高效液相色譜儀考察氫溴酸高烏甲素分散片的溶出度

高效液相色譜儀考察氫溴酸高烏甲素分散片的溶出度儀器與試藥Waters600高效液相色譜儀、Waters2487紫外檢測(cè)器;ZRS-8智能藥物溶出儀、、氫溴酸高烏甲素對(duì)照品（、批號(hào):100289-200902），氫溴酸高烏甲素分散片（自制，規(guī)格:每片5mg批號(hào):090601,090602,090603），氫溴酸高烏甲素片（、規(guī)格：每片5mg,批號(hào):0812280）,甲醇（色譜純、），水為純化水，其余試劑均為分析純。方法與結(jié)果2．1色譜條件色譜柱:DiamonsilC18柱（250mmX4. 6mm,5|Jm）;流動(dòng)相:0. 05mol?L-1磷酸二氫鈉-甲醇（28:72）;柱溫:25°C;檢測(cè)波長(zhǎng):252nm;流速:1.0mL?min-1;進(jìn)樣體積:20JL。2. 2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品適量,用流動(dòng)相制成每毫升約含20Jg的溶液,以流動(dòng)相為空白于200?400nm波長(zhǎng)掃描。結(jié)果對(duì)照品在221,252,309nm處有吸收峰?？紤]到221nm靠近末端吸收,309nm波長(zhǎng)處峰值較低，因此選擇波長(zhǎng)252nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。2. 3色譜條件的選擇及系統(tǒng)適用性參考?xì)滗逅岣邽跫姿睾亢陀嘘P(guān)物質(zhì)研究的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選用18柱（250mmX4.6mm,5Jm），以0.05mol?L-1磷酸二氫鈉溶液-甲醇（28:72）為流動(dòng)相，結(jié)果主峰峰形對(duì)稱，理論板數(shù)＞1500,主峰與鄰近峰的分離度＞1. 5。故選擇此色譜條件。2. 4溶出轉(zhuǎn)速的選擇采用小杯法，以100mL水為溶劑，考察轉(zhuǎn)速分別為100,50r?min-1時(shí)的溶出情況，結(jié)果50r?min-1, 10min時(shí)溶出即〉80%，說(shuō)明氫溴酸高烏甲素分散片溶出較快，故選擇50r?min-1較合適。2. 5溶出介質(zhì)的選擇照溶出度測(cè)定法（《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部附錄XC第三法），轉(zhuǎn)速為50r?min-1，分別選擇水、0.1mol?L-1鹽酸、磷酸鹽緩沖液（pH6.8）3種溶出介質(zhì)進(jìn)行考察，結(jié)果在3種溶出介質(zhì)中的溶出行為相似，無(wú)明顯差別。因此選擇水為氫溴酸高烏甲素分散片的溶出介質(zhì)。2. 6濾膜吸附的考察分別采用濾膜（孔徑0.45Jm）過(guò)濾和離心（3000r?min-1）兩種方式處理溶出液，結(jié)果兩種方式處理的峰面積十分相近，說(shuō)明采用濾膜（孔徑0. 45Jm）過(guò)濾不會(huì)對(duì)主藥產(chǎn)生吸附，而濾膜過(guò)濾較離心法簡(jiǎn)單易行，因此采用濾膜過(guò)濾法處理樣品。2. 7溶出度方法驗(yàn)證2. 7. 1系統(tǒng)適用性考察稱取氫溴酸高烏甲素分散片細(xì)粉適量，用水配制成每毫升約含氫溴酸高烏甲素50Jg的溶液，取20JL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰峰形對(duì)稱，理論板數(shù)＞1500;與鄰近峰分離度＞1. 5，已完全分離。另取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20JL,記錄色譜圖，計(jì)算各峰面積的RSD，考察本色譜系統(tǒng)的重復(fù)性。結(jié)果連續(xù)進(jìn)樣5次的峰面積RSD為0. 65%（V1. 0%），說(shuō)明本色譜系統(tǒng)重復(fù)性很好。2. 7. 2專屬性考察分別稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品、氫溴酸高烏甲素分散片細(xì)粉、空白輔料適量，用水配制成每毫升約含氫溴酸高烏甲素50Jg的溶液，取20JL注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果空白輔料約在3. 1min出現(xiàn)較小的輔料峰，但與主峰相距甚遠(yuǎn)，對(duì)溶出度測(cè)定無(wú)干擾。說(shuō)明所選擇的溶出度測(cè)定方法專屬性較好。

