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文檔簡介

血凝的基本知識倍賽血凝事業(yè)部2024/1/1711血凝的基本知識血液凝固(凝血):形態(tài):血液由液體狀態(tài)——凝膠狀態(tài)。本質(zhì):纖維蛋白原——纖維蛋白?;緦W(xué)說——凝血瀑布學(xué)說。2024/1/1721凝血瀑布學(xué)說血液凝固是一系列凝血因子酶反應(yīng)過程;每個凝血因子都被其前一因子所激活;最后激活凝血酶原生成凝血酶凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白,生成纖維蛋白凝塊。2024/1/1731血凝試劑的基本原理及臨床應(yīng)用凝血功能的一些檢測手段常規(guī)篩選檢測(檢測凝血功能是否正常)PT——凝血酶原時間測定。APTT——活化部分凝血活酶時間測定。TT——凝血酶時間測定。●特殊物質(zhì)檢測(檢測引起凝血功能異常的原因)纖維蛋白原測定纖維蛋白降解產(chǎn)物D-二聚體凝血因子檢測發(fā)色底物測定(如蛋白C,蛋白S,等)2024/1/1741血凝常規(guī)四項檢測PT---凝血酶原時間測定APTT---活化部分凝血活酶時間測定TT---凝血酶時間測定FBG---纖維蛋白原測定2024/1/1751PT測定PT試劑中主要含組織因子(TF)和ca離子,試劑中加入血漿后,TF和ca離子與血漿中Ⅶ因子,形成TF-Ⅶ-ca離子復(fù)合物,啟動外源性凝血途徑;最后使凝血酶原形成凝血酶,凝血酶可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白。纖維蛋白的交聯(lián),聚合成凝膠狀態(tài);血漿從流動狀態(tài)變成凝固狀態(tài)這個過程短時間內(nèi)完成,可用儀器檢測。這段時間即為凝血酶原時間PT,一般以秒表示。2024/1/1761PT檢測臨床應(yīng)用(2)

監(jiān)控口服抗凝藥病人的凝血功能口服抗凝藥治療時間比較長,治療過程需要監(jiān)控;劑量增加或減少,會引起出血或凝血;口服抗凝藥治療病人的治療劑量,治療時間由PT檢測決定,一般要控制在INR2.0-3.0之間。2024/1/1771INR-國際標(biāo)準(zhǔn)化比值

INR=(正常人血漿PT平均值—每一實驗室取20個以上正常人血漿測得的PT秒數(shù)平均值。

不能用質(zhì)控血漿或參值作為正常人比血漿PT血漿PT平均值—不準(zhǔn)確ISI-國際敏感指數(shù)2024/1/1781PT的ISI值

ISI——國際敏感指數(shù)ISI值是生產(chǎn)廠商生產(chǎn)的PT試劑與國際標(biāo)準(zhǔn)PT試劑測值相比的值,凡出廠的PT試劑必須標(biāo)明其正確的ISI值。

若ISI=1則表示該試劑敏感度與國際標(biāo)準(zhǔn)試劑值一致若ISI值越大,則表明該試劑越不敏感。2024/1/1791各種ISI值的PT試劑ISI值試劑敏感度建議使用試劑ISI值1.0-1.2敏感如長島液體PT試劑太平洋PT試劑DadeBehringPT試劑ISI值1.2-1.4比較敏感如庫爾特PT試劑StagoPT試劑ISI值1.6以上不敏感不建議使用2024/1/17101不同ISI值的PT試劑的INR計算舉例

同一種標(biāo)本,同一儀器,用不同ISI值試劑測定,INR值應(yīng)相同。ISI值:1.02

在庫爾特儀器上正常人平均值=11.8秒長島液體PT異常病人標(biāo)本測得PT值試劑=39秒病人ISI值:1.36

在庫爾特儀器上正常人

ACL平均PT值=12秒庫爾特原裝異常病人標(biāo)本測得PT值PT=29.8秒試劑病人2024/1/17111PST試劑ISI值正確標(biāo)識的重要性國內(nèi)有些試劑生產(chǎn)廠商,生產(chǎn)的PT試劑試劑ISI值只有1.8左右,甚至2.0以上,但他們提供給客戶的ISI值卻是1.22。舉例:國內(nèi)某公司生產(chǎn)的血凝試劑,正常人PT平均測值為12秒,測得口服抗凝藥病人血漿PT=22秒,標(biāo)示的ISI值為1.22,而實際ISI卻為1.8。計算:INR(標(biāo)本值)=

