草地貪夜蛾人工養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)程

1草地貪夜蛾人工養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)程本規(guī)程規(guī)定了草地貪夜蛾的室內(nèi)人工養(yǎng)殖技術(shù)。本規(guī)程適用于草地貪夜蛾卵、幼蟲、蛹、成蟲的室內(nèi)人工批量養(yǎng)殖。2規(guī)范性引用文件GB/T1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》3術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本規(guī)程。3.1草地貪夜蛾Spodopterafrugiperda(Smith)也稱秋黏蟲,隸屬于鱗翅目Lepidoptera夜蛾科Noctuidae灰翅夜蛾屬Spodoptera，原產(chǎn)于美洲熱帶和亞熱帶地區(qū),為害多種作物,是重要的農(nóng)業(yè)害蟲。具有遷飛速度快、繁殖能力強(qiáng)、暴食危害重及防治難度大等特點(diǎn)。草地貪夜蛾形態(tài)學(xué)特征參見附錄A，生活史參見附錄B。3.2人工養(yǎng)殖artificialbreeding人工培育和繁殖動(dòng)植物的過程。本規(guī)程中特指通過自制草地貪夜蛾飼料對其進(jìn)行室內(nèi)批量飼養(yǎng)繁殖的過程。3.3種蟲provenanceofinsect采集田間個(gè)體較大、無破口、磨損和被寄生蛀孔的優(yōu)質(zhì)健壯草地貪夜蛾卵塊5-10個(gè)，或者蟲體健壯、活動(dòng)能力強(qiáng)、大小一致或接近一致的5-6齡幼蟲100-300頭，作為種蟲。3.4復(fù)壯rejuvenation通過一定的方法和技術(shù)，使人工養(yǎng)殖數(shù)代后發(fā)生退化的草地貪夜蛾的各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)到正常水平的過程。4飼養(yǎng)場所4.1飼養(yǎng)室4.1.1要求2飼養(yǎng)室應(yīng)配備可調(diào)節(jié)溫度、濕度、光照的設(shè)備和紫外消毒設(shè)備，并能夠保溫、保濕、通風(fēng)、透光、防蟲、防鼠；墻壁、地面應(yīng)易清洗、消毒并保持清潔衛(wèi)生；殺蟲劑及其他揮發(fā)性藥物不得攜帶入內(nèi)；不得有粉塵、有害氣體和其它擴(kuò)散性污染源。4.1.2消毒4.1.2.1紫外消毒在開始規(guī)?；曫B(yǎng)前，將飼養(yǎng)室內(nèi)其它養(yǎng)殖昆蟲移出，用75%酒精溶液噴灑柜臺(tái)、桌面、地面和工具后，進(jìn)行紫外消毒30-60min。注意紫外消毒時(shí)人不得進(jìn)入房間，需等關(guān)閉紫外后開空調(diào)或打開門窗通風(fēng)30min后再進(jìn)入。4.1.2.2甲醛熏蒸消毒如出現(xiàn)蟲體被病毒、白僵菌、綠僵菌、線蟲或其它病原微生物感染的情況，則飼養(yǎng)室需要用甲醛熏蒸消毒。按每10m3用5ml甲醛和1g高錳酸鉀的量，將甲醛和高錳酸鉀分別用100ml或200ml的燒杯盛裝，并用雙層紗布蓋住盛裝甲醛的燒杯口。在相對濕度65%以上、溫度24-40℃的條件下，將甲醛倒入裝有高錳酸鉀的燒杯中，快速離開房間。飼養(yǎng)室持續(xù)密閉熏蒸12h，熏蒸結(jié)束后打開所有門窗通風(fēng)24h，待氣體完全散去，再用75%酒精溶液擦拭桌臺(tái)、工具后方可使用。