KNA文庫(kù)構(gòu)建記錄(舉例3)_第1頁(yè)
KNA文庫(kù)構(gòu)建記錄(舉例3)_第2頁(yè)
KNA文庫(kù)構(gòu)建記錄(舉例3)_第3頁(yè)
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操作人/日期：復(fù)核人/日期：第頁(yè)項(xiàng)目名稱：項(xiàng)目編號(hào)：KNA文庫(kù)構(gòu)建記錄文件制定依據(jù)：《KNA文庫(kù)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程V2.1.0》記錄編號(hào)：實(shí)驗(yàn)日期：實(shí)驗(yàn)人員：實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)材料gDNA序號(hào)gDNA編號(hào)gDNA（ng/μl）樣本編號(hào)樣本類型備注主要試劑耗材名稱生產(chǎn)廠家貨號(hào)批號(hào)備注dsDNAFragmentaseNEB10×FragmentaseReactionBufferv2NEBBuffer1北京貝瑞和康Enzyme1北京貝瑞和康Buffer2北京貝瑞和康Enzyme2北京貝瑞和康Truseq接頭（301-396）IDTEBBufferQiagenAgencourtAMPureXPbeadsBeckman無(wú)水乙醇北京化工廠ddH2OTiangenRT120-02主要儀器設(shè)備名稱固定資產(chǎn)編號(hào)或內(nèi)部編號(hào)備注PCR儀實(shí)驗(yàn)過(guò)程實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程參照《科諾安文庫(kù)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程v2.1.0》1、片段化DNA(10ng)1-8μl10×FragmentaseReactionBufferv21μldsDNAFragmentase1μlddH2O補(bǔ)足10μlFinalVolume10μl37℃10min打斷①移取μldsDNAFragmentase和μl10×FragmentaseReactionBufferv2，渦旋充分混勻，配得混合液MIX-1，待用。②片段化反應(yīng)體系配制gDNA編號(hào)gDNA用量（μl）MIX-1用量（μl）EBBuffer用量（μl）2、Fragmentase滅活打斷后BUF1打斷處理DNA10μlBUF17μlFinalVolume17μl65℃10min滅活。3、末端補(bǔ)平滅活后體系補(bǔ)足ddH2O，并加入加ENZ1。滅活后體系17μlENZ11.5μlddH2O30.5μlFinalVolume49μl程序如下：溫度時(shí)間37℃20min72℃20min4℃5min4、Adapter連接按照下表進(jìn)行加接頭反應(yīng)：末端補(bǔ)平反應(yīng)終體積49μlBUF225μlENZ21μlAdapter4μlFinalVolume79μl程序如下：溫度時(shí)間20℃15min65℃10min4℃5min①移取μlBuffer2和μlEnzyme2，渦旋充分混勻，配得混合液MIX-2，待用。②加接頭反應(yīng)

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