自身免疫性肝病抗體譜檢測試劑盒酶聯(lián)免疫斑點法-北京和杰創(chuàng)新

北京和杰創(chuàng)新生物醫(yī)學(xué)科技有限公司自身免疫性肝病抗體譜檢測試劑盒（斑點-酶聯(lián)免疫法）說明書【產(chǎn)品名稱】中文名稱：自身免疫性肝病抗體譜檢測試劑盒（斑點-酶聯(lián)免疫法）英文名稱：DetectionKitforAutoimmuneLiverDiseasesAntibodyProfile（DOT-ELISA）【包裝規(guī)格】20人份/盒（10項；7項；4項）；40人份/盒（10項；7項；4項）。10項:AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB。7項:AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52。4項:AMAM2、LKM-1、LC-1、SLA/LP。【預(yù)期用途】用于定性檢測人血清中的抗AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB的IgG抗體。臨床意義：自身免疫性肝病包括自身免疫性肝炎(AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)，及此三類疾病的重疊綜合征等[1-3]。對其發(fā)病機制、診斷以及治療的研究得到了越來越多的關(guān)注。血清標(biāo)志性自身抗體的檢測,如PBC患者AMA抗體檢測,AIH患者抗-LKM1、抗-SLA/LP、抗LC-1的檢測,是自身免疫性肝病的重要實驗室診斷依據(jù)，對其自身抗體的檢測具有重要的臨床意義?！緳z測原理】自身免疫性肝病抗體譜的檢測采用斑點-酶聯(lián)免疫法（DotEnzymeLinkedImmunosorbentAssay，Dot-ELISA），用于定性檢測人血清中抗AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB10種抗體。膜條上平行包被了經(jīng)純化的AMAM2、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CENPB10種抗原及質(zhì)控帶。在第一次孵育時，已稀釋的病人樣本與膜條上的抗原反應(yīng)。如果樣本陽性，特異性的IgG抗體將與相應(yīng)的抗原結(jié)合。為檢測已結(jié)合的抗體，再加入酶標(biāo)羊抗人IgG（堿性磷酸酶結(jié)合物）進(jìn)行第二次孵育，然后加入底物液以產(chǎn)生藍(lán)紫色顏色反應(yīng)?！局饕M成成分】表1試劑盒的組成序號組成性狀40人份裝量20人份裝量1檢測膜條固體40人份×1袋20人份×1袋2樣品稀釋液液體70.0ml×1瓶40.0ml×1瓶3酶標(biāo)二抗(100×)液體0.8ml×1支0.4ml×1支4濃縮洗液(10×)液體100.0ml×1瓶50.0ml×1瓶5底物液液體40.0ml×2瓶40.0ml×1瓶6一次性吸管固體3ml×3支3ml×3支7說明書—1份1份檢測膜條主要組分：膜條上平行包被了經(jīng)純化的AMAM2、SP100、GP210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro-52、SSA、SSB、CEPNB抗原及質(zhì)控帶，以上抗原為重組抗原，質(zhì)控帶包被有羊抗人IgG。樣品稀釋液主要組分：BSA1.20.05MTBS緩沖液（pH7.2）40mlProclin-30040μl吐溫2020μl酶標(biāo)二抗(100×)主要組分：堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗人IgG10μlBSA12mgProclin-3000.4μl0.05MTBS緩沖液（pH7.2）0.4ml濃縮洗液（10×）主要組分：Tris 60.5gHCl 20ml氯化鈉 85gProclin-300 0.2ml吐溫5ml底物液主要組分：四唑硝基苯胺蘭/5-溴-4-氯啶-磷酸鹽(NBT/BCIP)0.1ml0.05MTBS緩沖液（pH7.2）40mlProclin-30040μl【儲存條件及有效期】2～8℃避光保存，有效期為12【樣本要求】人血清，要求清亮、無沉淀；樣本一周以內(nèi)檢測可在4℃樣本一周以上檢測需在-20℃【檢驗方法】 （1）準(zhǔn)備：將濃縮洗液（10×）用蒸餾水1：10倍稀釋，混勻后作洗滌、膜條預(yù)處理和稀釋酶標(biāo)二抗用，配制的洗液應(yīng)在同一個工作日內(nèi)使用。 （2）預(yù)處理：檢測膜條包裝桶從冰箱取出，恢復(fù)至室溫后再打開蓋取出膜條。在膜條反應(yīng)槽中加入洗滌液，每槽1.5ml，室溫?fù)u床上搖擺5min。 （3）血清溫育：將膜條反應(yīng)槽中的液體吸干或倒干，在膜條反應(yīng)槽中加入樣品稀釋液，每槽1.5ml，隨后加入待檢血清15μl。充分混勻后，室溫?fù)u床上搖擺30min。 （4）洗滌：將膜條反應(yīng)槽中的液體吸干或倒干，加入洗滌液1.5ml，室溫?fù)u床上搖擺5min后棄去，再重復(fù)洗滌2次。 （5）酶標(biāo)二抗溫育：每槽加入1:100稀釋（用洗滌液稀釋）的酶標(biāo)二抗1.5ml，室溫?fù)u床上搖擺30min。 （6）洗滌：重復(fù)步驟4）。 （7）底物溫育：每槽加入1.5ml的底物液，室溫?fù)u床上搖擺10min。 （8）終止：將膜條反應(yīng)槽中的液體吸干或倒干，每槽加入蒸餾水1.5ml，室溫?fù)u床上搖擺1min后棄去，再重復(fù)洗滌2次。蒸餾水洗凈后將膜條取出晾干。 （9）結(jié)果觀察：肉眼觀察反應(yīng)區(qū)內(nèi)各抗原帶有無著色及著色深淺?！緟⒖挤秶? 通過檢測滴度1:100臨界值血清及200例獻(xiàn)血者血清來研究該試劑的參考范圍。根據(jù)地域的不同、人群的不同，建議各檢驗室建立自己的參考范圍?！緳z驗結(jié)果的解釋】在自身免疫性肝病檢測膜條徹底干燥以后，根據(jù)膜條上各抗原線著色的深淺來判斷結(jié)果。質(zhì)控線出現(xiàn)藍(lán)紫色條帶說明實驗結(jié)果可靠。如果相應(yīng)抗原線處出現(xiàn)藍(lán)紫色條帶則為陽性反應(yīng)?？乖l與正常人血清不發(fā)生反應(yīng)，除質(zhì)控線顯藍(lán)紫色外，其余抗原線無條帶或微弱條帶的反應(yīng)為陰性反應(yīng)?？乖跈z測膜條上的位置：ALD譜10項ALD譜7項ALD譜4項AMAM2AMAM2SP100AMAM2AMAM2SP100gp210LKM-1LC-1SLA/LPRO-52SSASSBCENPBControlControlAMAM2SP100gp210LKM-1LC-1SLA/LPRO-52SLA/LPLKM-1SLA/LPLKM-1LC-1LC-1CControl【檢驗方法的局限性】該試劑盒只提供自身免疫性肝病抗體的檢測結(jié)果，具體病情及診斷應(yīng)由臨床醫(yī)生結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他信息綜合判斷?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】外觀：產(chǎn)品包裝完整、標(biāo)簽清晰。液體試劑中，樣品稀釋液、底物液和酶標(biāo)二抗為淡黃色，其它試劑為無色，均無混濁，無未溶物。檢測膜條干凈、無污漬、無破損。膜條寬度：2±0.5mm。臨界值：將自身免疫性肝病內(nèi)部參考品按照1:80稀釋后至少檢測20次，陽性率≥95%。將自身免疫性肝病內(nèi)部參考品按照1:120稀釋后至少檢測20次，陰性率≥95%，且顯色一致。批間差：抽取三個批次的試劑盒，按照臨界值的檢測方法：將自身免疫性肝病內(nèi)部參考品按照1:80稀釋后至少檢測20次，陽性率≥95%。將自身免疫性肝病內(nèi)部參考品按照1:120稀釋后至少檢測20次，陰性率≥95%，且顯色一致。干擾：血紅蛋白濃度小于5mg/ml的溶血、甘油三脂濃度小于20mg/ml的脂血和膽紅素濃度小于0.4ml/ml的黃疸對檢測結(jié)果沒有影響。【注意事項】1．本試劑盒只做定性檢測。2．脫色搖床搖擺頻率30次/分。3．檢測膜條質(zhì)控帶必須顯色否則試驗不成立。4．使用前試劑應(yīng)搖勻。5．整個檢測過程膜條應(yīng)正面朝上，同時保證液體覆蓋住膜條。6．顯色液對光敏感，請盡量避光使用保存。7．不同批號的試劑不可混用。8．一次性吸管可以用于洗滌過程加注洗液，且僅限于洗滌過程。切勿用于樣品稀釋液、酶標(biāo)二抗和底物的加液過程。9．試劑盒的所有組分都應(yīng)視作潛在傳染源小心處理?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1.JoshiS,CauchDK,HeathcoteEJ,etal.Antimitochondrialantibodyprofiles:uretheyvalidprognosticindicatorsinprimary，biliarycrrhosis?[J].nAmJGastroenterol,2002,97:999-1002．2.王宇明,毛青,陳嵩等．原發(fā)性膽汁性肝硬化和自身免疫性肝炎重疊綜合征的臨床與病理分析[J]中華肝臟病雜志,2005,13:6-8．3.FeldJJ,HeathcoteEJ.EpidemiolgyofautoimmuneLiverdisease[J].JGastroenterolHepatol,2003,18:1118-1128．4.Wiesl,BrimnerS,HenningerJ,etal.IdentifieationoftargetantigenforSLA/LPautoantibodiesinautoimmunehepatitis[J].lancet.2000;355:1510-15155.PObermayer-Straub,CPStrassburg,MPManns.Autoimmune

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