GC色譜柱的故障診斷與維護(hù)

色譜柱的缺點(diǎn)診斷與維護(hù)液相色譜柱八方世紀(jì)科技AuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)HLC與GC色譜柱問題用戶調(diào)查

色譜柱問題百分率BackPressure,PluggedFrits24%PoorReproducibility16SampleRecovery14LossofResolution13Instability11Voids8.1Leaks,Fittings4.8pHRange2.0LowPlateCount2.0ColumnOverload2.0Cost1.7Miscellaneous15引見提綱I.常見問題，景象及排除方案-基線漂移/噪音-峰型-壓力變化-保管漂移II.日常維護(hù)/良好的實(shí)際-在線安裝-樣品制備-操作的限制III.再生/維修已損壞的色譜柱-物理方法-化學(xué)方法I.常見問題基線噪音能夠的緣由：流動池臟檢測器燈有問題假設(shè)是周期性的，那么來源于泵的脈沖溫度對檢測器的影響氣泡經(jīng)過檢測器Time(min.)基線漂移梯度洗脫溫度不穩(wěn)定(示差檢測器〕流動相中有污染物柱中的流動相沒有平衡體系中有污染物流出能夠的緣由：鬼峰鬼峰——即使不樣也會出現(xiàn)的峰20%-100%MeOH沒有進(jìn)樣601530150371517問題1-流動相臟問題2-樣品過量(也能夠是回收率太差)峰型雙峰柱塌陷正常峰雙峰柱中有死體積過濾片部分堵塞只需一個雙峰——組分的共洗脫能夠緣由：樣品與溶劑不匹配峰型一切的峰都展寬柱效降低——柱死體積大進(jìn)樣量/質(zhì)量高捻度流動相部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品——蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動相不匹配峰型拖尾峰對稱性>1.2NormalTailingNormalTailing緣由：部分峰拖尾二次保管效應(yīng)——?dú)埩艄璐蓟姆错懶》寰o跟在大峰的后面流出柱頭有污染金屬一切峰拖尾額外的柱效應(yīng)柱損壞不適當(dāng)?shù)臉悠妨?溶劑峰型NormalFronting前伸峰不對稱性<0.9能夠的緣由柱過載在大峰前，有小峰流出樣品溶劑不適當(dāng)柱死體積過濾片部分堵塞峰型負(fù)峰正常峰負(fù)峰緣由樣品的吸收比流動相的吸收值低當(dāng)樣品組分經(jīng)過色譜柱時突破了原來的平衡用示差檢測器時是正常的寬峰柱外體積添加*在進(jìn)樣口到柱或柱到檢測器之間，運(yùn)用細(xì)的短的銜接納*保證一切的管路接頭都運(yùn)用正確*用小體積檢測池*減少進(jìn)樣量柱外體積MinimizeLengthandDiameterofTubingDoNotVolumeOverloadInjectionUseAppropriateVolumeFlowCellE.C.V=Vinj.+Vtubing+VcellHPLC運(yùn)用的接頭無死體積接頭不適用的接頭HPLC中運(yùn)用的柱接頭0.090in.0.130in.0.090in.0.170in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090in.0.080in.TroubleshootingLCFittings,PartII.J.W.DolanandP.Upchurch.LC/GCMagazine6:788(1988)0