t4fi8

rVmiti4圖12 4fi呂timin2 4fiS-2 4fi呂timin2 4fiS-H r雖漠酸高烏甲蠱HP"圖2．7．3溶出液穩(wěn)定性考察取專屬性項(xiàng)下的樣品溶液，分別于室溫下放置0,2,4,6,12, 24h后，取20pL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果各時(shí)間點(diǎn)的峰面積RSD為1. 35%(V2. 0%)，說(shuō)明本品溶出液的穩(wěn)定性較好,至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。2. 7. 4線性關(guān)系考察精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品12.2mg,置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備溶液。分別精密量取貯備溶液0.2，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5mL置10mL量瓶中，用水稀釋至刻度，配制成濃度分別為9.76，24.40，39.04，48.80,58.56,73.20pg?mL-1的溶液。分別取上述溶液20pL,注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，主峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=19583X-14259(r=0. 999刀。氫溴酸高烏甲素在9. 76?73. 20pg?mL-1濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。2. 7. 5溶出度回收實(shí)驗(yàn)按氫溴酸高烏甲素分散片溶出度測(cè)定濃度的50%，80%，100%進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。分別精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品約6. 25，10. 00，12. 50mg各3份，置250mL量瓶中，再分別加入空白輔料約0. 14g,加水溶解并稀釋至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品約10mg,置25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。再精密量取該溶液1mL,置10mL量瓶中，用水稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。按“2. 3”項(xiàng)下的色譜條件，分別取供試品溶液及對(duì)照品溶液20pL,注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果3個(gè)濃度的回收率均在97%?103%之間(表1)，平均回收率為100. 30%，RSD為1. 34%，說(shuō)明該方法的準(zhǔn)確度較高。

表I氫漠酸高烏甲案溶出度回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1R-e-cover}7ofdissolutionoflappaconidn-ehydrobr-omi-d* n=9編號(hào)濃度/%抑入量測(cè)得量回收和%m_g1506.636.63100.002506.2S6.44102.553306.3Si6.50101.RR4R010.7110.69W.815S010.4610.51100.486SO10.2810.2&100.00710012.6312.67100.32R10012.8712.599U910012.7312/7199.842．8溶出均一性考察及與市售片比較測(cè)定3批氫溴酸高烏甲素分散片中試樣品溶出曲線，考察溶出均一性。采用小杯法，以100mL水為溶劑，轉(zhuǎn)速50r?min-1。取樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)為10,20,30,45,60min,分別計(jì)算累積溶出度。同法測(cè)定市售氫溴酸高烏甲素普通片的溶出曲線，與分散片進(jìn)行比較。累積圖2氫謨酸高烏甲童分散片及市營(yíng)普通片濬出曲線圖

市隹-皋述片； -■-分散片（M）h（lli溶出曲線見(jiàn)圖2。亠令繼溶出曲線見(jiàn)圖2。討論氫溴酸高烏甲素片劑因規(guī)格較?。?mg）,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)二部第5冊(cè)）采用的溶出度測(cè)定方法為:“取本品數(shù)片（相當(dāng)于氫溴酸高烏甲素50mg）,照溶出度測(cè)定法（《中華人民共和國(guó)藥典》1995年版二部附錄XC第2法），加水800mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為100r?min-1,經(jīng)45min時(shí)，吸取溶液20mL,濾過(guò)，精密量取濾液10mL置于25mL量瓶中，照含量測(cè)定項(xiàng)下自??測(cè)定每片的溶出量。限度為標(biāo)示量的80%”。按照此方法,一個(gè)溶出杯要放10片樣品,實(shí)際上測(cè)得的是10片樣品的平均值,不能真實(shí)反映出每片的溶出情況。分析原因,可能因?yàn)榇藰?biāo)準(zhǔn)制訂較早,當(dāng)時(shí)尚未普遍使用小