細(xì)菌的生化反應(yīng)

細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng)

不同細(xì)菌具有各自獨(dú)特的酶系統(tǒng)，因而對(duì)底物的分解能力各異，其代謝的產(chǎn)物也不相同。這些代謝產(chǎn)物又各具有不同的生物化學(xué)特性，為此，可利用生物化學(xué)的方法測(cè)定這些代謝產(chǎn)物以鑒定細(xì)菌蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝實(shí)驗(yàn)B各種酶類實(shí)驗(yàn)D碳源和氮源利用實(shí)驗(yàn)C碳水化合物的代謝實(shí)驗(yàn)A

抑菌實(shí)驗(yàn)E

（一）糖類發(fā)酵試驗(yàn)

(1)原理：細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖類的酶，故分解糖的能力不同，終末產(chǎn)物亦不一致。多糖－→單糖－→丙酮酸－→酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)－→pH↓－→指示劑呈酸性變色(若產(chǎn)氣者有氣泡出現(xiàn))一、碳水化合物代謝試驗(yàn)細(xì)菌的生化反應(yīng)(2)培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入0.5％-1％的糖類(單糖、雙糖或多糖)、醇類(甘露醇、肌醇等)、苷類(水楊苷、菊糖等)糖發(fā)酵管、半固體發(fā)酵管、微量發(fā)酵管試劑：酚紅、溴甲酚紫等(3)方法：將細(xì)菌接種到糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)數(shù)小時(shí)至2w后，觀察結(jié)果

（一）糖類發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述酸性變色、有氣泡+

分解糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣酸性變色、無氣泡+分解糖、產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣培養(yǎng)基不變色-不分解糖、無任何變化

(4)結(jié)果：(5)應(yīng)用：是鑒定細(xì)菌最主要的試驗(yàn)，特別對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的鑒定尤為重要葡萄糖HCOOH甲酸脫氫酶

CO2+H2

（二）葡萄糖氧化/發(fā)酵（O/F）試驗(yàn)(1)原理：細(xì)菌分解葡萄糖過程中，根據(jù)對(duì)O2需求的不同，分為氧化型（只在有氧環(huán)境中分解葡萄糖）發(fā)酵型（有氧、無氧都能分解葡萄糖）產(chǎn)堿型（不能分解葡萄糖）(2)方法：將待檢菌同時(shí)接種兩支HL培養(yǎng)基，一支滴加無菌液體石蠟，高度不少于1cm。將培養(yǎng)基于35℃培養(yǎng)48h或更長。(3)結(jié)果：兩支培養(yǎng)基均無變化為產(chǎn)堿型；兩支培養(yǎng)基均產(chǎn)酸（黃色）為發(fā)酵型；若僅不加石蠟的培養(yǎng)基產(chǎn)酸為氧化型。(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌與非發(fā)酵菌的鑒別。也用于葡萄球菌與微球菌間的鑒別－但配方不同。（二）葡萄糖氧化/發(fā)酵（O/F）試驗(yàn)（三）β-半乳糖苷酶（ONPG）試驗(yàn)(1)原理：某些細(xì)菌產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，分解鄰-硝基酚β-D-半乳糖苷ONPG，產(chǎn)生黃色鄰-硝基酚細(xì)菌分解乳糖需要2種酶：半乳糖苷滲透酶（將乳糖送入細(xì)胞內(nèi)）β-半乳糖苷酶（將乳糖分解為葡萄糖、半乳糖）僅有β－半乳糖苷酶，則分解乳糖慢ONPG結(jié)構(gòu)與乳糖相似，但分子小，不需滲透酶可進(jìn)入細(xì)胞(2)方法：從克氏雙糖鐵培養(yǎng)基上取菌，于0.25ml無菌生理鹽水中制成菌懸液，加入甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5min，加入0.25mlONPG試劑，水浴20min左右觀察結(jié)果。（三）β-半乳糖苷酶（ONPG）試驗(yàn)(3)結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反應(yīng)，一般在20～30min內(nèi)顯色。(4)應(yīng)用：迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。本試驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。（三）β-半乳糖苷酶（ONPG）試驗(yàn)（四）七葉苷水解試驗(yàn)(1)原理：有的細(xì)菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中枸櫞酸的二價(jià)鐵離子反應(yīng)，生成黑色化合物。(2)培養(yǎng)基：七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基。(3)方法：將待檢菌接種于七葉苷培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。(4)結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛栃?，不變色者為陰性?5)應(yīng)用：主要用于D群鏈球菌與其它鏈球菌的鑒別，前者陽性，后者陰性。（四）七葉苷水解試驗(yàn)葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH在5.4以上甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅（五）甲基紅試驗(yàn)(1)原理：產(chǎn)生少量酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基呈黃色(2)培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。(3)方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2~4d，于培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基紅試劑，立即觀察結(jié)果。(4)結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽性；橘紅色為弱陽性；黃色為陰性。(5)應(yīng)用：鑒別腸桿菌科細(xì)菌，尤其大腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。（五）甲基紅試驗(yàn)產(chǎn)氣腸桿菌葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇

PH＞5.4甲基紅

-大腸埃希菌葡萄糖→丙酮酸

PH≤4.4甲基紅

+（五）甲基紅試驗(yàn)陽性陰性對(duì)照大腸桿菌：+產(chǎn)氣桿菌：—葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅脫羧

（六）V-P（伏－普）試驗(yàn)(2)培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。(3)方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于35℃培養(yǎng)48h后加入甲液(6％α·萘酚酒精溶液)和乙液(40％KOH溶液)，振搖。(4)結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性；如無紅色出現(xiàn)且于35℃4h后仍不變色即為陰性。(5)應(yīng)用：鑒別腸桿菌科細(xì)菌，常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧栃缘募?xì)菌，后者通常為陰性。

（六）V-P（伏－普）試驗(yàn)陽性陰性產(chǎn)氣腸桿菌葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙?！t色化合物（+）