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1011柱外體積10μL20μLTime,min.2.1x150mmF=0.2mL/min.柱外體積效應(yīng)的影響(1ul進(jìn)樣)I.不進(jìn)樣時柱壓延續(xù)升高-泵密封墊-流動相有顆粒-流動相溶解性-流動相的不穩(wěn)定性(聚合)-構(gòu)成柱死體積(與運(yùn)用條件有關(guān))II.進(jìn)樣時壓力升高-樣品有顆粒-樣品在流動相中不溶-樣品組分與固定相不兼容壓力I.一切峰都向低保管值方向漂移〔酸、堿、中性化合物〕-鍵合相流失-流動相不穩(wěn)定(能夠性較小)-溶劑保送系統(tǒng)(流速變化)II.一切峰都向高保管值方向漂移-在水/有機(jī)溶劑的混合體系中，有機(jī)溶劑含量減少-柱改動(能夠性較小)-溶劑保送系統(tǒng)(流速變化)III.離子型化合物的色譜峰的保管值漂移-流動相中揮發(fā)性組分損失(離子強(qiáng)度,pH漂移)-柱改動(鍵合相或污染)保管值漂移I.與流動相有關(guān)的問題-運(yùn)用新穎的流動相 ?pH ?電導(dǎo) ?色譜性能測試II.與色譜柱有關(guān)的問題-測試新柱-用規(guī)范的測試混合樣測試新柱-“清洗〞色譜柱后再測-思索樣品基質(zhì)與運(yùn)用條件對柱穩(wěn)定性的影響保管值漂移良好的柱運(yùn)用規(guī)范運(yùn)用新穎的水溶液，并思索運(yùn)用生物穩(wěn)定劑〔如疊氮化鈉〕儲存色譜柱時，應(yīng)沖凈緩沖言，并用有機(jī)溶劑飽和色譜柱〔乙腈〕防止外力損傷色譜柱：彎曲、跌落或?qū)⒔宇^擰的過緊完全潤濕在運(yùn)輸中變干的色譜柱對含有保管性較強(qiáng)的雜質(zhì)組分的樣品要進(jìn)展預(yù)處置定期用強(qiáng)極性的溶劑清洗色譜柱去除柱填料的局限性了解溶劑對樣品的溶解性及分別的影響pH溫度化學(xué)兼容性在運(yùn)用前過濾溶劑預(yù)柱與維護(hù)柱從泵來的流動相預(yù)柱進(jìn)樣器維護(hù)柱分析柱到檢測器預(yù)柱對流動相而言維護(hù)柱對色譜柱而言StrippingorConcentratingColumnAuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)H帶可反復(fù)運(yùn)用接頭及完好維護(hù)柱的卡套柱無維護(hù)柱有維護(hù)柱帶Techtron維護(hù)柱的Zorbax卡套柱帶整體過濾片的Techtron維護(hù)柱min5101520253035mAU140142.5145147.5150152.5155157.5160min5101520253035mAU140142.5145147.5150152.5155157.5160BDSODSHypersil250-2mm有integratedGuardColumnBDSODSHypersil250-2mm沒有GuardColumn2mmID卡套柱有或無維護(hù)柱的比較制備樣品:流動相過濾樣品，以確保其不含有固體微粒用流動相或比流動相極性較弱的溶劑溶解樣品進(jìn)樣的樣品體積應(yīng)盡量小樣品不溶于流動相樣品溶于流動相真正的環(huán)境樣品樣品的溶解性溶劑強(qiáng)度體積效應(yīng)Contaminant微粒強(qiáng)保管的組分樣品制備方法的提高1.固相萃取〔SPE〕-硅膠基鍵合相種類全-可多次運(yùn)用的聚合物〔獨(dú)一的選擇性〕-自動化工藝-玻璃、Teflon基體適宜高靈敏度的任務(wù)-專業(yè)化，濫用藥物，兒茶酚胺、脫鹽、去金屬3.帶不同功能團(tuán)的過濾膜4.SPE薄膜2.屏蔽親水相/內(nèi)部多孔載體操作條件--流動相對柱壽命的影響*易水解的硅氧鍵普通柱穩(wěn)定鍵合柱低pH(1-3)-酸催化水解，鍵合相流失*H3O+操作條件--流動相對色譜柱壽命的影響鍵合相水解速度隨溫度的升高而加大StableBondCN(diisopropylpropylCN)ConventionalCN(dimethylpropylCN)LowpHeluentatelevatedtemperature(60C)在安裝柱前后測試壓力差假設(shè)柱壓力太高，反裝色譜柱，并用10-20倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，監(jiān)測壓力變化假設(shè)出現(xiàn)沉淀(如：蛋白凝聚、細(xì)胞物、聚合物)設(shè)法用相應(yīng)的可溶性溶劑，如0.1%TFA/80%乙腈,6M鹽酸胍,THF,HFIP假設(shè)仍無效，應(yīng)思索改換過濾片色譜柱的修復(fù)與再生--物理性阻塞ColumnInletFritCompressionFerruleColumnBodyFemaleEndFittingMaleEndFitting帶手套填料不能變干不要接觸色譜柱體加熱填料會被擠出不要擰的過緊色譜柱缺點(diǎn)診斷--改換進(jìn)樣口過濾片由于鍵合相的水解或硅膠的溶解而呵斥的色譜柱填料的變化是不可逆的由于污染而產(chǎn)生的色譜柱變化可以經(jīng)過適當(dāng)?shù)那逑词怪迯?fù)梯度洗脫的方式(水->強(qiáng)有機(jī)溶劑)通常最有效低pH流動相,如0.1%TFAor0.01MH3PO4,也是有效的升高溫度〔60-80℃〕色譜柱修復(fù)和再生--化學(xué)變化-I6M鹽酸胍、異硫氰酸胍、尿素等溶液可用于去除蛋白質(zhì)的堆積XDB,有機(jī)聚合物等填料可運(yùn)用高pH水溶液/有機(jī)溶液，如：0.01MNaOH50%異丙醇/水溶液，硅膠基質(zhì)應(yīng)盡量減少接觸時間(15-30min).色譜柱的修復(fù)和再生--化學(xué)變化-IIExample:4.6mmIDx15cmZorbax300SB-C18Flowrate:1mL/min;Temp:~80℃A:0.1%TFAinwaterB:0.1%TFAinacetonitrile100%Afor30min.;0-100%Bover30min.;Hold100%Bfor30min.,Returnto100%Ain