丙泊酚對條件恐懼大鼠的抗創(chuàng)傷后應(yīng)激礙作用及其相關(guān)機制研究

丙泊酚對條件恐懼大鼠的抗創(chuàng)傷后應(yīng)激礙作用及其相關(guān)機制研究創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Post-traumaticStressDisorder,PTSD)是一種經(jīng)歷異乎尋常的威脅性事件或情境引起的延遲或持久的應(yīng)激性焦慮精神障礙。PTSD的神經(jīng)生物學(xué)發(fā)生機制錯綜復(fù)雜,近年來研究發(fā)現(xiàn)NO相關(guān)通路與炎癥因子、創(chuàng)傷性恐懼記憶的形成和神經(jīng)元再生障礙關(guān)系密切,在PTSD的發(fā)生中可能發(fā)揮重要作用。丙泊酚(Propofol)作為臨床最普遍的靜脈麻醉藥,其作用機制廣泛而復(fù)雜,尚有許多非麻醉作用,如抗焦慮、腦保護、抑制脂質(zhì)過氧化和抗炎調(diào)節(jié)免疫等多種效應(yīng)。前期研究發(fā)現(xiàn)丙泊酚在大鼠時間依賴性敏化行為(Time-dependentSensitization,TDS)模型和小鼠單程短暫電擊模型(Pre-Shock)模型具有抗PTSD作用。本研究旨在探究丙泊酚在經(jīng)典的條件恐懼這個模型上是否存在抗PTSD效應(yīng),并且進一步探討丙泊酚的抗炎和腦保護作用與炎前因子-iNOS-NO通路、NO-神經(jīng)突觸可塑性通路等PTSD相關(guān)機制的潛在關(guān)系。本研究擬采用大鼠條件恐懼模型,采用聲音線索配對足底電擊造成大鼠條件性恐懼應(yīng)激,通過測試大鼠僵住時間評價丙泊酚抗PTSD效應(yīng);行為學(xué)測試完成后利用Griess法檢測杏仁核和海馬內(nèi)一氧化氮(NO)含量、Western蛋白印跡法檢測神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)與損傷型一氧化氮合酶(iNOS)表達水平、Elisa試劑盒檢測杏仁核和海馬內(nèi)炎癥因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平、高爾基染色試劑盒評價海馬神經(jīng)元可塑性變化,在細胞水平檢驗丙泊酚對膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)NOS的影響及與GABAA受體潛在聯(lián)系。本研究結(jié)果如下:(1)行為學(xué)結(jié)果顯示,與正常對照組相比,消退對照組和消退訓(xùn)練組僵住時間均顯著增高(P﹤0.001),與消退對照組相比消退訓(xùn)練組僵住不動時間無統(tǒng)計學(xué)差異,提示大鼠條件恐懼造模成功。大鼠恐懼消退訓(xùn)練后第1、4和7d,與消退訓(xùn)練組相比,舍曲林組僵住不動時間顯著降低(P﹤0.01);而在恐懼消退訓(xùn)練后第4和7d,丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)組僵住不動時間顯著低于消退訓(xùn)練組(P﹤0.01)。(2)Griess法檢測NO水平結(jié)果顯示,與正常對照組相比,消退對照組和消退訓(xùn)練組大鼠杏仁核和海馬NO水平均顯著增高(P﹤0.001),與消退對照組相比消退訓(xùn)練組NO水平無明顯差異;與消退訓(xùn)練組相比,舍曲林組和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)組明顯減少NO釋放(P﹤0.01)。(3)Western蛋白印跡結(jié)果顯示,與正常對照組相比,消退對照組和消退訓(xùn)練組大鼠杏仁核和海馬iNOS、nNOS水平均顯著增高(P﹤0.001),與消退對照組相比消退訓(xùn)練組NOS水平無明顯差異;與消退訓(xùn)練組相比,舍曲林組和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)組明顯下調(diào)iNOS、nNOS表達(P﹤0.01)。(4)Elisa試劑盒檢測結(jié)果顯示,與正常對照組相比,消退對照組和消退訓(xùn)練組大鼠杏仁核和海馬IL-1β、IL-6和TNF-α水平均顯著增高(P﹤0.001),與消退對照組相比消退訓(xùn)練組炎癥因子水平無明顯差異;與消退訓(xùn)練組相比,舍曲林組和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)組明顯降低杏仁核和海馬內(nèi)IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P﹤0.01)。(5)海馬神經(jīng)元高爾基染色結(jié)果顯示,與空白對照組相比較,消退對照組和消退訓(xùn)練組大鼠海馬神經(jīng)元樹突長度和分支數(shù)、樹突棘密度明顯減少(P﹤0.001),與消退對照組相比消退訓(xùn)練組神經(jīng)元樹突無明顯變化;與消退訓(xùn)練組相比,舍曲林組和丙泊酚(0.3,1.0mg/kg)組明顯增加海馬內(nèi)神經(jīng)元樹突長度和分支數(shù)、樹突棘密度(P﹤0.001)。(6)細胞水平結(jié)果顯示,丙泊酚能明顯抑制膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)iNOS、nNOS表達水平(P﹤0.01);荷包牡丹堿(50umol/L)拮抗后,能夠逆轉(zhuǎn)丙泊酚抑制細胞內(nèi)iNOS、nNOS的表達水平(P﹤0.05)。以上結(jié)果提示,丙泊酚能夠