基于技術(shù)審評(píng)的第二類化學(xué)發(fā)光免疫類體外診斷試劑(盒)相關(guān)問(wèn)題研究

內(nèi)容提要：針對(duì)按第二類醫(yī)療器械管理的化學(xué)發(fā)光免疫類體外診斷試劑（盒）產(chǎn)品，結(jié)合國(guó)內(nèi)外免疫自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)發(fā)展現(xiàn)狀，以環(huán)孢霉素和他克莫司檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）為例，從產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)角度，對(duì)不同種類化學(xué)發(fā)光免疫試劑原理進(jìn)行深入研究，探討注冊(cè)申報(bào)常見問(wèn)題，以期對(duì)審評(píng)員及企業(yè)注冊(cè)申報(bào)人員提供思路和幫助?；瘜W(xué)發(fā)光免疫類體外診斷試劑（盒）系列產(chǎn)品，作為醫(yī)療器械管理的體外診斷（InVitroDiagnostic，IVD）試劑中發(fā)展最為迅速的產(chǎn)品之一，其代表了目前免疫類體外診斷試劑（盒）產(chǎn)品的較高檢測(cè)水準(zhǔn)，在目前免疫分析領(lǐng)域中最具發(fā)展?jié)摿ΑＥc酶聯(lián)免疫吸附法和干式熒光免疫層析法類產(chǎn)品相比，化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品的靈敏度、準(zhǔn)確度等有一定的優(yōu)勢(shì)，并且隨著化學(xué)發(fā)光技術(shù)不斷地改進(jìn)、升級(jí)，其在各大醫(yī)院臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域占比份額越來(lái)越大，申報(bào)此類產(chǎn)品的企業(yè)也與日俱增。審評(píng)員和注冊(cè)申報(bào)人員深入了解此類產(chǎn)品發(fā)展現(xiàn)狀、方法原理及申報(bào)時(shí)常見問(wèn)題，對(duì)于此類產(chǎn)品的科學(xué)審評(píng)，提高注冊(cè)申報(bào)時(shí)限效率等方面不無(wú)裨益。本文依托國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心指導(dǎo)原則和山東省藥品監(jiān)督管理局審評(píng)研究項(xiàng)目，研究人員實(shí)地調(diào)研了全國(guó)部分持有化學(xué)發(fā)光免疫類試劑注冊(cè)證的企業(yè)，親臨企業(yè)生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)，與一線研發(fā)、注冊(cè)人員深入探討產(chǎn)品原理、生產(chǎn)過(guò)程及化學(xué)發(fā)光行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀、產(chǎn)品質(zhì)量控制的關(guān)鍵點(diǎn)以及注冊(cè)申報(bào)過(guò)程中遇到的問(wèn)題等。1.化學(xué)發(fā)光免疫類體外診斷試劑（盒）發(fā)展現(xiàn)狀I(lǐng)VD領(lǐng)域是目前醫(yī)療器械中占比最大的子領(lǐng)域。2016年，全球IVD市場(chǎng)規(guī)模約為562億美元，占全球醫(yī)療器械市場(chǎng)的13%左右，增長(zhǎng)率約5%[1]。美國(guó)、日本與歐洲為全球最主要的IVD市場(chǎng)，占全球市場(chǎng)的75%左右[2]?？鐕?guó)公司具有全球壟斷地位，羅氏（20%）、雅培（11%）、丹納赫（11%）和西門子（10%）等前4強(qiáng)占據(jù)了全球52%的市場(chǎng)份額。我國(guó)IVD市場(chǎng)發(fā)展迅速，市場(chǎng)前景廣闊，是全球除歐盟、美國(guó)、日本等發(fā)達(dá)經(jīng)濟(jì)體之外的最大單一國(guó)家市場(chǎng)。2016年，我國(guó)IVD市場(chǎng)規(guī)模約600億元人民幣，占全球市場(chǎng)的15%左右，約為全球IVD市場(chǎng)平均增長(zhǎng)率的3倍，但我國(guó)免疫診斷試劑僅占整個(gè)體外診斷試劑市場(chǎng)份額29%[1,3]。