INR(標(biāo)本值)=☆PT結(jié)果不準(zhǔn)確,會導(dǎo)致異常的病人有可能被認為正常;☆誤導(dǎo)口服抗凝藥病人用藥,嚴重的會引起出血。實際INR》3.0應(yīng)減少用藥,但按標(biāo)識的ISI值計算結(jié)果永遠《3.0.2024/1/171212024/1/17131部分廠商提供不真實ISI值的原因※原因:★技術(shù)水平達不到生產(chǎn)ISI<1.6的PT試劑,如標(biāo)識真實ISI值(1.8),試劑不能被市場接受?!蠊骸镎`導(dǎo)用藥,引起醫(yī)療事故?!ㄗh:★對目前使用的國產(chǎn)PT試劑的ISI值進行簡單的鑒別。2024/1/17141鑒別PT試劑ISI值的簡單方法用異常質(zhì)控血漿鑒別PT試劑真實ISI值的簡便方法PT的ISI值正常質(zhì)控血漿異常質(zhì)控血漿敏感性1.0-1.210.5-13.5(秒)30.0-44.0(秒)高1.2-1.410.5-13.5(秒)26.0-30.0(秒)較高1.4-1.610.5-13.5(秒)22.0-26.0(秒)中1.6以上10.5-13.5(秒)18.0-22.0(秒)低2024/1/17151選擇PT試劑的要點(1)※(敏感度)(ISI值):ISI=1.0-1.2最好ISI=1.2-1.4一般ISI>1.6建議不予使用※對枸櫞酸濃度不敏感(3.2%或3.8%)※對凝血因子的敏感2024/1/17161選擇PT試劑的要點(2)◆試劑的成分來源:重組組織因子(基因工程方法)最好如長島液體PT試劑、DadeBehringPT試劑(Inovin)人胚胎組織:如DadeBehringPT試劑新鮮兔腦粉:如庫爾特PT試劑、StagoPT試劑陳舊兔腦粉:大多數(shù)國產(chǎn)的PT凍干試劑(ISI>1.6)◆開瓶后的穩(wěn)定性:長島液體PT試劑:開瓶后,37℃,穩(wěn)定30天以上。其他PT試劑:開瓶后,37℃,穩(wěn)定8小時。2024/1/17171PT檢測的結(jié)果評估

美國CLIA-88提出PT指標(biāo)的允許誤差有國際標(biāo)準(zhǔn),以INR表示;不同廠家根據(jù)自己的試劑給出一個正常范圍,一般正常范圍為:10.5-14.5秒;同一個標(biāo)本用不同試劑,在同一儀器上檢測,INR值應(yīng)相同。PT總允許誤(Tea)靶值±15%精密度(CV%)批內(nèi)變異<2同一天批間變異<3天間變異<42024/1/17181APTT檢測臨床應(yīng)用(2)

