糧食及其制品中維生素B快速檢測

1糧油檢驗糧食及其制品中維生素B快速檢測GB/T5491糧食、油料檢驗扦樣、分GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗5.2試劑配制）：2）：5.2.4氫氧化鈉溶液（1mol/L）：稱取4.00g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL，混合均勻。5.2.5氫氧化鈉溶液（0.1mo5.3培養(yǎng)基5.4標準品5.5標準溶液配制mL、1.6μg/100mL、2.4μg/100mL、4.0μg/100mL。臨用前配制。5.6材料VitaFast?預包埋微孔板式維生素B3（煙酸）微生物法檢測試劑盒：含包埋有植物乳植桿菌暗處避光保存，使用前回溫至室溫，使用后立即放回保存條件下。不同批號試劑盒中組分不得混用,超過有效期的試劑盒不得使用。具體試劑盒組成參照附6.16.3無菌操作臺。6.7粉碎機：錘式旋風磨，具有風門可調(diào)和自清理功能，以避免樣品殘留和出樣管堵塞。在粉碎樣品6.8渦旋混合器。36.14無菌注射器：10mL。6.16容量瓶：1000mL、100m7.1環(huán)境條件7.2扦樣與分樣7.3樣品制備營養(yǎng)強化米粉、營養(yǎng)強化小麥粉、小麥粉等粉末樣品，取混合均勻的樣品約80g～100g，備7.4試樣處理30℃以下，8000r/min離心5min，0.22μm無菌聚醚砜濾膜稱取1.00g樣品于50mL無菌離心管中，加入約20mL檸檬酸鹽緩沖液（pH值4.5），渦旋混勻。加離心管收集濾液1mL～2mL，此為7.5樣品上清液的稀釋按照待測樣品的標簽值或經(jīng)驗值，在2.0mL無菌離心管中使用無菌蒸餾水對樣品上清液進行適當7.6加樣和培養(yǎng)7.6.1按照每個標準溶液、待測樣品和試劑空白各設置兩個微孔，取出所需數(shù)量的微孔條置于微孔架47.7測定8.2結(jié)果計算和表述X=c×40×dm×1000···························································c——待測樣品液中維生素B3的濃度，單位為微克每百毫升(μg/100mLd——對上清液的稀釋倍數(shù)；9.2標準曲線的相關系數(shù)不得低于0.99。9.4當待測樣品液的吸光值小于標準濃度0.4μg/100mL測定吸光值或大9.5每個批號試劑盒應進行驗收試驗，選取帶標物證書的質(zhì)控樣品測定值需在質(zhì)控樣品賦值范圍內(nèi)的在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值5（Lactiplantibacilluspla應關系，經(jīng)酶標儀進行吸光度值測定并擬合標準工作曲線，計算出試樣中維生素B5含量。13.1試劑）：13.2.2乙酸鈉溶液（0.2mol/L）：稱取2.7）：13.2.5氫氧化鈉溶液（1mol/L）：稱取4.00g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL，混合于2℃~4℃冰箱中可保存2年。613.5.3維生素B5標準使用工作液：吸mL、4.0μg/100mL、6.0VitaFast?預包埋微孔板式維生素B5（泛酸）微生物法檢測試劑盒：含包埋有植物乳植桿菌暗處避光保存，使用前回溫至室溫，使用后立即放回保存條件下。不同批號試劑盒中組分不得混用,超過有效期的試劑盒不得使用。具體試劑盒組成參照附15.1環(huán)境條件營養(yǎng)強化米粉、營養(yǎng)強化小麥粉、小麥粉等粉末樣品，取混合均勻的樣品約80g～100g，備730℃以下，8000r/min離心5min，0.22μm無菌聚醚砜濾膜過濾提取液，2.0m），后快速冷卻至30℃以下，8000r/min離心5min，0.22μm無菌聚醚砜濾膜過濾提取液，2.0mL無菌離按照待測樣品的標簽值或經(jīng)驗值，在2.0mL無菌離心管中使用無菌蒸餾水對樣品上清液進行適當16.1繪制標準曲線X=························································