化學(xué)發(fā)光免疫分析產(chǎn)品由于研發(fā)難度大，技術(shù)門檻高，且國(guó)內(nèi)企業(yè)在化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)上起步晚于進(jìn)口廠家，導(dǎo)致我國(guó)高端免疫診斷市場(chǎng)90%以上的份額被跨國(guó)公司壟斷，其產(chǎn)品價(jià)格昂貴，醫(yī)療費(fèi)用高，亟需國(guó)產(chǎn)化免疫診斷試劑上市充實(shí)市場(chǎng)。近年來(lái)，醫(yī)保項(xiàng)目覆蓋率的提升導(dǎo)致醫(yī)療需求釋放，慢性病和傳染病發(fā)病率居高不下導(dǎo)致診療次數(shù)增長(zhǎng)，人口城鎮(zhèn)化比例提升以及人們預(yù)防疾病意識(shí)提升導(dǎo)致人均診療費(fèi)用上升?；谝陨显?，未來(lái)中國(guó)體外診斷需求預(yù)計(jì)將以15%～20%的年均增長(zhǎng)率增長(zhǎng)，成為全球增長(zhǎng)最快的市場(chǎng)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析產(chǎn)品基本可以應(yīng)用于所有的免疫診斷項(xiàng)目，產(chǎn)品包括甲狀腺功能檢測(cè)、腎功能檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、傳染病檢測(cè)、激素檢測(cè)、貧血檢測(cè)、感染檢測(cè)、心臟病檢測(cè)、骨代謝檢測(cè)、糖尿病檢測(cè)等諸多疾病的檢測(cè)試劑，其中腫瘤、甲功、激素、傳染病占據(jù)了市場(chǎng)80%的份額。近年來(lái)，用于藥物濃度檢測(cè)的試劑逐步在市場(chǎng)上出現(xiàn)，例如環(huán)孢霉素和他克莫司藥物作為常用的免疫抑制劑，主要用于抗器官移植排斥反應(yīng)，還可應(yīng)用于治療某些自身免疫性疾病，定時(shí)對(duì)患者體內(nèi)環(huán)孢霉素和他克莫司的血藥濃度監(jiān)測(cè)，制定個(gè)體化給藥方案，對(duì)提高器官移植的存活率，促進(jìn)環(huán)孢霉素和他克莫司在臨床的合理應(yīng)用具有重要的臨床意義[4]。我國(guó)化學(xué)發(fā)光相關(guān)企業(yè)約有二百多家，但藥物檢測(cè)類試劑企業(yè)不到十家，其分布相對(duì)集中，形成了以北京、上海、廣東、江蘇、浙江為主的產(chǎn)業(yè)聚集區(qū)。由于國(guó)家對(duì)行業(yè)準(zhǔn)入和產(chǎn)品質(zhì)量要求的提高，化學(xué)發(fā)光產(chǎn)業(yè)新進(jìn)入者的活躍度降低，新成立的化學(xué)發(fā)光企業(yè)數(shù)量在下降，規(guī)模小、技術(shù)含量低的公司在逐漸退出。目前，國(guó)內(nèi)化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑約有四千七百左右的試劑批件，而藥物檢測(cè)類試劑僅十余個(gè)。綜合市場(chǎng)先發(fā)性及占有率、化學(xué)發(fā)光儀器檢測(cè)準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性、檢測(cè)菜單豐富性和特色優(yōu)勢(shì)及渠道布局等因素，目前國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光企業(yè)按市場(chǎng)占有份額依次為新產(chǎn)業(yè)、安圖生物、邁克生物、邁瑞醫(yī)療、利德曼、迪瑞醫(yī)療、科美生物、長(zhǎng)光華醫(yī)、博奧賽斯、源德生物、科華生物、深圳雷杜等。筆者有幸針對(duì)環(huán)孢霉素和他克莫司檢測(cè)試劑指南編制赴深圳新產(chǎn)業(yè)開展調(diào)研。2.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)分類及優(yōu)缺點(diǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)。