監(jiān)控靜脈滴注肝素抗凝治療的病人的凝血功能臨床上對靜脈滴注肝素抗凝治療的病人必須進行APTT檢測以便監(jiān)控。APTT的值應(yīng)控制在1.5-2.5x基礎(chǔ)秒數(shù)基礎(chǔ)秒數(shù)---肝素治療前的APTT秒數(shù);不同的APTT試劑,對肝素敏感性不同,建議使用對肝素敏感的APTT—白陶土試劑。2024/1/17191國內(nèi)APTT白陶土試劑現(xiàn)狀※國內(nèi)市場(除長島能提供液體型APTT白陶土試劑外)尚無穩(wěn)定的APTT白陶土試劑?!L島液體型APTT白陶土優(yōu)勢:對肝素敏感;非常穩(wěn)定:常溫保存,穩(wěn)定30天以上;技術(shù)國際領(lǐng)先。2024/1/17201不同APTT試劑,對肝素敏感性不同2024/1/17211選擇APTT試劑的要點對肝素的敏感性,對肝素越敏感越好-APTT白陶土首選;對凝血因子的敏感性;對LA-抗凝物的敏感性開瓶后的穩(wěn)定性長島液體型APTT白陶土試劑:37℃,30天以上;庫爾特APTT試劑:37℃,3天左右;StagoAPTT試劑:37℃,3天左右。2024/1/17221APTT檢測的結(jié)果評估

美國CLIA-88提出APTT指標(biāo)的允許誤差沒有國際標(biāo)準(zhǔn);生產(chǎn)廠家根據(jù)自己的試劑給出一個正常范圍值;各個廠家不同試劑的正常范圍值均不相同;評價時,應(yīng)以超過正常對照的10秒視為異常。APTT總允許誤(Tea)靶值±15%

精密度(CV%)批內(nèi)變異<3同一天批間變異<3天間變異<32024/1/17231凝血酶時間測定ThrombinTime(TT)ThrombinTime(TT)測定原理原理TT試劑(凝血酶)纖維蛋白原(血漿)纖維蛋白2024/1/17241TT檢測臨床應(yīng)用2024/1/17251選擇TT試劑的要點開平后的穩(wěn)定型長島液體TT試劑,37℃穩(wěn)定30天以上建議使用長島液體試劑,無需復(fù)溶,使用方便,測值穩(wěn)定2024/1/17261TT檢測的結(jié)果評估沒有國際標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)廠家根據(jù)自己的試劑給出一個正常范圍值檢測時,試劑與血漿的比例,不同廠家,所加比例有所不同,正常值范圍也不同,應(yīng)以說明書為準(zhǔn)2024/1/17271纖維蛋白原測定Fibrinogen纖維蛋白原含量測定(Fib)的原理原理過量凝血酶纖維蛋白原纖維蛋白凝固其凝固時間的長短與纖維蛋白原量呈反比關(guān)系2024/1/17281纖維蛋白原含量測定(Fib)-直接法標(biāo)準(zhǔn)曲線制備取已知靶值纖維蛋白原參比血漿,用緩沖液稀釋成不同濃度,測定各濃度的凝固時間。然后在雙對數(shù)紙上作圖,橫坐標(biāo)為濃度,縱坐標(biāo)為凝固時間,應(yīng)為一直線。樣品測定1/10稀釋血漿(1份血漿+九份緩沖液)測得凝固時間,在曲線上從縱坐標(biāo)上找出凝固時間,從此點畫一平行于橫坐標(biāo)的直線與曲線相交,此交點垂直于橫坐標(biāo)的交點,此即為該樣的Fib濃度。2024/1/17291纖維蛋白原含量測定(Fib)--衍算法PT衍算Fib也稱間接法測定Fib(Derived)。具體方法是,對標(biāo)本進行PT測定的同時,即能得出Fib的含量。測定時不需用Fib的試劑(凝血酶試劑),只用PT試劑。

