常規(guī)冰凍制片常見問題分析湘雅醫(yī)院病理科付春燕

常規(guī)及冰凍切片制片中常見的

問題分析及解決方法中南大學(xué)湘雅醫(yī)院病理科傅春燕常規(guī)、冰凍制片常見問題及對(duì)策冰晶的問題----冰凍切片制片時(shí)如何減少冰晶染色的問題----怎樣使切片染色更漂亮標(biāo)本切開與固定----如何做好標(biāo)本的切開與固定一、冰凍切片制片中冰晶的問題

冰晶的產(chǎn)生：當(dāng)組織緩慢冷凍時(shí)，組織間隙的水份凝固形成的，這時(shí)由于電解質(zhì)析出，滲透壓升高，細(xì)胞內(nèi)的水分子滲透到細(xì)胞外，使組織間隙的冰晶變得更大，擠壓周圍組織，使組織細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的改變，嚴(yán)重影響病理診斷。

所以良好的冰凍切片制作取決于標(biāo)本的冷凍速度，要想組織在冷凍過程中不產(chǎn)生或者少產(chǎn)生冰晶，就必須

使組織快速冷凍，而且冷凍得越快越好。

如何使組織快速冷凍如何減少冰晶

1、標(biāo)本送檢的要求

臨床醫(yī)師取組織后盡量避開水源，不能水洗，不能加放固定液，送檢標(biāo)本時(shí)不要用生理鹽水浸泡，不要用濕紗布包裹組織，由于液體浸泡后，組織內(nèi)水分增加，冷凍后組織內(nèi)冰晶就會(huì)增多。

2、

取材不能太大、太厚

組織塊的大小、厚薄決定了冷凍的速度，太大、太厚的組織由于冷凍時(shí)間長，難免有冰晶的產(chǎn)生。所以，取材組織塊小于1.5*1.5*0.3cm。取材3mm厚

取材4mm厚3、使用吸水紙

可以吸干組織表面的水分4、樣本托和打底膠預(yù)冷打底膠預(yù)冷膠未預(yù)冷補(bǔ)膠要少動(dòng)作要快

補(bǔ)加膠的時(shí)候，動(dòng)作要快，而且不能補(bǔ)加太多的膠，因?yàn)槟z的量越多凍得越慢，（可以是周圍加膠，也有兩頭加的）放標(biāo)本動(dòng)作要快特別是一個(gè)樣本托要放幾塊組織時(shí)，動(dòng)作要快

5、使用

速凍臺(tái)和冷凍錘加快組織的冷凍

每臺(tái)冰凍切片機(jī)都有一個(gè)速凍臺(tái)，好的冰凍切片機(jī)可以在幾分鐘內(nèi)將速凍臺(tái)的溫度下降至-50℃～-60℃度之間。冷凍錘從上面壓在組織上，可以使組織上下兩面同時(shí)冷凍一臺(tái)冰凍切片機(jī)有多個(gè)冷凍錘6、液氮和急凍劑

使用液氮和急凍劑來快速冷凍組織7、專用冷凍機(jī)

使用專用冷凍機(jī)可以使組織標(biāo)本在1分鐘之內(nèi)冷凍好總結(jié)：減少冰晶的措施1、組織不能水洗，組織取材要小、?。ㄔ谀軡M足診斷的基礎(chǔ)上盡量小、?。┎⒂梦埼山M織表面的水份2、樣本托、打底膠要預(yù)冷、補(bǔ)膠量要少，（在保證切片完整）3、放多塊組織和補(bǔ)加膠時(shí)動(dòng)作要快4、充分利用速凍裝置如：冷凍臺(tái)、冷凍錘、來加快組織的冷凍5、購置專用冷凍機(jī)、急凍劑、專用液氮灌

二、常規(guī)與冰凍制片中常見問題

切片染色的問題脫蠟試劑的問題怎樣使切片染色更漂亮1、正確選擇染色試劑蘇木素、伊紅的配方2、注意染色過程中的細(xì)節(jié)問題1、蘇木素、伊紅配方的選擇（1）改良Gill蘇木素液：蘇木2.5克溶于乙二醇250ml中。硫酸鋁銨17.6克溶于蒸餾水730ml,以上二液充分溶調(diào)后混合，加碘酸鈉0.2克，使用前加冰醋酸20ml.（2）酸化沉淀伊紅液貯備液：伊紅20克，蒸餾水500ml,經(jīng)充分溶解后加濃鹽酸10ml，用玻棒不斷攪拌，過夜析出沉淀，棄去上清液，用蒸餾水反復(fù)洗沉淀三次，用濾紙過濾，棄去濾液，沉淀與濾紙一同放入烤箱，干燥后，用95%乙醇1000ml配成飽和液，即貯備液。工作液：取貯備液1份與95%乙醇2--3份，混合

2、注意染色的細(xì)節(jié)脫蠟徹底（熱片和震動(dòng)）染色前用濾紙刮去蘇木素液表面的氧化膜蘇木素染色（過染）、分化，藍(lán)化、鏡下觀察，流水沖洗10分鐘以上分化液為0.5%鹽酸酒精伊紅過染時(shí)，可用70%酒精洗至理想顏色染色時(shí)要注意試劑的量是否足夠手工染色時(shí)，為了保證各缸試劑的濃度，盡量不要把前一缸的試劑帶入后一缸內(nèi)使用新鮮的試劑，定期更換染色試劑染色試劑的更換除了二甲苯換掉第一缸，后面的二甲苯往前移外，其他的試劑都換新的。廢液倒掉后，試劑瓶要清洗干凈并且擦干。更換試劑后要預(yù)先試染一批切片。更換試劑時(shí)要注意不要弄錯(cuò)試劑擺放的順序。由于天氣的原因，試劑容易揮發(fā)，要及時(shí)添加或更換。細(xì)節(jié)決定成敗在常規(guī)和冰凍切片制片過程中，切片染色也是比較重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，如果這個(gè)環(huán)節(jié)沒做好，也一樣地影響病理診