這種方法學(xué)包含兩個(gè)部分，即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)（在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體）直接標(biāo)記在抗原（化學(xué)發(fā)光免疫分析）或抗體（免疫化學(xué)發(fā)光分析）上，或酶作用于發(fā)光底物?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體，當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)，同時(shí)發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器測(cè)量光量子產(chǎn)額。該技術(shù)因具有分析速度快、線性范圍寬、無(wú)散射光干擾、無(wú)放射性污染、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，在臨床診斷、生命分析等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[5-8]。2.1化學(xué)發(fā)光按照化學(xué)反應(yīng)類型分類化學(xué)發(fā)光按照化學(xué)反應(yīng)類型，可分為酶促化學(xué)發(fā)光和非酶促化學(xué)發(fā)光。本文以此分類為準(zhǔn)介紹代表企業(yè)及優(yōu)缺點(diǎn)，2.2和2.3為不同的分類方式，有部分重合。2.1.1酶促化學(xué)發(fā)光作為標(biāo)記物的酶基本不被消耗，而反應(yīng)體系中發(fā)光劑的量充分過(guò)量，發(fā)光強(qiáng)度穩(wěn)定，發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)，常采用速率法檢測(cè)。常見的酶促化學(xué)發(fā)光為堿性磷酸酶（AlkalinePhosphatase，ALP）系統(tǒng)和辣根過(guò)氧化物酶（HorseradishPeroxidase，HRP）系統(tǒng)及黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)。標(biāo)記的酶為生物大分子，需要使用長(zhǎng)臂雙功能團(tuán)等間接標(biāo)記技術(shù)來(lái)解決生物活性保持問(wèn)題。其測(cè)量方式簡(jiǎn)單（速率法），成本低，靈敏度較高，但工作曲線隨時(shí)間漂移低端斜率呈非線性下移。標(biāo)記物為ALP+螺旋金剛烷環(huán)氧化物苯磷酸酯用作標(biāo)記酶的優(yōu)點(diǎn)是：穩(wěn)定性高、靈敏度高；缺點(diǎn)是分子量大（140kD），空間位阻比較大，可能存在內(nèi)源性ALP的干擾，成本較高。對(duì)于化學(xué)發(fā)光免疫分析來(lái)說(shuō)，ALP的底物比HRP的底物優(yōu)秀的地方在于ALP為單一組分，基本沒有自身發(fā)光，持續(xù)發(fā)光，本底低，信噪比高，靈敏度高、ALP底物穩(wěn)定性更好。反應(yīng)動(dòng)力學(xué)沒有HRP底物復(fù)雜，影響因素少，結(jié)果更穩(wěn)定。但ALP易受黃疸等干擾樣本影響，需進(jìn)行溫育反應(yīng)。主流企業(yè)有貝克曼、邁瑞、希森美康等。標(biāo)記物為標(biāo)記HRP+魯米諾及其衍生物有安圖、強(qiáng)生、邁克等，需進(jìn)行溫育反應(yīng)，可持續(xù)發(fā)光，也可進(jìn)行增強(qiáng)發(fā)光，易受血紅蛋白等干擾樣本影響。HRP是免疫診斷試劑產(chǎn)品最常用的標(biāo)記酶，約占80%。對(duì)于化學(xué)發(fā)光免疫分析來(lái)說(shuō)，HRP的底物的優(yōu)點(diǎn)是成本低，專利限制少，達(dá)到信號(hào)峰值快。缺點(diǎn)有魯米諾在沒有HRP存在情況下，也會(huì)被H2O2氧化自身發(fā)光，本底相對(duì)較高，影響信噪比。由于增強(qiáng)劑的存在，反應(yīng)動(dòng)力學(xué)復(fù)雜，影響因素多，結(jié)果不夠穩(wěn)定，要得到靈敏度高且平臺(tái)期長(zhǎng)的底物不容易。