NY-T 4353-2023 蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

KS6708020CCSR31中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T4353-2023蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determinationofmcthykclcnocystcinc,sclcnotmcthionim*andsclcnocystcinc

invegetablesbyliquidchromatography-tandemmassspectrometry2023-08-01實(shí)施2023-04d12023-08-01實(shí)施屮屮人比共和1對(duì)農(nóng)收農(nóng)村部發(fā)布NY/T4353-2023NY/T4353-2023IINY/T4353-2023NY/T4353-2023II本文件按照GB/T1.1—2020＜標(biāo)準(zhǔn)化工怍導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起孕規(guī)則》的規(guī)定起革。語(yǔ)注意本文件的某些內(nèi)容0J能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承拘識(shí)別專利的賁任。本文件中農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)tt安全監(jiān)管司提出。本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品苕養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)專家委員會(huì)歸門。本文件起孕笮位：汀.內(nèi)省農(nóng)收科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)墩安全與標(biāo)準(zhǔn)研究所，江rt省農(nóng)學(xué)會(huì)、江時(shí)省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料與資源環(huán)境研究所。本文件主要起草人：廖FL根、張莉.向建軍、萬(wàn)鸝、裒面娟、沈思言、張大文、拽益華、羅林廣、載廷燦.邱索艷.熊艷。蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的測(cè)定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1范困本文件規(guī)定了蔬菜中甲基曬代肀胱気酸、曬代蛋気酸和曬代肀胱気酸;Vft的液相色譜申聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法-本文件適用f蔬菜中甲基柄代半胱氨酸.柄代蛋氨酸和硒代半胱氨酸含雖的測(cè)定.2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注H期的引用文件，僅該h期對(duì)應(yīng)的版本適用r?本文件：不注h期的引用文件.其最新版本(包括所有的修改中)適用r本文件，GB/T6682分析實(shí)賒室川水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)冇需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義《4原理試樣屮聃代氨桂酸用蛋0酶水解捉取.經(jīng)超濾行離心凈化.用液相色講申聯(lián)質(zhì)講儀檢測(cè).基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn).外標(biāo)法定蛍。5試剤和材料5.1除另有規(guī)定外.所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.2試劑5.2.1甲醇(CH.OH)：色譜純。52.2甲酸(HCOOH)：色進(jìn)純.5.2.3蛋白酶(proteaseXIV.CAS號(hào),9036-06-0)!酶活力＞3.5U/mg.4抗壞血酸(C6H8Ot，CAS號(hào)：50-81-7).5.2.5三羥甲基氨基甲燒(C,H?NO”CAS號(hào),7786-1).5.2.6鹽酸(HC1).濃度為36%-38^.5.3試劑配制5.3.1蛋(JW溶液(5.0mg/mL),稱取蛋l(fā)JW(5.2.3)250mg,用水稀_定容至50mL,搖勻.備用.現(xiàn)用現(xiàn)配，5.3.2抗壞血酸溶液(0.2mol/L)：稱取抗壞血酸(5.2.4)3.52g，用水稀釋定容至100mL.搖勻用.現(xiàn)用現(xiàn)配。5.3.3三羥甲基気基甲烷-ft険(Tris-HCI)緩沖溶液(10.0mmol/L.pII7.5)：稱取0.606g三羥甲基気堪屮烷(5.2.5＞溶于450niL水中.用鹽酸(5.2.6)調(diào)節(jié)到pH7.5.加水稀釋至500mL.搖勻，備用，5.3.4甲妝溶液(0.1%):黽取甲酸(5.2.2)0.1mL.用水稀釋定容至100mL.播勻.備川.5-4標(biāo)準(zhǔn)品5.4.1甲基吶代半胱気酸(CJI.NOjSe.CAS號(hào)：26046902)：純度為98%,或經(jīng)R家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物M/14353-2023M/14353-2023IINY/T4353-2023質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。5.4.2硒代蛋氨酸＜CSH,NO:Se.CAS號(hào)J464-42-2）:純度）98%.或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。5.4.3納'代半胱^Sf（C3H,NO:Se.CAS5｝：10236585）:純度為95%,或經(jīng)W家認(rèn)證并授子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、5.5標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.5.1甲基?代半脒氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L.