仿刺參精多糖的提取純化及其活性研究.x課件

仿刺參精多糖的提取純化及其活性研究海參是一種在中國沿海的重要海洋食品,含有多種功能性成分及多種保健功能。近年來,海參多糖逐步在海參保健功能的研究中占有了重要地位,研究重點包括抗腫瘤、增強免疫等。在海參的加工過程中,海參精作為海參的副產(chǎn)物之一,經(jīng)常會被丟棄,這樣既造成了浪費,也污染了環(huán)境。因此,本課題選擇海參中具有較高經(jīng)濟價值的仿刺參中的海參精為實驗材料進行多糖的提取和活性研究。首先對其進行不同蛋白酶酶解的工藝優(yōu)化:單因素實驗和響應面實驗,然后采用不同的方法對酶解得到的仿刺參精粗多糖（SCSCP）進行逐步的分離純化得到四個組分（SCSPA₁、SCSPA₂、SCSPB₁、SCSPB₂）,最后對各分離組分分別進行理化性質(zhì)的測定及抗腫瘤和抗氧化活性初步研究,以期為海參精副產(chǎn)物中多糖的生產(chǎn)及應用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。結(jié)果如下:1.仿刺參精多糖的提取選擇兩種應用廣泛的蛋白酶,以多糖得率為指標,將添酶量、酶解溫度和酶解時間作為重要的影響因子,首先進行了兩種單酶各個因素取值范圍的確定,然后進行了響應面優(yōu)化試驗,最后對雙酶酶解添加比例進行了篩選實驗。結(jié)果表明:木瓜蛋白酶單酶的提取率較高,添酶量為3%、酶解溫度為49℃、酶解時間為6h時,其得率可達10.64‰。2.仿刺參精多糖的純化及理化性質(zhì)分析多糖SCSCP經(jīng)DEAESepharoseFastFlow柱層析得到SCSPA₁和SCSPA₂兩個主要組分,對SCSPA₁進行葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析純化得到SCSPB₁,對SCSPA₂進行SephadexG-200純化得到SCSPB₂,分別對分離純化到的各組分進行理化性質(zhì)的分析。結(jié)果:首先,在化學組成方面,SCSCP、SCSPA₁、SCSPA₂、SCSPB₁和SCSPB₂的多糖含量分別為31.07%、40.03%、45.27%、44.62%、50.73%;蛋白含量分別為21.18%、19.43%、7.52%、10.36%、6.61%;糖醛酸含量分別為3.81%、3.14%、1.73%、3.50%、2.97%;硫酸根含量分別為12.39%、10.07%、17.71%、12.66%、21.33%。其次,紫外和紅外光譜掃描結(jié)果表明五種多糖組分在多糖的特征吸收區(qū)域內(nèi)均有吸收峰。最后,在單糖組成方面,甘露糖、氨基葡萄糖、乳糖、半乳糖和巖藻糖均被SCSPB₁和SCSPB₂所含有,但兩者所含單糖含量有所差異,而氨基半乳糖鹽酸鹽只被SCSPB₂所特有。3.仿刺參精多糖腫瘤抑制活性的研究采用MTT法對仿刺參精多糖及其純化組分進行Hela和HepG2腫瘤細胞增殖能力的體外抑制試驗表明:Hela細胞和HepG2細胞的培養(yǎng)時間不同SCSCP抑制效果也不同,五種多糖抑制細胞生長強弱順序依次為SCSPB₂>SCSPA₂>SCSPB₁>SCSPA₁>SCSCP。當SCSPB₂濃度為10mg/mL時,對培養(yǎng)72h的Hela細胞和HepG2細胞的抑制率分別為85.63%和88.46%,表明具有顯著的體外抗腫瘤活性。4.仿刺參精多糖的抗氧化活性研究本文對分離組分進行了:DPPH·、羥基自由基（OH·）和超氧陰離子自由基(O_2-·)清除活性的測定。結(jié)果表明在三種自由基清除上,粗多糖及其純化組分都發(fā)揮了不同的作用。所有組分都在O_2-·的清除實驗上呈現(xiàn)出微弱的能力,但不同組分之間有一定的區(qū)別;在其余兩個自由基清除實驗中各個多糖組分均呈現(xiàn)出較強的能力,且互相之間也有差別。其中,對三種自由基SCSPB₂的能力最強,在DPPH·、OH