2.1.2非酶促發(fā)光其試劑成本較高、發(fā)光時(shí)間短，測(cè)量方式復(fù)雜（積分法），需原位進(jìn)樣，儀器成本及維護(hù)費(fèi)用較高。吖啶酯：作為標(biāo)記物的化學(xué)物質(zhì)，氧化反應(yīng)不需催化劑，發(fā)光過(guò)程中標(biāo)記物被消耗，吖啶酯在堿性環(huán)境下，直接被過(guò)氧化物直接氧化產(chǎn)生發(fā)光信號(hào)，發(fā)光信號(hào)持續(xù)時(shí)間短，信噪比高，為閃光型。優(yōu)點(diǎn)為標(biāo)記物為小分子化學(xué)物質(zhì)，對(duì)被標(biāo)記物的構(gòu)型影響較小，試劑穩(wěn)定性好，可以兩點(diǎn)定標(biāo)。化學(xué)發(fā)光體系相對(duì)簡(jiǎn)單，激發(fā)液成本低。代表企業(yè)為雅培、西門子。異魯米諾：直接標(biāo)記發(fā)光物，為閃光型；易受血紅蛋白等干擾樣本影響，代表企業(yè)為新產(chǎn)業(yè)、威高、索林。新產(chǎn)業(yè)的環(huán)孢霉素和他克莫司檢測(cè)試劑均采用此種方法進(jìn)行檢測(cè)。在技術(shù)方面主要有兩個(gè)特點(diǎn)，一是將納米磁球作為固相載體，二是有機(jī)小分子直接化學(xué)發(fā)光。電化學(xué)發(fā)光：氧化反應(yīng)是通過(guò)電極上的電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生，而不是由氧化劑或者發(fā)光劑產(chǎn)生，標(biāo)記物為三聯(lián)吡啶釕衍生物即[Ru(bpy)3]2+，并以三乙胺為還原劑。有的為一步法，需要檢測(cè)池，高壓調(diào)整需要嚴(yán)格掌控，易受生物素等干擾樣本影響，測(cè)量方式復(fù)雜（脈沖激發(fā)、間歇式測(cè)量、流動(dòng)池），儀器成本及維護(hù)費(fèi)用高，環(huán)境及樣品中同類元素可導(dǎo)致本底干擾。代表企業(yè)為羅氏、深圳普門等。2.2化學(xué)發(fā)光按發(fā)光持續(xù)時(shí)間分類化學(xué)發(fā)光按發(fā)光持續(xù)時(shí)間分類，可分為輝光型（glow）和閃光型（flash）。2.2.1輝光型發(fā)光輝光型的發(fā)光時(shí)間在數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘以上，常見酶促發(fā)光系統(tǒng)，以速率法測(cè)量，即在發(fā)光信號(hào)相對(duì)穩(wěn)定的區(qū)域（坪區(qū)）任意點(diǎn)測(cè)量單位時(shí)間的發(fā)光強(qiáng)度。2.2.2閃光型發(fā)光閃光型的發(fā)光時(shí)間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯系統(tǒng)，檢測(cè)方法一般采用原位進(jìn)樣和時(shí)間積分法測(cè)量，即在檢測(cè)器模塊加裝進(jìn)樣器，保證加入發(fā)光劑和檢測(cè)兩個(gè)步驟同時(shí)進(jìn)行。2.3化學(xué)發(fā)光按檢測(cè)類型分類化學(xué)發(fā)光按檢測(cè)類型分類，可分為直接化學(xué)發(fā)光、間接化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光。2.3.1直接化學(xué)發(fā)光直接化學(xué)發(fā)光以化學(xué)物質(zhì)，如異魯米諾和吖啶酯系列等直接標(biāo)記抗原或抗體，免疫反應(yīng)后，直接引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。2.3.2間接化學(xué)發(fā)光間接化學(xué)發(fā)光是用參與發(fā)光反應(yīng)的酶來(lái)標(biāo)記抗原或抗體，免疫反應(yīng)后，加入發(fā)光底物，測(cè)定發(fā)光系統(tǒng)的發(fā)光強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行抗原或抗體的檢測(cè)。2.3.3電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。