有助于改善睡眠檢驗(yàn)方法

六、有助于改善睡眠檢驗(yàn)方法1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物推薦用成年小鼠，單一性別，18－22克，每組10－15只。2劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對(duì)照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組。受試樣品給予時(shí)間30天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至45天。3實(shí)驗(yàn)方法3.1直接睡眠實(shí)驗(yàn)3.1.1操作步驟:觀察受試組動(dòng)物給予3個(gè)劑量的受試樣品，對(duì)照組給予同體積溶劑后，是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象。睡眠以翻正反射消失為指標(biāo)。當(dāng)小鼠置于背臥位時(shí)，能立即翻正身位。如超過30－60秒不能翻正者，即認(rèn)為翻正反射消失，進(jìn)入睡眠。翻正反射恢復(fù)即為動(dòng)物覺醒，翻正反射消失至恢復(fù)這段時(shí)間為動(dòng)物睡眠時(shí)間，記錄陰性對(duì)照組與受試樣品組入睡動(dòng)物數(shù)及睡眠時(shí)間。3.1.2數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定睡眠時(shí)間為計(jì)量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組與一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。入睡動(dòng)物數(shù)為計(jì)數(shù)資料，用2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組入睡動(dòng)物數(shù)及睡眠時(shí)間之間的差異，若入睡動(dòng)物數(shù)或睡眠時(shí)間增加有顯著性，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。3.2延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)3.2.1原理在戊巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上，觀察受試物是否能延長(zhǎng)睡眠時(shí)間，若睡眠時(shí)間延長(zhǎng)，則說(shuō)明受試物與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用。3.2.2試劑戊巴比妥鈉（用前新鮮配制）3.2.3操作步驟做正式實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定使動(dòng)物100%入睡，但又不使睡眠時(shí)間過長(zhǎng)的戊巴比妥鈉劑量（30-60mg/kgBW用此劑量正式實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物末次給予溶劑及不同劑量受試樣品后，出現(xiàn)峰作用前10－15分鐘，給各組動(dòng)物腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.2mL/20g，以翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試樣品能否延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間。3.2.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組睡眠時(shí)間延長(zhǎng)之間的差異，睡眠時(shí)間延長(zhǎng)有顯著性，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。3.3戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)3.3.1原理觀察受試物與戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）的協(xié)同作用。由于戊巴比妥鈉通過肝酶代謝，而對(duì)該酶有抑制作用的藥物，也能延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間，所以為排除這種影響，應(yīng)進(jìn)行閾下劑量實(shí)驗(yàn)。3.3.2試劑戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉用前新鮮配制。3.3.3操作步驟正式實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下催眠劑量（戊巴比妥鈉16－30mg/kgBW或巴比妥鈉100－150mg/kgBW即80－90%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量。動(dòng)物末次給予溶劑及不同濃度受試樣品后，出現(xiàn)峰作用前10－15分鐘，各組動(dòng)物腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量，記錄30分鐘內(nèi)入睡動(dòng)物數(shù)（翻正反射消失達(dá)1分鐘以上者）。實(shí)驗(yàn)宜在24－25℃安靜環(huán)境下進(jìn)行。3.3.4數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定入睡動(dòng)物數(shù)為計(jì)數(shù)資料用2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組入睡動(dòng)物數(shù)之間的差異，入睡動(dòng)物發(fā)生率增加有顯著性，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。3.4巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)3.4.1原理在巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上，觀察受試物是否能縮短入睡潛伏期，若睡眠潛伏期縮短，則說(shuō)明受試物與巴比妥鈉有協(xié)同作用。3.4.2試劑巴比妥鈉（用前新鮮配制）3.4.3操作步驟做正式實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定使動(dòng)物100%入睡，但又不使睡眠時(shí)間過長(zhǎng)的巴比妥鈉的劑量（200-300mg/kgBW用此劑量正式實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物末次給于溶劑及不同濃度受試樣品10－20分鐘后，給各組動(dòng)物腹腔注射巴比妥鈉，注射量為0.2mL/20g，以翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試樣品對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。3.4.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組睡眠潛伏期之間的差異，睡眠潛伏期縮短有顯著性，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。4結(jié)果判定延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中二項(xiàng)陽(yáng)性，且無(wú)明顯直接睡眠作用，可判定該受試樣品具有有助于改善睡眠作用。s注意事項(xiàng)5.1實(shí)驗(yàn)室環(huán)境必須安靜、恒溫、恒濕，以確保條件的恒定。5.2由于動(dòng)物自身固有的生物學(xué)特征和習(xí)性，對(duì)受試樣品的反應(yīng)存在著種屬、性別、年齡