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文檔簡介

地中海貧血基因檢測試劑結果判讀亞能生物技術(深圳)有限公司1.α-地中海貧血基因檢測試劑結果判讀基因型臨床表現型臨床相關-α3.7/αα(右缺失)-α4.2/αα(左缺失)αCSα/αααQSα/αα

αWSα/αα靜止型l病理生理改變非常輕微,臨床一般無癥狀。紅細胞形態(tài)正常,出生時臍帶血中HbBart's含量為0.01~0.02但3個月后即消失(少部分可見MCV<79fl,MCH<27pg,紅細胞脆性試驗陽性)。

l遺傳學:父母中至少一方為α地中海貧血。

l左缺失涉及整個α2-珠蛋白基因缺失,要比右缺失貧血程度要嚴重。

l輕型地貧無需特殊治療。αα/--SEA

-α3.7/-α3.7

-α3.7/-α4.2

-α4.2/-α4.2標準型l

尚能代償性地合成相當數量的α鏈,臨床上亦無癥狀或有輕度貧血癥狀,肝脾無腫大。紅細胞形態(tài)有輕度改變,血液學檢查可呈現平均紅細胞體積和平均紅細胞血紅蛋白的降低(如大小不等、中央淺染、異形等;紅紐胞滲透脆性降低;變性珠蛋白小體陽性;HbA2和HbF含量正常或稍低?;純耗氀狧bBart's含量為0.034~0.140,于生后6個月時完全消失。)

l

實驗室檢查:出生時Hb

Bart’s可占5%~15%,幾個月后消失,紅細胞有輕度形態(tài)改變,可見靶形紅細胞,血紅蛋白稍降低或正常,MCV<79fl,MCH<27pg,紅細胞脆性試驗陽性。

l

遺傳學:父母一方或雙方為α地中海貧血。

l一般不需要治療。-α3.7/--SEA

-α4.2/--SEA

αTα/--SEA(點突變:HbCS,HbQS,HbWS等)HbH病l慢性溶血性貧血,此型臨床表現差異較大,出現貧血的時間和貧血輕重不一(少數患者血紅蛋白可低于60g/L或高于100g/L)。大多在嬰兒期以后逐漸出現貧血,疲乏無力,肝脾大,輕度黃疽;年齡較大患者可出現類似重型β地貧的特殊面容。合并呼吸道感染或服用氧化性藥物,抗瘧藥物等可誘發(fā)急性溶血而加重貧血,甚至發(fā)生溶血危象。

l實驗室檢查:紅細胞滲透脆性減低;變性珠蛋白小體陽性;HbA2及HbF含量正常。紅細胞形態(tài)基本同重型β地中海貧血所見,紅細胞內可見包涵體。骨髓中紅細胞系統(tǒng)增生極度活躍。血紅蛋白電泳出現HbH區(qū)帶,HbH成分占5%~30%(個別患者HbH成分可小于5%或高達40%),也可出現少量HbBart’s(出生時Hb

Bart’s可達15%以上)。隨年齡增長,HbH逐漸取代HbBart's,其含量約為0.024~0.44。包涵體生成試驗陽性。非缺失型血紅蛋白H病可出現微量Hb

Constant

Spring。

l遺傳學:父母雙方均為α地中海貧血。--/--

Hb

Bart’s胎兒水腫綜合癥l胎兒常于30~40周時流產,死胎或娩出后半小時內死亡,胎兒呈重度貧血,黃疽,水腫,肝脾腫大,腹水,胸水。體腔積液,胎盤巨大且質脆。孕婦可有妊娠高血壓綜合征。

l實驗室檢查:臍血血紅蛋白明顯降低,紅細胞中心淺染、形態(tài)不一、大小不均,有核紅細胞顯著增多,靶形紅細胞增多。血紅蛋白電泳:HbBart’s成分>70%,少量HbPortland,可出現微量HbH。無HbA、HbA2和HbF。2.β-地中海貧血基因檢測試劑結果判讀位點名稱檢測的突變類型TypeofThalassemiaCD41-42-TTCTβ0CD43G→Tβ0IVS-Ⅱ-654C→Tβ+-28A→Gβ+-29A→Gβ+-30T→Cβ0orunclear-32C→Aβ+CD71-72+Aβ0βEGAG→AAGβ+位點名稱檢測的突變類型TypeofThalassemiaCD17A→Tβ0CD31-Cβ0CD14-15+Gβ0CD27-28+Cβ0IVS-Ⅰ-1G→A、G→Tβ0IVS-Ⅰ-5G→Cβ+CAP+1A→Cβ+InitiationcodonATG→AGGβ0

