膠質(zhì)瘤細胞答辯論文課件

C6膠質(zhì)瘤細胞的培養(yǎng)和模型的建立姓名：張永煌專業(yè)：09藥物制劑指導老師：徐維平實習單位：安徽省立醫(yī)院藥劑科

研究背景與目的實驗儀器與材料細胞培養(yǎng)與造模實驗結果觀察

總結與討論目錄一、研究背景與目的二、實驗儀器與材料儀器：1.MCO175型二氧化碳培養(yǎng)箱2.腦立體定向儀3.臺式冷凍離心機4.倒置顯微鏡5.3.0T核磁共振儀6.25μL微量注射器材料：三、C6膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)與造模

1.C6膠質(zhì)瘤細胞的培養(yǎng)細胞復蘇細胞傳代2.

腦立體定向接種C6細胞建模注射細胞準備注射前準備 接種方法

大鼠生存狀況觀測

MRI檢查病理解剖學檢查組織學檢查

1.細胞復蘇凍存管浸入37℃溫水，融化細胞懸液加到離心管，滴加10倍培養(yǎng)液1000r/min，5min棄上清，加小牛血清，調(diào)整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)細胞圖片2.細胞傳代吸去培養(yǎng)基，PBS洗滌加胰酶消化液，用槍吹打細胞顯微鏡下，細胞出現(xiàn)明顯收縮、從培養(yǎng)皿中脫離參加含血清的完全細胞培養(yǎng)液，繼續(xù)吹打下細胞轉(zhuǎn)移該培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，參加新鮮培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)二、腦立體定向接種C6細胞建立模型1.注射細胞準備：接種前取對數(shù)生長期C6細胞0.25％胰酶消化、收集細胞制成細胞懸液臺盼藍排斥試驗鑒定細胞存活率大于95％調(diào)整細胞濃度為2.5×106/ml，置于37℃恒溫搖床待用。2.注射前準備：前12h大鼠禁食和水，用10%水合氯醛麻醉立體定向儀固定，常規(guī)消毒內(nèi)眥連線中點后縱向切開頭皮1cm，暴露顱骨前囟冠狀縫與矢狀縫交1.0mm、右3.0mm處用三棱針鉆一直徑1.0mm的小孔，不可傷及硬腦膜3.注射細胞：微量注射器抽取25μL的C6細胞懸液，針尖調(diào)節(jié)至觸及硬腦膜沿鉆孔垂直進針5.5mm，后退1mm細胞懸液注入尾狀核內(nèi)，推注時間為10min，注射完畢后留針10min后，緩慢退針噴灑適量抗生素，縫合皮膚，切口消毒，常規(guī)飼養(yǎng)4.組織學檢查：

HE染色常規(guī)病理檢查：GFAP免疫組織化學檢查：陰性對照以PBS代替一抗陽性對照片由試劑公司提供。四、實驗結果1.大鼠生存狀況觀測：2.MR影像學變化：T1T2增強掃描3.病理解剖特征：腦組織標本，可見腫瘤〔☆示〕4.組織學檢查結果b.大鼠正常腦組織〔HE，×100〕c.荷瘤鼠腦內(nèi)腫瘤中心組織〔HE，×200〕d.腫瘤邊緣組織〔HE，×100〕e.腫瘤組織GFAP免疫組化染色〔HE，×400〕五、實驗討論：

1.細胞數(shù)量和細胞活力：細胞數(shù)目過少模型成功率低，過高雖能保證實驗動物造模成功率但動物生存狀態(tài)差且生存期短，不利用于進一步實驗研究；實驗摸索1×106?10μL-1、2.5×106?25μL-1、4×106?25μL-1、6×106?μL-1接種數(shù)量；最適合的種體積為25μL，細胞數(shù)為2.5×106個；每次接種前輕輕搖晃吹打細胞懸液,防止細胞沉淀導致細胞接種不均勻；細胞活力應＞90％；2.靶點定位：定位選擇鼠腦右側(cè)尾殼核為注射點;冠狀縫前1mm，矢狀縫右3mm進針，深度為距硬腦膜約5.5mm。3.進針深度和細胞注射速度C6細胞沿接種針道向顱外生長是該腫瘤模型的主要缺乏；在腦內(nèi)進針后稍后退的方法，即先進針5.5～6mm，然后上提1mm，造成靶點位置的一個空隙；注射過程緩慢，防止懸浮液從腦內(nèi)溢出。

4.細胞與靶點腦組織接觸時間采用微量注射器精密吸取25μL，10min內(nèi)勻速推注完畢，然后再原位留針10min；延長留置時間一方面有利于瘤細胞沉積在穿刺道的底部，另一方面有利于腦組織適應局部的壓力增高。致謝感謝安徽中醫(yī)藥大學的領導、老師們四年來的教誨與幫助。在此，我要向他們深深