2.4化學(xué)發(fā)光免疫分析方法優(yōu)勢(shì)與以往的放射免疫方法、酶聯(lián)免疫吸附法相比，化學(xué)發(fā)光免疫分析方法在靈敏度、線性范圍、反應(yīng)時(shí)間、誤診概率方面優(yōu)勢(shì)明顯，并且很容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，進(jìn)行高通量多樣本連續(xù)測(cè)定。2.4.1更高的靈敏度首先方法本身結(jié)合了化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的高靈敏度和免疫分析的高選擇性，加之很多產(chǎn)品含有磁微粒（粒徑約1μm）進(jìn)行放大發(fā)光，由于磁微粒的比表面積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶標(biāo)板，且磁微粒在反應(yīng)體系中更接近液相反應(yīng)，包被的抗原抗體更容易與待測(cè)物相結(jié)合，使得靈敏度大大提高。2.4.2更寬的線性范圍酶免法（酶標(biāo)儀）的線性范圍一般為0.1～3.0OD（30倍），化學(xué)發(fā)光法（PMT）的線性范圍一般為3×102～3×107RLU（105倍），擴(kuò)大了線性范圍寬度。2.4.3更短的反應(yīng)時(shí)間酶免的總反應(yīng)時(shí)間普遍＞1.5h，加上洗滌和顯色時(shí)間一般＞2h，化學(xué)發(fā)光由于抗原抗體反應(yīng)更接近液相反應(yīng)，使得反應(yīng)速率大大加快，大部分項(xiàng)目出結(jié)果時(shí)間在30min以內(nèi)。2.4.4更小的誤診概率化學(xué)發(fā)光體系具有更高的靈敏度和特異性，有效減少灰區(qū)；全自動(dòng)化的儀器操作以減少人為失誤和交叉污染帶來(lái)的誤診；更有效地清洗系統(tǒng)，使非特異吸附較少到最低。3.新法規(guī)下化學(xué)發(fā)光免疫類體外診斷試劑（盒）相關(guān)的產(chǎn)品注冊(cè)問(wèn)題根據(jù)《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告（2021年第122號(hào)）》要求及化學(xué)發(fā)光免疫類體外診斷試劑（盒）不同發(fā)光方式，以環(huán)孢霉素和他克莫司檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）為例，結(jié)合近一年來(lái)山東省注冊(cè)申報(bào)此類產(chǎn)品的發(fā)補(bǔ)情況，從技術(shù)審評(píng)角度對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫類體外診斷試劑（盒）的相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行分析，總結(jié)出以下幾個(gè)方面的注意事項(xiàng)。3.1產(chǎn)品描述盡量詳盡產(chǎn)品描述中對(duì)所采用的技術(shù)原理、產(chǎn)品組成等內(nèi)容應(yīng)盡量描述詳盡。尤其對(duì)于技術(shù)原理，應(yīng)包括其反應(yīng)原理（如雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法等）、方法學(xué)的分類（見上文）、測(cè)量方法（終點(diǎn)法還是速率法）、信號(hào)處理方法、數(shù)據(jù)獲取和解讀方式，分析前處理步驟等。例如，環(huán)孢霉素和他克莫司檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）采用的是競(jìng)爭(zhēng)法，異魯米諾直接標(biāo)記在抗體上直接引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，發(fā)光強(qiáng)度與待測(cè)樣本中環(huán)孢霉素和他克莫司濃度成反比，使用相應(yīng)的方程擬合可定量測(cè)算出樣本中環(huán)孢霉素和他克莫司濃度。3.2生物安全性方面的說(shuō)明首先，化學(xué)發(fā)光免疫類產(chǎn)品不可避免地涉及抗原抗體，至少應(yīng)對(duì)其生物學(xué)來(lái)源（人、動(dòng)物、病原體、重組或發(fā)酵產(chǎn)物等）和來(lái)源地域進(jìn)行說(shuō)明。