PT衍算Fib在測定前也需先定標(biāo),一般是用Fib含量準(zhǔn)確性的質(zhì)控血漿,用生理鹽水進行稀釋(如100%,75%,50%,25%)得到不同濃度的Fib的標(biāo)準(zhǔn)系列,再對其進行PT的凝固時間測定及△E(光密度變化)測定,然后把Fib濃度含量降低,其凝固的OD值也會降低,并呈線性相關(guān),以此達到Fib定量的目的。2024/1/17301有關(guān)PT衍算Fib應(yīng)避免的誤解:誤區(qū)一:PT衍算Fib是通過PT結(jié)果“算”出來的。實際上是依據(jù)不同量Fib凝塊光密度不同,而測定出來的。誤區(qū)二:衍算時PT結(jié)果一定與法Fib含量相關(guān)。其實有的樣本PT正常但Fib可能不正常,或者Fib正常的標(biāo)本PT有可能不正常。誤區(qū)三:PT衍算Fib方法簡簡便,準(zhǔn)確。實際上,超過正常Fib含量的標(biāo)本,誤差很大。PT衍算法不準(zhǔn)確,估算值,國外已淘汰2024/1/17311選擇Fib的要點標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性:r>0.995開平后試劑的穩(wěn)定型:長島液體Fib試劑:37℃,穩(wěn)定20天以上;其他國產(chǎn)Fib凍干粉試劑:37℃,穩(wěn)定24小時。2024/1/17321Fib檢測的注意點盡量不用衍算法,不準(zhǔn)確;標(biāo)本中纖維蛋白原含量如超出所用所用試劑的線性范圍,必須作適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M行測定,不然對結(jié)果影響較大。當(dāng)血漿中有肝素或纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)時,會導(dǎo)致測值偏低。2024/1/173312024/1/17341Fib檢測的結(jié)果評估