4.2飼養(yǎng)盒用于草地貪夜蛾初孵至2齡末幼蟲的飼養(yǎng)以及卵塊、蛹的集中放置，用長15-20cm、寬10-15cm、高5-7cm的透明塑料盒即可，需在蓋子上開10-15個(gè)直徑3mm左右的圓孔。飼養(yǎng)盒使用前應(yīng)置于高壓滅菌鍋中121℃高壓滅菌20min，或用75%酒精溶液擦拭。4.3飼養(yǎng)管草地貪夜蛾2齡末以后的幼蟲需要單管飼養(yǎng)，用高6-9cm、直徑3-5cm的透明塑料指形管即可，需在蓋子上開2-7個(gè)直徑3mm左右的圓孔。飼養(yǎng)管使用前應(yīng)置于高壓滅菌鍋中121℃高壓滅菌20min，或用75%酒精溶液浸泡1min后晾干。4.4飼養(yǎng)籠草地貪夜蛾成蟲的飼養(yǎng)需用到干凈的長40-80cm、寬40-60cm、高40-60cm的飼養(yǎng)籠。飼養(yǎng)籠其中一個(gè)側(cè)面設(shè)置一個(gè)可活動(dòng)的粘貼門（長10-20cm、寬10-20cm），以方便放置玉米葉片、替換食物和收集卵塊，其余各側(cè)面為80-100目紗網(wǎng)，頂部和底部為金屬板或木板。一個(gè)飼養(yǎng)籠可飼養(yǎng)40-80頭成蟲。飼養(yǎng)籠使用前用75%酒精溶液擦拭。4.5飼養(yǎng)筒草地貪夜蛾成蟲飼養(yǎng)量不大的情況下，可將干凈的A4紙卷成紙筒（高21cm、直徑9cm），并在兩端蓋上塑料培養(yǎng)皿固定，豎直放置。每個(gè)飼養(yǎng)筒可放置1-3頭雄蛹和1-3頭雌蛹，羽化后受精交配產(chǎn)卵。5工具、儀器和其他相關(guān)用品5.1成蟲飼料器皿3草地貪夜蛾蛹羽化前，在飼養(yǎng)籠或飼養(yǎng)筒底部放置1-2個(gè)塑料培養(yǎng)皿，皿內(nèi)放置吸足10%蜂蜜水的脫脂棉（鋪滿培養(yǎng)皿底部），供成蟲食用。培養(yǎng)皿可根據(jù)飼養(yǎng)籠或飼養(yǎng)筒的大小選擇合適的規(guī)格，若用飼養(yǎng)籠可選擇直徑75mm或90mm的培養(yǎng)皿，若用飼養(yǎng)筒可選擇直徑35mm的培養(yǎng)皿。5.2移動(dòng)工具不可直接用手接觸蟲體，可用消毒后的鑷子或毛筆移動(dòng)卵塊、幼蟲和蛹。毛筆或鑷子使用后用75%酒精溶液浸泡1min后晾干，或置于高壓滅菌鍋中121℃高壓滅菌20min，并用干凈的塑料袋裝好以備下次使用。5.3儀器電子天平、高速打碎機(jī)、高壓滅菌鍋、超凈臺(tái)、電磁爐、鍋等。5.4其他用品標(biāo)簽紙、濾紙、脫脂棉、廚房紙、玻璃棒、燒杯、飼料盆、塑料保鮮盒等。除了標(biāo)簽紙，其他用品使用前均需置于高壓滅菌鍋中121℃高壓滅菌20min。6人工飼料的配制6.110%蜂蜜水脫脂棉草地貪夜蛾蛹羽化將脫脂棉浸入10%蜂蜜水中，均勻地浸透脫脂棉，以拿起脫脂棉不滴液為宜。6.2人工飼料配方人工飼料的主要成分為黃豆粉、玉米粉、酵母粉、瓊脂、干酪素、膽固醇、肌醇、山梨酸、氯化膽堿、復(fù)合維生素、對羥基苯甲酸酯、蒸餾水，配方用量見表1。該配方以實(shí)驗(yàn)室常用的夜蛾飼料為基礎(chǔ)，并根據(jù)草地貪夜蛾的需求對原材料和添加劑進(jìn)行優(yōu)化，能完全滿足草地貪夜蛾幼蟲生長的營養(yǎng)元素需求。