按Se計(jì)）：取甲基抽代半胱氨酸＜5.3.2）標(biāo)準(zhǔn)品23.1mg（梢確至0.01mg）,fiflOmL容fi瓶中.用水溶解并定容。于0V-41冷《保存.有效期為1個(gè)月.5.5.2硒代蛋衩酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L.按Se計(jì)）：取W代蛋鋌酸（5.4.2）標(biāo)準(zhǔn)品24.8mg（枏確至0.01mg）.jg于10niL祥呈瓶中.用水溶解并定容，于0V冷藏保存，有效期為丨個(gè)月.5-5.3硒代卞胱気酸鉍準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L.按Se計(jì)〉：取曬代半胱気酸標(biāo)準(zhǔn)品（5.4.3）21.2mg（精確至0.01mg）,置于10mL容S瓶屮，用0.5mL甲酸＜5.2.2）溶解后，用水溶解并定容，于Ot-4*C冷鉺保存.有效期為1個(gè)月。5.5.4混合秘準(zhǔn)工作溶液（1.0nig/L.按Se計(jì)〉：分別S取0.05mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)汝溶液（5.5.1,5.5.2,5.5.3）于50mL容ft瓶中.用水稀釋并定容至50mL.現(xiàn)用現(xiàn)配，5,6材料5.6.1微孔濾膜：水相.0.2256.2超濾離心管：15mL/3ku,或性能相當(dāng)者。6儀器設(shè)備6-1液相色譜申聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ES1）.分析天f■:感g(shù)o.ooooik和o.oig。pH計(jì).精度0.1,6.4渦旋混合儀。6.5恒水浴振蕩器.6.6商速肉心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于12000r/min。6.7組織搗碎機(jī)。7試驗(yàn)步驟7.1試樣的制備將蔬菜樣品町食部分經(jīng)組織搗碎均分成2份.裝人潔凈容器內(nèi).作為試烊密封并標(biāo)明標(biāo)記。7.2試樣提取與凈化稱取試樣2g（梢確至0.01g＞，g于50mL離心行屮.依次加人蛋0酶溶液（5.3.1）2.0mL,抗壞血酸溶液（5.3.2）0.25mL和丁ris-HCL緩沖溶液（5.3.3）7.75niL,渦旋混勻.于恒溫水浴振蕩器上371C條件下振蕩提取12h，12000r/min離心10min。提取液經(jīng)0.22pm濾膜過(guò)濾轉(zhuǎn)移至15mL離心管中.再將過(guò)濾后5.0mL提取液轉(zhuǎn)移至超濾離心訝（5.6.2）中，4000r/min離心10min.取0.1mL超濾液加人0.9mL甲酸溶液（5.3.4）.混勻待測(cè)，7.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制取空白試樣.按7.2處理得到超濾溶液.準(zhǔn)確fi取0.1mL.分別準(zhǔn)確移取適費(fèi)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.5.4）?用甲酸溶液（5.3.4）稀釋定容至1.0mL.fid制成濃度為0.2ng/mL、O.5ng/mL,1.0ng/tnL、2.0ng/mL,5.0ng/mL和10.0ng/mL堆質(zhì)匹fid標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，以待測(cè)物待征離子質(zhì)S色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7<741液帽色灞?，條件?>iBlT?C.fl.XOnitnX|iM)mm.KH*R??我fl味帽**)Aib>班祥看：IO.OpLtc)ft速i(X>2itiLminid>1111.15VielMtJlHLA\1甲觭水堉滅<5.3^hB為甲?<3.2.1>.佛遘洗序ft衣I表1韉賡浼質(zhì)種序AiMBwXXO1.5柿4-t0Im0100么1l⑽?C.0l⑽0742質(zhì)0黎考篆件?鸚乎坤I電，零高f?hb?h鎭方武I莊離rmiiC)柃M/F式：名反應(yīng)EMid>嘩蒡電屮.Af源溢哎.較解ft溢度M丑氣汝.邊，參數(shù)應(yīng)優(yōu)化凝ttSiH f<I.SWAf<4MH傳能姍阽X2、表2Z性囊子對(duì).X■萬(wàn)子M和礮《?■定忭離F財(cái)?珣槽?曾<網(wǎng)z-eV)??礪甲?硒代擎技韁齩I/9&<2S)l?C9/$6.1讀1麟)IU,9/9^(25)_代醑覲齩1科l&!>.?4纛>IMm.s<n?>?Kftttl?1燦139.Mg>IM74.1<IS>148/71.1(15>743定ttMS在PlHMiAJfrftF.iK擇溶*中甲事明代牟貌覲廉.承代蛋鉺《扣《代半醃氡匿的保朗時(shí)_與》?RKM:檐I.作鹱屮屮UM代t醃城M.M代代貌跌《的保明柑ctM廉件2.5；U內(nèi).11柃別_的離f的帽*<I ^nr?a<的?求表3定拽《3鰣相X稾子李霪的允件相11編籌tflttw子蕈It.*->20-50爾鶴?.?±2S:so744定邏MS?Hn??Il.的VOK鎵?*_?(!?MA9,?■M?,糟__識(shí)場(chǎng)I.V?RRff???&.*桿解液屮待M物嗚屯M均應(yīng)存itS檢M的線汴范閑內(nèi)，10超出紋件拒閑.應(yīng)由ft試費(fèi)或?qū)A樣解液》?咕F.lli!l??磨瀛作_曲?釋后盧鶬颺定.攀Att殲定SM.iAH^Mk屮的峰鏖織V-II鴻的崎iAIF'MC不珀dl<>Ati￡&講吒講暮"F.確代氰V?>>4淋離f?観&供mV.Rt承A.\Y7I4353-2023試》T屮中?確代tn*明，*代霣諷貌孩驗(yàn)的:tli<w、汁）以場(chǎng)?訃ttih.托公式⑴計(jì)算-f-XVXA<1Wr= -?**?，"?》"?*???，????*"?"???????*??????■?????????<1mXIOOOu iAH屮堿刑塒計(jì)it鐘的的的，學(xué)似為龍rQ.<mRkK）>e.由如準(zhǔn)?淺或嶙點(diǎn)瑚押的iAH漪液中KM絕分場(chǎng)綾噥遭的的M.申Kr泠的免每喪礙<11?rtii-11V 的教M.黎忪為《Q<inL>i/. 梅《液的K樣供的IM 試鋅味靈的ttfi.笮位為％（?>:?^?AJRUf 的W<f/i1.?l￥?JP6?tt7.9轜密遣6*tt1?ftbftWW2次觼 農(nóng)的*?4、科WiJ算f均的的：O10X他A比中咿tti