美國CLIA-88提出Fib指標(biāo)的允許誤差為血凝四項檢測中的定量檢測;有國際標(biāo)準(zhǔn):WHO標(biāo)準(zhǔn)品98/612;可追溯性正常值范圍:2-4g/L;美國臨床實驗室改進修正案CLIA-88允許誤差范圍為20%。Fib總允許誤(Tea)靶值±15%精密度(CV%)批內(nèi)變異<2同一天批間變異<3天間變異<42024/1/17351血凝試劑常見的問題APTT、PT延長及縮短TT延長Fib含量過高及過低2024/1/17361標(biāo)本的原因抗凝劑與血液比例不對,如大于1:9;抗凝劑配制錯誤,如枸櫞酸鈉含2個結(jié)晶水仍按3.8%配制;抗凝劑應(yīng)用枸櫞酸鈉溶液,不能用干燥品,或其他抗凝劑;抗凝劑與血漿混合時搖勻過于劇烈,使凝血因子被破壞;血細胞比容積大于55%,抗凝劑比例沒變(仍按1:9);標(biāo)本陳舊,超過2小時甚至更長;口服抗凝藥或凝血因子異常;采血不順利,有郁滯現(xiàn)象;標(biāo)本運輸未加蓋,致使CO2升高PH升高;血漿分離應(yīng)3000rpm,10分鐘;臨產(chǎn)婦FBG含量較高,可能會超過正常值;質(zhì)控標(biāo)本2-8℃超過8小時或失效;2024/1/173712024/1/17381復(fù)溶用蒸餾水及材料的原因復(fù)溶蒸餾水質(zhì)量差;未用塑料或硅化玻璃管;實驗器材污染;儀器本身有問題,如靈敏度不夠(儀器可用手工操作排除、或凝固終點不對(一般凝固終點在50%有時需根據(jù)試劑不同作相應(yīng)調(diào)整到30%甚至20%。2024/1/17391試劑本身的原因復(fù)溶后試劑反復(fù)使用。如整瓶復(fù)溶好的試劑放入預(yù)溫槽預(yù)溫,測試完成后,剩余放回冰箱。反復(fù)如此試劑在37℃的時間過長;復(fù)溶后試劑使用時間過長;試劑儲存、運輸溫度過高,未注意冷藏運輸。中間公司未換冰袋;試劑超過有效期;購入冒牌試劑;質(zhì)控品過期2024/1/17401操作的原因APTT、PT延長APTT試劑與標(biāo)本預(yù)溫少于3分鐘,白陶土最好5分鐘;APTT(白)是混濁液,加前未混勻;實驗測試溫度(標(biāo)本、試劑)未預(yù)溫至36.5-38℃的范圍;PT血漿與試劑比例不對;試劑位誤攪拌功能的血凝儀(CA-500)APTT要用鞣化酸;血凝儀能用半量的最好用半量否則試劑和血漿不易混勻;槍頭和取液器之間要擰緊,不能有空隙。2024/1/17411操作的原因(2)TT延長血漿與試劑比例不對;不同類別專用試劑參考正常值不同(DB專用為14-21秒,太平洋為8秒-14秒);可能出現(xiàn)對應(yīng)錯誤;試劑不應(yīng)預(yù)溫而預(yù)溫時間較長。2024/1/17421操作原因(3)Fib含量過高或過低換新試劑或新批號試劑未重新定標(biāo);雖然重新定標(biāo),但新定標(biāo)曲線未輸入儀器,原標(biāo)準(zhǔn)曲線未被修改。定標(biāo)時,畫標(biāo)準(zhǔn)曲線,橫坐標(biāo)濃度計算錯誤。2024/1/17431Traceability(溯源性)的定義定義:溯源性是測量結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)的值通過連續(xù)的比較鏈與一定的參考標(biāo)準(zhǔn)相聯(lián)系的屬性,參考標(biāo)準(zhǔn)通常是國家或國際標(biāo)準(zhǔn),比較鏈中的每一步比較都有給定的不確定度。2024/1/17441溯源性-定量檢驗結(jié)果的描述溯源性主要用于定量檢驗結(jié)果的描述,不適用于定性檢驗結(jié)果。血凝四項中,只有Fib檢測是定量檢驗,所以Fib檢測具有溯源性。2024/1/17451長島Fib檢測試劑的溯源性以WHO國際標(biāo)準(zhǔn)品編號98/612的纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)品為參考,我們對長島FIB試劑盒進行準(zhǔn)確性研究實驗。連續(xù)三批小量生產(chǎn)FIB試劑盒(批號:020708、020805、0208260),每批隨機抽取一盒FIB試劑盒,利用CA-530血凝儀(日本Sysmex公司產(chǎn)品)測定WHO98/612纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的纖維蛋白原含量和,所得結(jié)果在WHO98/612纖維蛋白原標(biāo)定含量的±10%范圍內(nèi)。2024/1/17461對可追溯性理解的繆誤部分人認為進口儀器一定要配原裝試劑,才具有可追溯性-這其實是錯誤的理解。由于經(jīng)濟上或其他原因選擇不配套的試劑,認為只要說明校準(zhǔn)品的來源,經(jīng)過實驗標(biāo)明該檢測系統(tǒng)的不精密度、不準(zhǔn)確度、病人結(jié)果可報告范圍、分析靈敏度、分析特異性、參考范圍,就具備溯源性。2024/1/174712024/1/17481長島血凝試劑長島公司生產(chǎn)的各類血凝儀專用試劑所組成的新的檢測系統(tǒng)(原儀器、方法、檢測程序加上長島公司的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品),對原系統(tǒng)進行校準(zhǔn),從而使病人樣本的檢測結(jié)果和原配套檢測系統(tǒng)的病人樣品結(jié)果具有可比性。2024/1/17491長島血凝試劑特點血凝四項(PT、APTT、TT、Fib)全套為液體試劑;測值穩(wěn)定;PT試劑ISI值接近1.0;APTT白陶土-對肝素敏感;能提供各類全自動血凝儀配套試劑。2024/1/17501全套液體試劑

長島血凝四項試劑,全部為液體試劑液體試劑,無需復(fù)溶,避免了因復(fù)溶用水質(zhì)量不合格及復(fù)溶體積不準(zhǔn)確而造成的測定偏差;液體試劑,開瓶即用,免去復(fù)溶步驟,使得檢測更為簡便。2024/1/17511出眾的試劑穩(wěn)定性長島血凝試劑,采用專利穩(wěn)定系統(tǒng),擁有異常出眾的穩(wěn)定性。長島液體PT試劑37℃30天以上長島液體APTT試劑37℃30天以上長島液體TT試劑37℃30天以上長島Fib試劑37℃20天以上