表1草地貪夜蛾人工飼料配方表成分用量成分用量黃豆粉(g)Soymealpowder肌醇(g)Inose0.1玉米粉(g)Maizepowder225山梨酸(g)Sorbicacid6酵母粉(g)Yeastpowder40氯化膽堿(g)Cholinechloride3瓊脂(g)Agar30復(fù)合維生素(g)Multi-vitamins7干酪素(g)Casein20對羥基苯甲酸甲酯(g)Methylparaben7.5膽固醇(g)Cholesterol0.6蒸餾水(ml)Distilledwater6.3飼料制作按表1配方分別稱取黃豆粉和玉米粉于飼料盆中,加入500mL蒸餾水，用玻璃棒充分?jǐn)嚢?0min，加蓋置于高壓滅菌鍋中121℃高壓滅菌20min。準(zhǔn)確稱取30g瓊脂于鍋中，加入1000mL蒸餾水，在電磁爐上加熱并勻速地?cái)嚢?。待瓊脂在水中完全溶化呈透明狀時(shí)停止加熱,加入上一步驟中已滅菌的飼料勻速攪拌。4將配方中的酵母粉、干酪素、膽固醇、肌醇、山梨酸、氯化膽堿、復(fù)合維生素、對羥基苯甲酸甲酯等混合均勻并研磨成粉，待瓊脂溶液降至60℃以下后加入其中，攪拌均勻后用高速打碎機(jī)將上述配制的飼料均勻打碎，倒入已消毒的塑料保鮮盒中，厚度控制為2-3cm，用蓋子密封，待飼料冷卻至室溫后，放置于4℃冰箱中冷藏待用。在已消毒的飼養(yǎng)盒中平鋪一層0.5-1cm厚的飼料，蓋上蓋子，并用保鮮膜封住蓋子上的圓孔，放4℃冰箱冷藏，作為初孵幼蟲的飼養(yǎng)場所備用。飼料從冰箱取出后應(yīng)先等其溫度恢復(fù)至室溫后再使用。7人工養(yǎng)殖過程7.1養(yǎng)殖條件在人工養(yǎng)殖過程中，除試驗(yàn)供蟲以外，室內(nèi)傳代養(yǎng)殖的草地貪夜蛾不能離開飼養(yǎng)室。養(yǎng)殖條件為溫度26℃±0.5℃、相對濕度65%±5%、光周期L∶D=16h∶8h、光照強(qiáng)度8000lx。7.2卵的集中放置將飼養(yǎng)籠或飼養(yǎng)筒中當(dāng)天雌蛾產(chǎn)在玉米葉片、保鮮膜或褶皺紅色塑料紙上的卵塊或在田間采集的卵塊，沿著卵塊邊緣將玉米葉片、保鮮膜或褶皺紅色塑料紙剪下，用鑷子夾住邊緣，將卵塊置于低濃度（0.5%-1%）的次氯酸鈉水溶液中浸泡5s左右取出，用濾紙吸干表面，置于培養(yǎng)皿中，在干燥、陰涼、通風(fēng)處晾干，集中平鋪放在消毒的飼養(yǎng)盒內(nèi)，并用標(biāo)簽紙記錄產(chǎn)卵或采集時(shí)間。待卵塊變成褐色時(shí)，取一塊放入新的消毒飼養(yǎng)盒待其孵化。7.3幼蟲飼養(yǎng)7.3.1初孵幼蟲的飼養(yǎng)飼養(yǎng)盒內(nèi)幼蟲孵出后，用消毒的毛筆將初孵幼蟲轉(zhuǎn)移至鋪有飼料的飼養(yǎng)盒中飼養(yǎng)。每個(gè)飼養(yǎng)盒可放入初孵幼蟲150-200頭。蓋口加上一層高溫滅菌的廚房紙，確保廚房紙完全蓋住蓋口，再蓋上已開好圓孔的蓋子。持續(xù)喂養(yǎng)。7.3.22齡末以后幼蟲的飼養(yǎng)草地貪夜蛾幼蟲生長至2齡末以后需單管飼養(yǎng)，用消毒的毛筆分裝到消毒的飼養(yǎng)管中，每管一頭，并放置一塊長2-3cm、寬1-2cm、高3-4cm的飼料塊，蓋口封上一層高溫滅菌的廚房紙，確保廚房紙完全蓋住蓋口，蓋上已開好圓孔的蓋。持續(xù)喂養(yǎng)，直到化蛹。7.4蛹的集中放置待老熟幼蟲化蛹，隔2天再將蛹挑出，用4%甲醛水溶液浸泡10s左右，進(jìn)行體表消毒，再用滅菌水將蛹體洗凈后放置于塑料培養(yǎng)皿中，于超凈臺(tái)上室溫將蛹晾干。晾干后放入消毒的飼養(yǎng)盒中，每盒放20-40頭。蛹應(yīng)平鋪盒底，不能堆放。7.5成蟲的飼養(yǎng)待蛹變?yōu)榧t褐色即將羽化時(shí)，將1-2個(gè)盛裝蛹的飼養(yǎng)盒放入飼養(yǎng)籠內(nèi)待其羽化。