口服免疫增強(qiáng)劑時,能有效增強(qiáng)白細(xì)胞活力等非特應(yīng)性免疫因子,保護(hù)機(jī)體免受病原的侵襲(王軍等2001;Raaetal.1992;Yoshidaetal.1993;Kukutaetal.1996)。給藥方式上,影響免疫增強(qiáng)劑作用的因素,主要體現(xiàn)在浸泡法中的單一免疫和聯(lián)合免疫上。Baba等(1993)報道用左旋咪唑溶液(10μg/ml)浸泡鯉魚24h后,能有效增強(qiáng)吞噬細(xì)胞活性并促進(jìn)頭腎淋巴細(xì)胞中活性氧的產(chǎn)生,對痘瘡病的免疫保護(hù)力可持續(xù)14d以上。Anderson等(1995)也證實了幾丁質(zhì)浸泡虹鱒時,對幼魚出血性病的免疫保護(hù)力在5～10d之間,對幼魚度過多發(fā)病期有重要意義。另外,Jeney(1993b)將重組的O型抗原與多肽類增強(qiáng)劑共同藥浴虹鱒1h,結(jié)果表明,比單一用疫苗時,聯(lián)和浸浴,其吞噬細(xì)胞活性更高,抗體免疫源性更強(qiáng),顯示出良好的協(xié)同作用。然而,Nikl等(1993)將β-1,3葡聚糖作為佐劑與殺鮭弧菌疫苗共同免疫大麻哈魚,在葡聚糖中浸泡了15min的實驗組與沒有浸泡過的對照組相比,未顯示出聯(lián)合用藥的積極作用。因此,在聯(lián)合浸浴免疫的過程中,有關(guān)免疫增強(qiáng)劑的種類、使用方法和劑量還需做更進(jìn)一步的研究。4.3用量對免疫增強(qiáng)的影響免疫增強(qiáng)劑的增強(qiáng)效果及對機(jī)體的免疫保護(hù)作用已得到廣大學(xué)者的認(rèn)可。然而,給藥劑量與效果之間是否存在某種關(guān)系,一直是許多學(xué)者研究設(shè)想的主題。Kajita等(1990)研究顯示,在鱒魚體內(nèi)注射左旋咪唑,當(dāng)劑量在(0.1～0.5)mg/kg時,體內(nèi)巨嗜細(xì)胞的活性隨著注射劑量的上升而上升。同時,他們也觀察到當(dāng)劑量上升到5mg/kg時,沒有顯示出免疫增強(qiáng)效果。Robertsen等(1990)也報道了葡聚糖浸泡鰈時,其體內(nèi)吞噬細(xì)胞最大活性值出現(xiàn)在濃度為(0.1～1.0)μg/ml之間,當(dāng)濃度上升到10μg/ml,未顯示出免疫增強(qiáng)現(xiàn)象,而當(dāng)上升到50μg/ml時,則表現(xiàn)出抑制作用。