試劑一經(jīng)開啟使用,無需再從試劑位拿出來放回冰箱,直到用完,測值非常穩(wěn)定,使用極為簡單。2024/1/17521ISI值接近1.0的PT試劑長島液體PT試劑,ISI值接近1.0;長島PT試劑的成分來源為:重組組織因子(基因工程方法),技術(shù)國際領(lǐng)先。2024/1/17531對肝素敏感的APTT白陶土試劑長島液體APTT白陶土對肝素敏感;國內(nèi)市場上唯一能提供穩(wěn)定的液體APTT白陶土試劑的生產(chǎn)廠商。2024/1/17541各類全自動血凝儀配套試劑-日本東亞CA

長島提供日本東亞CA血凝儀專用試劑性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定性(37℃條件下)ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.04人胚胎組織性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定性(37℃條件下)長島APTT鞣化酸試劑液體30天以上原裝APTT鞣化酸試劑液體30天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝Fib試劑凍干粉3天左右2024/1/17551各類全自動血凝儀配套試劑-美國庫爾特ACL

長島提供美國庫爾特ACL血凝儀專用試劑性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定性(37℃條件下)ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.36兔腦粉性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定性(37℃條件下)長島APTT白陶土試劑液體30天以上原裝APTT試劑凍干粉3天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝Fib試劑凍干粉3天左右2024/1/17561各類全自動血凝儀配套試劑-德國BE

長島提供德國BE血凝儀專用試劑性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定性(37℃條件下)ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.1兔腦粉性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定性(37℃條件下)長島APTT白陶土/鞣化酸試劑液體30天以上原裝APTT試劑凍干粉3天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝Fib試劑凍干粉3天左右2024/1/17571各類全自動血凝儀配套試劑-法國思達高STA

長島提供法國思達高STAGO血凝儀專用試劑性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定型(37℃條件下)ISI值試劑成分來源長島PT試劑液體30天以上1.02重組組織因子原裝PT試劑凍干粉8小時1.32兔腦粉性狀開瓶,復(fù)溶后的穩(wěn)定性(37℃條件下)長島APTT白陶土試劑液體30天以上原裝APTT試劑凍干粉3天左右長島TT試劑液體30天以上原裝TT試劑凍干粉3天左右長島Fib試劑液體20天以上原裝試劑凍干粉3天左右2024/1/17581血凝儀介紹-分類(1)按自動化程度分類半自動血凝儀-一般用于血凝四項的常規(guī)測定。其一般構(gòu)成是:樣品試劑預(yù)溫槽、加樣器、檢測系統(tǒng)(光學(xué),電磁)、微機系統(tǒng)。一般是手工加樣試劑。全自動血凝儀-基本配置是主機(樣品傳送及處理裝置,試劑冷藏位,樣品及試劑分配系統(tǒng),檢測系統(tǒng)),電子計算機,輸出設(shè)備及附件。無需人工加樣。按血凝儀的檢測原理分類磁珠法(粘度法)光學(xué)發(fā)-光學(xué)法靈敏度高,重復(fù)性好,而且易于自動化,目前市場銷售的大部分血凝儀采用此原理。2024/1/17591血凝儀介紹-分類磁珠法(粘度法):采用電磁感應(yīng)原理,在待測血漿中放入磁珠,在電磁場的作用下,磁珠會轉(zhuǎn)動。當(dāng)血漿中形成凝塊后,由于阻力,磁珠轉(zhuǎn)動發(fā)生變化,檢測此變化即能確定凝固終點。此法具備精度高,可防止高血脂的影響的優(yōu)點,但易受血漿粘度的影響。光學(xué)法透射比濁法:運用樣本吸光度的變化判斷凝固終點具體有兩種:吸光度增加為終點。吸光度降低為終點。散射比濁法:檢測原理與透射法基本相同,只是運用樣本散射光密度改變判斷凝固終點。2024/1/17601各類血凝儀的原理及特點

--主要進口血凝儀名稱原理所用試劑血凝儀主要特點東亞系列半自動CA-50CA-100散射比濁+百分比凝固時間檢測DADE試劑APTT(僅用鞣化酸APTT)TT(血漿:試劑為1:2)四個通道四條檢測光路CA100F

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