其次，應(yīng)用蛋白電泳分析等技術(shù)證明所用生物材料僅含特征條帶，不包含其他。最后，應(yīng)說(shuō)明此生物材料密封保存，運(yùn)輸過(guò)程中不和人及環(huán)境直接接觸，或者說(shuō)明僅在企業(yè)參考品中含有，參與生產(chǎn)過(guò)程及檢驗(yàn)，遵循相關(guān)的生產(chǎn)檢驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行操作等。3.3產(chǎn)品技術(shù)要求對(duì)檢驗(yàn)方法的特殊要求《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（2022年第8號(hào)）中規(guī)定產(chǎn)品檢驗(yàn)方法應(yīng)與性能指標(biāo)相適應(yīng)，優(yōu)先選用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，同時(shí)應(yīng)具備可操作性和可重現(xiàn)性。除此之外，檢驗(yàn)方法中還應(yīng)當(dāng)明確說(shuō)明采用的參考品/標(biāo)準(zhǔn)品、樣本制備方法、使用的試劑批次和數(shù)量、試驗(yàn)次數(shù)、計(jì)算方法等內(nèi)容，其中參考品制備等內(nèi)容可以附錄形式附在產(chǎn)品技術(shù)要求正文之后。3.4分析性能研究?jī)?nèi)容及研究報(bào)告的要求分析性能研究是對(duì)整個(gè)免疫檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行研發(fā)階段性能的總結(jié)，是檢測(cè)儀器、配套試劑、應(yīng)用軟件、分離技術(shù)、分離模式、檢測(cè)技術(shù)、抗原/抗體、質(zhì)控及其他要素綜合作用的結(jié)果。對(duì)于體外診斷試劑來(lái)說(shuō)，除了準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、靈敏度等基本性能外，如果產(chǎn)品涉及高劑量鉤狀效應(yīng)、干擾交叉反應(yīng)、高濃度的自身抗體或HAMA效應(yīng)、不同類型樣本的一致性比對(duì)、樣本加樣量、抗凝劑影響等其他內(nèi)容時(shí)，也應(yīng)一并進(jìn)行研究且提供相應(yīng)的驗(yàn)證報(bào)告，研究結(jié)果與產(chǎn)品說(shuō)明書中相關(guān)內(nèi)容保持一致。可參考《定量檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》及國(guó)際通用的性能評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)CLSI指南（EP系列文件）進(jìn)行研究。對(duì)于環(huán)孢霉素和他克莫司檢測(cè)試劑，性能評(píng)估時(shí)應(yīng)注意以下兩點(diǎn)：一是盡可能納入預(yù)期使用人群（即攝入環(huán)孢霉素或他克莫司的患者）的樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。確需使用加標(biāo)樣本進(jìn)行研究時(shí)，應(yīng)提供關(guān)于藥品純度、代謝產(chǎn)物或潛在干擾物質(zhì)、樣品類型的信息等[4]。二是應(yīng)考慮藥物代謝引入的交叉反應(yīng)。分析性能研究的各個(gè)項(xiàng)目的報(bào)告應(yīng)包括研究方案。根據(jù)報(bào)告和數(shù)據(jù)，提供證據(jù)的總結(jié)以及證據(jù)充分性的論證或者此項(xiàng)研究不適用的說(shuō)明。僅僅提供研究方法、檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)導(dǎo)致研究資料單薄，不能完整再現(xiàn)企業(yè)在研發(fā)時(shí)所做的工作，另外，審評(píng)人員也不能充分了解產(chǎn)品性能全部的研究?jī)?nèi)容導(dǎo)致發(fā)補(bǔ)偏差。