(4)靜止型地貧的分子產前篩查:靜止型α-地貧基因(-α3.7和-α4.2)也是本地區(qū)常見的α-地貧類型,-α3.7和-α4.2這二種靜止型地貧基因與東南亞型缺失—SEA基因組合可導致嚴重影響個體生存質量的HbH病。HbH病高風險家庭的遺傳咨詢和診斷是不可忽視。由于在成人血樣中缺乏可靠的針對-α3.7和-α4.2這二種靜止型地貧的表型檢測指標,需采用基于PCR的DNA分子診斷技術進行產前篩查。

(5)其他類型血紅蛋白病的診斷:目前已知的本地區(qū)其他類型血紅蛋白病主要為中國型βd-地貧和東南亞型HPFH,二者均為β-珠蛋白基因大片段缺失所致,推薦采用基于PCR的直接擴增缺失基因斷裂點的方法對其進行分子診斷。二種常見導致地貧的異常Hb(HbQ和HbE)基因的分子診斷方法與上述α-或β-地貧的常規(guī)方法相同,必要時,可采用DNA序列分析技術檢測樣品的基因突變。今后在有導致α-或β-地貧的新突變發(fā)現時,可根據技術研究進展增補適宜的診斷技術。

2、地貧產前診斷指征和時機。

(1)地貧產前診斷指征:

①曾生育過重型或中間型α或β地貧患兒的夫婦;

②夫婦雙方均為α地貧攜帶者;夫婦一方為α地貧攜帶者,配偶為β地貧復合α地貧攜帶者;

③夫婦雙方均為β地貧攜帶者。

(2)產前診斷的時機:

產前診斷宜在孕24周以前進行。早孕絨毛采樣檢查宜在孕8周~11周進行;羊水穿刺檢查宜在孕16周~21周進行;臍靜脈穿刺檢查宜在孕18周~24周進行。

3、醫(yī)學診斷報告。

產前診斷報告包括分子實驗室檢測結果和遺傳咨詢指導意見兩部分。分子實驗室檢測結果應包括所采用的技術、檢測的范圍、α-或β-地貧或其他類型地貧(如中國型βd-地貧和東南亞型HPFH)突變基因型。遺傳咨詢指導應包括對診斷結果的醫(yī)學指導意見,以及對結果不確定性的解釋等。

實驗室檢測結果由實驗室操作者填寫并簽名、經實驗室主管復核后才能發(fā)出。產前診斷報告由2名以上經資格認定的執(zhí)業(yè)醫(yī)師簽發(fā)。

4、地貧遺傳咨詢。

地貧產前診斷須在當事人接受遺傳咨詢和知情同意的情況下實施。對胎兒確診為重型α-或β-地貧的,應由遺傳咨詢醫(yī)師向當事人提供遺傳咨詢,在當事人知情同意和自主選擇的情況下,可以終止妊娠。

5、地貧產前診斷隨訪。

對進行了產前診斷的孕婦應進行隨訪。在條件許可時,應盡可能采集到胎兒血樣或組織,用于進一步驗證產前診斷的結果。

6、質量控制體系。

(1)人員及實驗室資質:分子診斷的技術人員必須取得相應的技術資質;地貧分子診斷實驗室必須取得相應的從業(yè)技術資質;

(2)試劑規(guī)格及使用:使用的試劑須為國家或地方政府醫(yī)用試劑主管部門準許的臨床生化檢驗用正式產品(含國產和進口試劑產品)。購置試劑要記錄如下信息:購買日期,批號,數量,有效期,驗收人,保存條件,存放地點等;

