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江香薷乙酸乙酯提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用班級：學生：xxx學號：指導教師：概述

江香薷

江香薷(MoslachinensisMaxmi.cv.jiangxiangruCV.nov.)為唇形科一年生草本植物,以干燥地上部分入藥,用于暑濕感冒、惡寒發(fā)熱、頭痛無汗、腹痛吐瀉、小便不利、水腫等癥,是江西省的地道藥材之一,主產于江西省新余市渝水區(qū)、分宜縣等地。但目前的研究大部分集中在江香薷揮發(fā)油總成分的抗菌、抗炎、抗病毒、對神經系統(tǒng)的抑制作用等，而對于非揮發(fā)性成分尤其是多糖及黃酮類化合物這些具有廣泛生物活性的物質的研究很少。因此，我們認為，從江香薷的非揮發(fā)性成分中分離出新的生物活性物質并深入研究其生物活性作用具有重要的研究意義。

實驗材料材料：江香薷購自江西省南昌市黃慶仁棧華氏大藥房。試劑：α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)；4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-α-D-glucopyranosodide，pNPG)及還原型谷胱甘肽均系美國Sigma公司產品；拜唐蘋（阿卡波糖，每片含50mg），拜耳醫(yī)藥保健有限公司；PH7.4磷酸鹽緩沖液（Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O）；無水碳酸鈉（Na2CO3）；二甲亞砜(DMSO)；無水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；正丁醇及超純水均為國產分析純。儀器：Uv-2550紫外分光光度計（日本島津公司），智能恒溫電熱套及加熱回流裝置；RE-52A旋轉蒸發(fā)儀；分液漏斗；圓底燒瓶；saroriusBP211D電子天平；JJ200精密電子天平；HH-4數顯恒溫水浴箱；各種規(guī)格移液器及槍頭；KQ-300DE型數控超聲波清洗器；JC101型電鼓風干燥箱；凍干機等。實驗流程提取濃縮萃取測定凍干將乙酸乙酯萃取液濃縮后進行冷凍干燥分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取用10倍量80%乙醇、水各提取2小時用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至100~200ml測定乙酸乙酯提取物對α-葡萄糖苷酶抑制作用實驗方案江香薷提取物抑制α-葡萄糖苷酶的純酶活性測定方案原理：在適宜的條件下，底物pNPG在α-葡萄糖苷酶的催化作用下生成pNP和葡萄糖，可表示為:

pNP-α-Glu

α-Glucosidase

pNP+葡萄糖其中pNP在410nm下有特征吸收峰，而pNPG、葡萄糖在410nm下的紫外吸收很小，對結果影響可以忽略不計。通過酶與底物反應進行實驗，對α-葡萄糖苷酶與底物反應的底物濃度與反應時間進行優(yōu)化。江香薷提取物抑酶活性篩選方案（1）測定江香薷石油醚提取物及萃取剩余物各需五支微型離心管，分別為A管、B管、C管、D管、E管

（2）各管作用如下：A管B管E管C管D管江香薷提取物測定管陽性對照管調零管測定提取物吸光度未被抑制酶活性反應管（2）反應時間優(yōu)化

α-葡萄糖苷酶與底物反應對反應時間進行優(yōu)化的結果見表2與圖2。時間吸光度1吸光度2吸光度3平均值5min0.3630.3690.3670.36610min0.4830.4910.4980.49115min0.3280.3260.3320.32920min0.4420.4320.4380.43725min0.3350.3570.3610.35130min0.3800.3900.3940.388表2圖2由以上實驗確定最佳底物濃度確定為為0.200mg/mL；最佳反應時間確定為10min。江香薷提取物抑酶活性篩選結果根據優(yōu)化結果進行實驗。

E管（酶+底物）pNP吸光度平均值為0.63；在平行條件下測得陽性對照阿卡波糖在濃度為5.0mg/mL時抑制率為47.51%。α-葡萄糖苷酶抑制率計算公式如下:

酶活性抑制率=[AE-(AA-AC)]/AE·100%采用幾個濃度梯度測定乙酸乙酯萃取組分對α-葡萄糖苷酶的體外抑制活性，各萃取組分在各濃度下對α-葡萄糖苷酶的體外抑制活性見表3。根據表3作圖，得圖3。濃度管號吸光度1吸光度2吸光度3平均值A-C差值抑制率8mg/mLA1.5561.5551.5571.556-0.053108.41%C1.611.6071.611.6094mg/mLA0.9260.9280.9290.9280.21266.30%C0.7130.7180.7150.7152mg/mLA0.8230.8250.8250.8240.45228.31%C0.3730.3720.3730.3731mg/mLA0.7350.7350.7320.7340.53614.87%C0.1980.1980.1970.1980.5mg/mLA0.6720.6750.6760.6740.56111.01%C0.1150.1160.110.114表3圖3實驗結果表明，江香薷乙酸乙酯提取物具有較高的抑制活性，濃度為4.0mg/mL呈現(xiàn)66.30%的抑制率，濃度為8.0mg/mL呈現(xiàn)108.41%的抑制率，強于陽性對照市售α-葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖（濃度5.0mg/mL抑制率為47.51%），濃度≤2.0mg/mL時具有較好的抑制活性，但其抑制率已經低于陽性對照市售α-葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖。大學本