c——待測樣品液中維生素B5的濃度，單位為微克每百毫升(μg/100mL8d——對上清液的稀釋倍數(shù)；17.3標準溶液濃度點和待測樣品稀釋液兩個微孔間測定的吸光度17.5每個批號試劑盒應進行驗收試驗，選取帶標物證書的質(zhì)控樣品測定值需在質(zhì)控樣品賦值范圍內(nèi)在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值）：）：921.2.4氫氧化鈉溶液（1mol/L）：稱取4.00g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL，混合均勻。21.4標準品21.5溶液配制用50%乙醇溶液溶解并定容至1000mL容量瓶中。儲存于棕色試劑瓶中，于2℃~4℃定容至刻度?；靹蚝髢Υ嬗谧厣噭┢恐?，于2℃~4℃冰箱中可保存6個月。21.6材料VitaFast?預包埋微孔板式維生素B7(生物素)微生物法檢測試劑盒：含包埋有植物乳植桿菌暗處避光保存，使用前回溫至室溫，使用后立即放回保存條件下。不同批號試劑盒中組分不得混用,超過有效期的試劑盒不得使用。具體試劑盒組成參照附22.9離心機：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。22.10pH計：精度±0.01。22.15無菌聚醚砜濾膜（PES0.22μm。22.16容量瓶：1000mL、1023.2扦樣與分樣營養(yǎng)強化米粉、營養(yǎng)強化小麥粉、小麥粉等粉末樣品，取混合均勻的樣品約80g～100g，備23.4試樣處理溶液或1mol/L和0.1mol/L氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值提取30min。迅速冷卻至30℃以下，23.5樣品上清液的稀釋按照待測樣品的標簽值或經(jīng)驗值，在2.0mL無菌離心管中使用無菌蒸餾水對樣品上清液進行適當23.6加樣和培養(yǎng)23.7測定24.2結(jié)果計算和表述X=·······················X——待測樣品中維生素B7的含量，單位為微克每百克(μg/100gc——待測樣品液中維生素B7的濃度，單位為納克每百毫升（ng/100mLd——對上清液的稀釋倍數(shù)；25.3標準溶液濃度點和待測樣品稀釋液兩個微孔間測定的吸光度相對偏差不應大于5%，舍去的標準25.5每個批號試劑盒應進行驗收試驗，選取帶標物證書的質(zhì)控樣品測定值需在質(zhì)控樣品賦值范圍內(nèi)在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值樣品經(jīng)過提取和稀釋后與維生素B9檢測培養(yǎng)基一同加入包埋有鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus吸光度值測定并擬合標準工作曲線，計算出試樣中維29.2試劑配制）：）：）：29.2.5氫氧化鈉溶液（1mol/L）：稱取4.00g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL，混合均勻。29.3培養(yǎng)基29.4標準品29.5標準溶液配制0.01mol/L氫氧化鈉乙醇溶液溶解29.5.2維生素B9標準中間溶液(10μ0.01mol/L氫氧化鈉乙醇溶液定容。儲存于棕色試劑瓶中，于2℃~4℃冰箱中可保存1年。16ng/100mL、24ng/10029.6材料VitaFast?預包埋微孔板式維生素B9（葉酸）微生物法檢測試劑盒：含包埋有鼠李糖乳桿菌（Lactobacillusrhamnosus)（ATCC7469）的微孔板、粘合箔、微孔架等。試劑盒于2℃~8℃暗處避光保存，使用前回溫至室溫，使用后立即放回保存條件下。不同批號試劑盒中組分不得混用,超過有效期的試劑盒不得使用。具體試劑盒組成參照30.4無菌操作臺。30.16無菌聚醚砜濾膜（PES0.22μm。30.17容量瓶：1000mL、500mL、100mL。