(3)質量控制體系及其制度:分子診斷的操作須在符合規(guī)定的分子診斷實驗室實施,并嚴格執(zhí)行PCR擴增試驗的各項防污染規(guī)定,必要時,需采用基于微衛(wèi)星分析的分子診斷技術進行個體鑒定,以確認產前診斷樣品是否受到污染。力求操作程序標準化,制訂合理的技術實施方案,每個樣品需有二次獨立的檢測,只有在二次檢測結果完全一致時方可給出診斷報告。嚴格執(zhí)行技術人員操作檢測和復核的簽名制度。地貧診斷的重要原始樣品必須保存至少一年,以備復查。三、地貧產前篩查和產前診斷工作流程圖血液學參數陽性者(MCV<82fL和/或MCH<27pg)血液學參數陽性者(MCV<82fL和/或MCH<27pg)常規(guī)產檢的孕婦Hb電泳分析正常β地貧或β地貧復合α地貧HbA2降低或臨值HbA2降低δβ地貧或HPFH等正常血清鐵測定HbF升高懷疑α-地貧β及α地貧基因配偶進行血紅蛋白電泳分析夫婦雙方均為同類型地貧(α或β)高風險胎兒產前基因診斷正?;蜉p型地貧胎兒遺傳咨詢建議繼續(xù)妊娠遺傳咨詢可以終止妊娠重型地貧胎兒【血紅蛋白分子遺傳學】正常人血紅蛋白(Hb)有三種:HbA(α2β2)、HbA2(α2δ2)、HbF(α2γ2)。血紅蛋白分子是由珠蛋白+血紅素組成,珠蛋白由兩對(4條)肽鏈構成,即:HbA由一對α(2α)和一對β(2β)肽鏈構成HbA(α2β2);HbA2由一對α(2α)和一對δ(2δ)肽鏈構成HbA2(α2δ2);HbF由一對α(2α)和一對γ(2γ)肽鏈構成HbF(α2γ2)。肽鏈基因位點:4種肽鏈(α、β、γ、δ)的合成受DNA上相應的α、β、γ、δ珠蛋白肽鏈基因操縱、控制與調節(jié)。α珠蛋白肽鏈基因有4個,定位于16號染色體短臂最末端(16P13.3)。β珠蛋白肽鏈基因有2個,定位于11號染色體短臂1區(qū)2帶(11P12)。正常人Hb成分與含量:正常人Hb主要為HbA,約占Hb總量的95%;其次為HbA2,占2~3%;HbF是胎兒期Hb的主要成分,出生時占70%左右,2個月后降至50%,1歲時不超過5%,2歲時降至成人水平,<3%。【地貧分子病理學】根據珠蛋白肽鏈基因(簡稱α基因或β基因)缺失、缺陷或基因突變和珠蛋白肽鏈合成障礙的不同,可將地貧分為α型、β型、δβ型和δ型四種,其中以α型和β型地貧較為常見。地貧是組成血紅蛋白(Hb)分子的α或β珠蛋白肽鏈量的異常;α或β珠蛋白肽鏈基因缺失或基因突變,結果使α或β珠蛋白肽鏈生成減少或缺乏,而形成珠蛋白生成障礙性貧血即地中海貧血。α地貧是由于α珠蛋白肽鏈合成不足的結果,β地貧是由于β珠蛋白肽鏈合成不足的結果。α地貧:多數患兒由于α基因缺失,使α肽鏈合成減少,以致含有α肽鏈的HbA、HbA2、HbF合成減少。但少數患兒并無α基因缺失,而是由于α基因發(fā)生突變或數個堿基缺失,影響了RNA加工、mRNA翻譯或導致合成的α珠蛋白肽鏈不穩(wěn)定,最終引起α肽鏈缺乏。在α肽鏈缺乏的情況下,多余的β、γ肽鏈聚合而成β4(HbH)和γ4(HbBart’s)。其中HbH為最常見,HbH是一種不隱定Hb,易在紅細胞內自行變性而沉淀形成包涵體與Heinz小體,導致紅細胞壽命縮短而發(fā)生溶血。β地貧:本病的分子病理相當復雜,已知有100多種的β基因突變可導致本病。這些基因突變大致可劃分為5類:⑴基因片段缺失:導致β基因轉錄異?;颚码逆満铣僧惓!"妻D錄突變:單一堿基的點突變發(fā)生在β基因轉錄調控區(qū)內,降低β基因的轉錄,導致β肽鏈合成不足。