3.5校準(zhǔn)品量值溯源問(wèn)題如果申報(bào)產(chǎn)品中包含校準(zhǔn)品，要保證校準(zhǔn)檢測(cè)系統(tǒng)后測(cè)定樣品所得結(jié)果準(zhǔn)確性，必須有量值溯源性，且應(yīng)當(dāng)提交溯源資料。校準(zhǔn)品是用于修正儀器和試劑產(chǎn)生的偏倚，為使檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可信，企業(yè)必須對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行賦值。賦值結(jié)果一般在標(biāo)簽或說(shuō)明書中給予標(biāo)識(shí)，或以校準(zhǔn)曲線的形式錄入試劑盒配套校準(zhǔn)卡（ID卡、二維碼）中。一般企業(yè)可以溯源到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、參考方法或權(quán)威參考系統(tǒng)等。環(huán)孢霉素和他克莫司溯源鏈：終端用戶結(jié)果→試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品→企業(yè)參考品→CRM標(biāo)準(zhǔn)品→美國(guó)NIST標(biāo)準(zhǔn)（美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院）可供參考。另外，在溯源過(guò)程中應(yīng)充分識(shí)別每一次量值傳遞過(guò)程中引入的不確定度，確定評(píng)估方案，量化不確定度分量，最后來(lái)計(jì)算合成不確定度和拓展不確定度（參考YY/T1709-2020《體外診斷試劑用校準(zhǔn)物測(cè)量不確定度評(píng)定》）。還應(yīng)考慮與校準(zhǔn)品有關(guān)的校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性以及互換性研究。3.6參考區(qū)間建立時(shí)常見問(wèn)題根據(jù)《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》，需要建立參考區(qū)間時(shí)，應(yīng)注意以下問(wèn)題：一是混淆單、雙側(cè)界值。在參考區(qū)間建立研究時(shí)，應(yīng)依據(jù)臨床意義的不同確定檢測(cè)項(xiàng)目的單側(cè)界值或雙側(cè)界值。通常使用雙側(cè)2.5%～97.5%的人群分布，單側(cè)時(shí)可選擇95%或5%。二是數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布繼而導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)方法不同。在繪制完分布圖后宜采用假設(shè)檢驗(yàn)方法進(jìn)行綜合判斷是否符合正態(tài)分布。根據(jù)是否為正態(tài)分布選擇合適的方法進(jìn)行數(shù)據(jù)離群值判斷（Dixon方法適用于非正態(tài)分布數(shù)據(jù)，Tukey法適用于正態(tài)分布數(shù)據(jù)），處理完離群值后，方可進(jìn)行參考區(qū)間建立。如參考值數(shù)據(jù)近似正態(tài)分布或檢測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)變量轉(zhuǎn)換后呈正態(tài)分布，可采用正態(tài)分布法確定參考區(qū)間；如參考值數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，可采用百分位數(shù)法（非參數(shù)法）確定參考區(qū)間。由于正常未使用相應(yīng)藥物的人群樣本中無(wú)可檢出的特定藥物及其代謝產(chǎn)物，環(huán)孢霉素和他克莫司檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）等藥物檢測(cè)類試劑不涉及此部分內(nèi)容，可對(duì)相應(yīng)的治療范圍進(jìn)行研究并體現(xiàn)在說(shuō)明書中供臨床醫(yī)生參考。3.7臨床評(píng)價(jià)需要注意的情況如果待評(píng)價(jià)試劑與比對(duì)方法對(duì)不同人群亞組表現(xiàn)出不同的性能，