蔬菜水果中克百威的檢測(cè)量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法

1蔬菜水果中克百威的檢測(cè)量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法本文件規(guī)定了蔬菜水果中克百威的量子點(diǎn)微球熒光免疫層析快速檢測(cè)方法。本文件適用于辣椒、青菜、豇豆、芹菜、韭菜、黃瓜、蘋(píng)果、柑橘和梨中克百威的快速檢測(cè)。本方法檢測(cè)克百威的檢出限為0.004mg/kg，定量限為0.008mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB23200.112食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中9種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-柱后衍生法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理本方法以量子點(diǎn)微球?yàn)闊晒鈽?biāo)記物，基于競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析技術(shù)原理，通過(guò)熒光免疫分析儀進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，對(duì)蔬菜水果中的克百威進(jìn)行定量檢測(cè)。5試劑和材料除另有說(shuō)明外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。5.1乙腈（C2H3N）。5.2磷酸氫二鉀（K2HPO4）。5.3磷酸二氫鉀（KH2PO4）。5.4試樣提取液：準(zhǔn)確稱(chēng)取5.6g磷酸氫二鉀（5.2）、0.41g磷酸二氫鉀（5.3），乙腈（5.1）100mL用水溶解并定容至1L。5.5試樣稀釋液（0.01mol/L磷酸鹽緩沖液）：準(zhǔn)確稱(chēng)取5.6g磷酸氫二鉀（5.2）、0.41g磷酸二氫鉀（5.3），用水溶解并定容至1L。6儀器和設(shè)備26.1分析天平：感量為0.01g。6.2微量移液器：20μL～200μL、100μL～1000μL和1mL～10mL。6.3旋渦振蕩器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。6.4恒溫孵育器：設(shè)定溫度為37℃,誤差不超過(guò)±1℃。6.5熒光免疫分析儀：激發(fā)波長(zhǎng)為365nm±5nm，發(fā)射波長(zhǎng)為610nm±5nm。6.6離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6.7均質(zhì)機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。6.8離心管：1.5mL和50mL。6.9克百威量子點(diǎn)微球免疫層析包裝盒：含量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條和標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)置卡（ID卡ID卡內(nèi)設(shè)對(duì)應(yīng)批次標(biāo)準(zhǔn)曲線。7試樣制備7.1分樣和粉碎取不少于100g具有代表性的蔬菜水果樣品，充分均質(zhì)混勻，均分成兩份分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標(biāo)記，留樣置于-20°C避光保存。蔬菜水果測(cè)定部位按照GB2763的規(guī)定執(zhí)行。7.2試樣前處理7.2.1準(zhǔn)確稱(chēng)取2g±0.1g試樣于50mL離心管中。7.2.2向上述離心管中加入試樣提取劑3mL（5.4），封蓋漩渦混勻2min。7.2.3取1mL提取后上清液，4000rpm離心2min。7.2.4取50μL離心后上清液加入700μL克百威試樣稀釋液（5.5），混勻后用于檢測(cè)。注：不同廠家檢測(cè)卡所用的樣品前處理方法可能不同，應(yīng)按照產(chǎn)品使用說(shuō)8測(cè)定步驟8.1測(cè)試前打開(kāi)熒光免疫分析儀（6.5），確認(rèn)包裝盒中的ID卡與產(chǎn)品批號(hào)是否匹配，插入ID卡，在儀器測(cè)試界面點(diǎn)擊“讀卡/讀項(xiàng)目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點(diǎn)擊“確認(rèn)”即可使用。8.2將恒溫孵育器（6.4）開(kāi)機(jī)，待溫度升至37℃即可使用。8.3從密封包裝袋中取出克百威量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條，在30min內(nèi)使用。8.4將克百威量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測(cè)液于克百威量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應(yīng)10min。8.5反應(yīng)時(shí)間結(jié)束后立即將克百威量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條插入熒光免疫分析儀中，點(diǎn)擊儀器界面的“測(cè)試”，儀器會(huì)自動(dòng)給出定量測(cè)試結(jié)果，15min內(nèi)測(cè)試，結(jié)果有效。注：不同廠家熒光免疫分析儀所用儀器界面設(shè)置可能不同，應(yīng)按照儀器使9結(jié)果表述樣品中克百威的含量由熒光分析儀自動(dòng)計(jì)算并顯示，單位為毫克/千克（mg/kg）。310.1注意事項(xiàng)：使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，儀器的具體操作詳見(jiàn)儀器操作說(shuō)明書(shū)；檢測(cè)卡為一次性使用，檢測(cè)時(shí)請(qǐng)勿觸摸檢測(cè)卡結(jié)果顯示