⑶加工突變:即點突變發(fā)生在影響mRNA加工形成的區(qū)域,導致β肽鏈合成缺如或不足。⑷終止密碼突變:點突變發(fā)生在翻譯終止密碼上,形成異常mRNA,導致β肽鏈合成障礙。⑸移碼突變:一個或數個(非3個或3的倍數)堿基的缺失或插入,使β基因堿基排列發(fā)生框架移位,導致不穩(wěn)定β肽鏈生成而β肽鏈缺乏。由于β基因缺失、缺陷或基因突變,使β肽鏈合成減少或缺乏,以致含有β肽鏈的HbA合成減少,相對較多的α肽鏈與γ或δ肽鏈結合,使HbF(α2γ2)與HbA2(α2δ2)合成增多。由于β肽鏈的不足或缺失,未能與β肽鏈配對的α肽鏈是不穩(wěn)定的,多于的α肽鏈由于其性能不隱定,在成熟紅細胞和幼紅細胞內發(fā)生沉淀而形成α包涵體,有α包涵體的幼紅細胞大部分過早地在骨髓內破壞(稱為無效性紅細胞生成與原位性溶血);含有α包涵體的成熟紅細胞,其胞膜變僵硬,通過脾臟時,易被破壞,造成紅細胞壽命縮短,因而發(fā)生貧血。骨髓紅細胞系統(tǒng)呈代償性增生,結果形成紅髓增多和骨皮質變薄等病理變化。由于珠蛋白的合成減少,鐵質不能被利用,血紅蛋白形成障礙,造成小細胞低色性貧血。因鐵質的利用障礙,使骨髓儲存鐵和鐵粒幼紅細胞增多,加之由于大量紅細胞破壞,使體內鐵質增加,最終可導致含鐵血黃沉著癥?!镜刎氝z傳與分型】地貧遺傳:地貧為一種常染色體不完全顯性遺傳,不同地貧基因組合,其子代可發(fā)生不同類型地貧。α基因共有4個,分別位于兩條第16號染體上,若父母分別為α2地貧(缺失一個α基因,基因型為α.α/-th.α)和α1地貧(缺失2個α基因,基因型為α.α/-th.-th或α.-th/α.-th),那么其子女就有可能為HbH病缺少3個α基因(α.-th/-th.-th)。如果胎兒父母均為α1地貧(-th.-th/α.α),則胎兒有1/4的機會為α1地貧純合子(4個α基因缺失,-th.-th/-th.-th),稱為血紅蛋白Bart’s胎兒水腫綜合征。β基因有2個,分別位于兩條第11號染色體上,β基因突變類型繁多,已發(fā)現有170多種(見地貧基因分析部分)。根據β肽鏈合成受抑制的情況,一般分為β0和β+地貧基因,其不同組合,形成各種類型的β地貧(如β0/β0、β0/β+/、β+/β+、β0/βA、β+/βA等)。地貧分型:⑴α地貧:α肽鏈減少(HbA↓、HbF↓、HbA2↓),β肽鏈過多→β4(HbH),γ肽鏈過多→γ4(HbBart’s)。正常α基因有4個,根據α基因缺失數目,α地貧分為4型:①靜止型α地貧(α2地貧,1個α基因缺失):無臨床表現;臍血或出生時血液中HbBart’s約1~2%,3個月內消失。②標準型α地貧(α1地貧,2個α基因缺失):臨床癥狀與血象有輕微改變,MCV、MCH、MCHC有輕度降低、紅細胞大小不等、偶見靶形,可有包涵體與Heinz小體,臍血或出生時血中HbBart’s約3.4~14.0%。③HbH?。?個α基因缺失或缺陷):常在半歲以后出現貧血與肝脾腫大,血中有HbH與HbBart’s;如伴有α基因的終止密碼突變(UAA→CAA),α肽鏈由141個氨基酸延長至172個氨基酸與β肽鏈結合形成的血紅蛋白稱為CS(Constant-Spring)Hb〔基因型為αCS2/β2〕;CS-Hb與HbH復合稱為CS型HbH病。④血紅蛋白Bart’s胎兒水腫綜合癥(4個α基因全缺失):臍血或血中HbBart

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