出口食品過敏原成分檢測 第8部分：實時熒光PCR方法檢測榛果成分_第1頁
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出口食品過敏原成分檢測第8部分：實時熒光PCR方法檢測榛果成分均用無DNA酶污染的容器分裝。5.1檢測用引物(對》序列和探針榛果成分擴增引物和探針、內(nèi)參照(真核生物成分)引物和探針詳見表1。表1試驗用引物和探針序列(5*-3*)目的基因內(nèi)參照5'端引物內(nèi)參照3’端引物內(nèi)參照探針TCTGCCCTATCAACTTTCGATAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCFAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC-T18SrRNA基因ATGATAATAAGGATACTGTGFAM-TCCCGTTCTCGTCCCTGCGGT-Ecl5.2CTAB緩沖液：55mmol/LCTAB,1400mmol/LNaC1,20mmol/LEDTA,100mmol/L.Tris,用10%鹽酸調(diào)pH至8.0,121℃,高壓滅菌20min,備用。5.3TE緩沖液(THis-Cl,EDTA緩沖液):10mmol/L.Tris-HCKpH8.0),1mmol/LEDTA(pH&.0)。5.6Tris飽和酚。5.7三氯甲烷。5.8異戊醇。5.9異丙醇。5.1070%乙醉。5.11TagDNA聚合酶。5.12dNTP混合液。5.1310×PCR緩沖液：200mmol/LTrs-HCl(pH8.4),2000mmol/1.KCl.15mmol/L.MgClg。6儀器和設(shè)備6.1實時熒光PCR儀。6.2離心機；最大離心力≥16000g。6.4冰箱：2℃~8℃,-20℃。6.5高壓滅菌器。6.6核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計。6.8天平；感量0.01g。7檢驗步服7.1.1稱取300mg已制備好的樣品于2ml.離心管中，加入600pl.CTAB緩沖液和40μl.蛋白酶K,探蕩混勻，65℃30min,期間每隔10min振蕩混勻；e=As×N×50/10001pL10×PCR9結(jié)果判斷及表述9.1結(jié)果判定在符合第8章的情況下·被檢樣品進行檢測時；a)如Ct值≤35.0,則判定為被檢樣品陽性，擴增靶標序列參見附錄A;b)如Ct值≥40.0,則判定為被檢樣品陰性c)如35.0<Ct值<40.0,則重復一次。如再次擴增后Ct值仍為<40.0,則判定被檢樣品陽性!如再次擴增后Ct值≥40.0,則判定被檢樣品陰性：d)兩個平行樣中只要有一個樣品檢測為陽性，即可判定為被檢樣品陽性。9.2結(jié)果表述9.2.1結(jié)果為陽性者，表述為“檢出過敏原榛果成分”。9.2.2結(jié)果

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