石蠟切片的HE染色 改

病理檢驗技術職業(yè)教育醫(yī)學檢驗技術專業(yè)教學資源庫石蠟切片的HE染色滄州醫(yī)學高等?？茖W校崔茂香石蠟切片的HE染色石蠟切片的HE染色組織切片的染色石蠟切片的HE染色HE染色法蘇木精伊紅染色生物學、細胞學與組織學最廣泛應用的染色方法。在病理科是常規(guī)染色方法。病理學診斷都是以HE染色方法為基礎的。染色的目的組織、細胞及其他成分染上不同深淺的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，便于光學顯微鏡下進行觀察和研究。石蠟切片的HE染色一種天然染料，本身不能染色，氧化后變成蘇木紅才成為真正的染料，蘇木對細胞核的親和力需媒染劑的幫助，此時細胞核呈紅色，只有在堿性環(huán)境中，蘇木才變成藍色。蘇木精人工合成染料，它可能是通過滲透或彌散作用完成染色的，故與組織結合不牢固，它對細胞質著色。伊紅Y染色原理石蠟切片的HE染色染色液的配制蘇木精5g，無水乙醇50ml，硫酸鋁鉀50g，蒸餾水650ml，碘酸鈉0.5g，甘油300ml，冰醋酸20ml。先將蘇木精溶于無水乙醇，硫酸鋁溶于蒸餾水，再將兩液混合后加碘酸鈉，最后加入甘油和冰醋酸。此配方為半氧化蘇木精液，碘酸鈉為氧化劑，硫酸鋁鉀為媒染劑，此液不會產(chǎn)生沉淀并很少有氧化膜。改良

Lillie-Mayer蘇木精液石蠟切片的HE染色沉淀酸化伊紅丫乙醇液鹽酸乙醇分化液：70％乙醇99ml加濃鹽酸1ml。伊紅丫20g，蒸餾水500ml，濃鹽酸10ml。將伊紅與蒸餾水混合溶解后加入濃鹽酸，攪拌，過夜，再過濾，用蒸餾水多次沖洗濾紙中的沉淀，再將沉淀物連同濾紙一起入溫箱中干燥，用95％乙醇1000ml配成飽和液。使用前取飽和液1份，95％乙醇2～3份，配成染色液。石蠟切片的HE染色操作流程(使用改良

Lillie-Mayer蘇木精染液)：1.二甲苯(Ⅰ)5～10分鐘

2.二甲苯(Ⅱ)5～10分鐘

3.無水乙醇(Ⅰ)3～5分鐘

4.無水乙醇(Ⅱ)3～5分鐘

5.95%的乙醇3～5分鐘

6.85%的乙醇3～5分鐘

7.80%的乙醇1～2分鐘

8.蒸餾水1～2分鐘

9.蘇木精染液5～8分鐘

10.流水稍洗2～3秒

石蠟切片的HE染色11.1%的鹽酸乙醇2～5秒

12.流水沖洗15～20分鐘

13.0.5%的伊紅水溶液2～5分鐘

14.蒸餾水稍洗1～2秒

15.80%的乙醇1～2秒16.95%的乙醇1～2秒

17.無水乙醇(Ⅰ)2～5秒

18.無水乙醇(Ⅱ)5～10秒

19.無水乙醇(Ⅲ)10～30秒

20.二甲苯(Ⅰ)1～2分鐘21.二甲苯(Ⅱ)1～2分鐘

22.中性樹膠封片石蠟切片的HE染色細胞核藍色細胞質、肌纖維膠原纖維紅細胞角蛋白等呈明亮的橙紅色甲狀腺膠質等呈深淺不同的紅色染色結果：石蠟切片的HE染色注意事項

：1.切片脫蠟要干凈。2.二甲苯脫蠟后按常規(guī)是用無水乙醇洗去二甲苯。3.蘇木精染液要配好，其好壞決定染色的優(yōu)劣。要定期過濾，避免氧化膜及沉淀等污染切片。4.1%鹽酸乙醇分化液分化時間要根據(jù)分化液的新舊適當調(diào)整。石蠟切片的HE染色5.鹽酸-乙醇分化后用流水沖洗時間要足夠，目的是把酸徹底沖洗干凈，使組織返藍，也避免切片殘留酸液使切片易褪色。6.伊紅水溶液染色時間約2～5分鐘，如染液陳舊，著色困難。在伊紅液中再加入冰醋酸1滴，可立即恢復伊紅的染色力。石蠟切片的HE染色7.第14步95%的乙醇脫水后常規(guī)是用三缸無水乙醇脫水，在用過2、3次后，尤其是在潮濕天氣，無水乙醇很快就含水因此，把第16步的無水乙醇改為苯酚二甲苯(1:3)混合液進行脫水，可省去第17步的無水乙醇，脫水時間3～5分鐘，可徹底脫去切片水分苯酚二甲苯脫水力強，可反復多次使用。切片殘留苯酚會使組織褪色，苯酚二甲苯脫水后，再經(jīng)三缸二甲苯透明并徹底洗去苯酚石蠟切片的HE染色9.使用一些二甲苯代替品如松節(jié)油代替二甲苯脫蠟和透明，可避免二甲苯的毒性，但脫蠟和透明效果會比二甲苯差，需要增加脫蠟和透明時間。同時，也要注意這些二甲苯代替品對各種染色是否有影響，使用一段時間后是否會變得黏稠，影響染色效果。8.苯酚別名石炭酸，為白色針狀結晶，配制苯酚二甲苯前需要將苯酚放入56℃溫箱內(nèi)或水浴加熱溶解。苯酚如被氧化變成紅色，不能使用。石蠟切片的HE染色10.在使用全自動HE染色機時，試劑配制和染色程序可參照手工操作，蘇