羽化前先在飼養(yǎng)籠里放入2-3個(gè)裝有吸足10%蜂蜜水脫脂棉的培養(yǎng)皿（脫脂棉鋪滿整個(gè)培養(yǎng)皿底部供成蟲食用。在開始羽化后的前5-6天，每天換入長約10cm的新鮮玉米葉片、保鮮膜或褶皺的紅色塑料紙供成蟲產(chǎn)卵。注意每天更換一次糖水和玉米葉片、保鮮膜或褶皺的紅色塑料紙，收集卵塊并清理死成蟲。58復(fù)壯定期到田間采集草地貪夜蛾的卵塊放入消毒的飼養(yǎng)盒中，在溫度26℃±0.5℃、相對濕度65%±5%、光周期L∶D=16h∶8h、光照強(qiáng)度8000lx的條件下培育，孵化后選擇體壯、個(gè)頭大、活動(dòng)能力強(qiáng)的5-6齡幼蟲作為種蟲，淘汰體瘦、個(gè)頭小、活動(dòng)能力弱或反應(yīng)遲鈍的幼蟲、蛹和成蟲。6（資料性附錄）草地貪夜蛾形態(tài)鑒別特征A.1卵草地貪夜蛾產(chǎn)卵方式為塊產(chǎn)，主要產(chǎn)于植株葉片正面或背面。多粒卵堆積成塊狀，通常覆蓋白色或淺灰色的絨毛，單個(gè)卵塊100-300粒卵不等，通常2-3層，最多不超過5層，偶有單層排列。卵粒直徑約0.4mm，高約0.3mm，底部扁平，呈圓頂形，卵粒表面具放射狀花紋，具光澤。卵初產(chǎn)時(shí)為淺綠色或白色，孵化前逐漸變?yōu)樽厣?。圖A.1草地貪夜蛾卵（章婉賢，2019）A.2幼蟲草地貪夜蛾1齡幼蟲體色為黃色或綠色，頭部青黑色，體長1.7mm左右。2齡幼蟲頭部由青黑色變?yōu)槌赛S色，從2齡末期開始，體背變?yōu)楹稚?。低齡幼蟲體表具有白色縱條紋，各腹節(jié)背面都有4個(gè)長有剛毛的黑色或黑褐色斑點(diǎn)，從3齡開始，第8、9腹節(jié)背面的斑點(diǎn)顯著大于其他各節(jié)斑點(diǎn)，并表現(xiàn)出特有的排列特征，即第8腹節(jié)4個(gè)斑點(diǎn)呈正方形排列，第9腹節(jié)的4個(gè)斑點(diǎn)呈梯形排列。頭部“V”形紋與前胸盾板中央的條紋一起形成白色或淺黃色倒“Y”形紋路。圖A.2草地貪夜蛾幼蟲不同齡期（《草地貪夜蛾識(shí)別與應(yīng)急防治技術(shù)掛圖》，2019）7圖A.3草地貪夜蛾幼蟲（馬千里，2019）A.3蛹草地被蛹，橢圓形，長14-18mm，寬4.5mm，化蛹初期為淡綠色，逐漸變?yōu)榧t棕色至黑褐色。第2至7腹節(jié)氣門呈橢圓形，開口向后方，圍氣門片黑色，第8腹節(jié)兩側(cè)氣門閉合。第5至7腹節(jié)可自由活動(dòng)，后緣顏色較深，第4至7腹節(jié)前緣具磨砂狀刻點(diǎn)。腹部末節(jié)具兩根臀棘，臀棘基部較粗，分別向外側(cè)延伸，呈“八”字形，臀棘端部無倒鉤或彎曲。圖A.4草地貪夜蛾蛹（《草地貪夜蛾識(shí)別與應(yīng)急防治技術(shù)掛圖》，2019）A.4成蟲草地貪夜蛾成蟲體色多變，從暗灰色、深灰色到淡黃褐色均有。雄蛾體長雌蛾個(gè)體稍大，體長18-20mm，前翅長11-18mm。雄蛾前翅灰棕色，翅面上有呈淡黃色、橢圓形的環(huán)形斑，環(huán)形斑下角有一個(gè)白色楔形紋，翅外緣有一明顯的近三角形白斑。雌蟲前翅多為灰褐色或灰色和棕色的雜色，無明顯斑紋，雌蛾和雄蛾的后翅都為銀白色，有閃光，邊緣有窄褐色帶。8圖A.5草地貪夜蛾成蟲（《草地貪夜蛾識(shí)別與應(yīng)急防治技術(shù)掛圖》，2019）9（資料性附錄）草地貪夜蛾生活史B.1生活史草地貪夜蛾的一生包括4個(gè)階段：卵、幼蟲、蛹和成蟲。草地貪夜蛾的適宜發(fā)育溫度為11-30℃,在28℃（最適溫度）條件下30天左右即可完成一個(gè)