31.1環(huán)境條件營養(yǎng)強化米粉、營養(yǎng)強化小麥粉、小麥粉等粉末樣品，取混合均勻的樣品約80g～100g，備31.4試樣處理稱取1.00g樣品于50mL無菌離心管中，加入約30mL0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（pH值7.2渦確保離心管密封。水浴結(jié)束后快速冷卻至30℃以下，8000r/min離心5min，0.22μm無菌聚醚砜濾膜過濾提取液，2.0mL無菌離心管收集濾液1mL～2mL，此為樣稱取1.00g樣品于50mL無菌離心管中，加入約20mL0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（pH值7.2渦中加熱30min，期間應至少徹底混合5次，確保離心按照待測樣品的標簽值或經(jīng)驗值，在2.0mL無菌離心管中使用無菌蒸餾水對樣品上清液進行適當31.6加樣和培養(yǎng)31.7測定32.2結(jié)果計算和表述X=························································X——待測樣品中維生素B9的含量，單位為微克每百克(μg/100gc——待測樣品液中維生素B9的濃度，單位為納克每百毫升（ng/100mLd——對上清液的稀釋倍數(shù)；33.3標準溶液濃度點和待測樣品稀釋液兩個微孔間測定的吸光度相對偏差不應大于5%，舍去的標準33.4當待測樣品液的吸光值小于標準濃度為4ng/100mL測定吸光值或大于標準濃度32ng/100mL33.5每個批號試劑盒應進行驗收試驗，選取帶標物證書的質(zhì)控樣品測定值需在質(zhì)控樣品賦值范圍內(nèi)在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值第五法糧食及其制品中維生素B12快速檢測樣品經(jīng)過提取和稀釋后與微生物B12檢測培養(yǎng)基一同加入包埋有萊士曼氏乳酸桿菌（Lactoba）：37.3培養(yǎng)基37.4標準品37.5標準溶液配制mL、2.25ng/100mL、3.0ng/100mL、4.5ng/100mL。臨用前配制。37.6材料（Lactobacillusleichmannii)（ATCC7830）的微孔板、粘合箔、微孔架等。試劑盒于2℃~8℃暗有效期的試劑盒不得使用。具體試劑盒組成參照附錄38.3無菌操作臺。38.9離心機：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。38.12無菌離心管：2.0mL。38.13無菌注射器：10mL。39.1環(huán)境條件39.2扦樣與分樣39.3樣品制備39.4試樣處理5min，0.22μm無菌聚醚砜濾膜過濾提按照待測樣品的標簽值或經(jīng)驗值，在2.0mL無菌離心管中使用無菌蒸餾水對樣品上清液進行適當39.6加樣和培養(yǎng)39.7測定40.2結(jié)果計算和表述X=c×40×dm×1000X——待測樣品中維生素B12的含量，單位為微克每百克(μg/100gc——待測樣品液中維生素B12的濃度，單位為納克每百毫升（ng/100mLd——對上清液的稀釋倍數(shù)；41質(zhì)量控制41.3標準溶液濃度點和待測樣品稀釋液兩個微孔間測定的吸光度相對偏差不應大于5%，舍去的41.4當待測樣品液的吸光值小于標準濃度0.75ng/100mL測定吸光值或大于標準濃度4.50ng/10041.5每個批號試劑盒應進行驗收試驗，選取帶標物證書的質(zhì)控樣品測定值需在質(zhì)控樣品賦值范圍內(nèi)42精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值A.1.1包埋有菌種植物乳植桿菌（LactiplaA.1.2無菌水；A.1.3維生素B3（煙酸）標準品；A.1.4維生素B3（煙酸）測定用培養(yǎng)基0.20g，鹽酸腺嘌呤20mg，鹽酸鳥嘌呤20mg，尿嘧啶20mg，鹽酸硫胺素0.2mg，泛酸鈣0.2氫鉀1.00g，硫酸鎂0.40g，氯化鈉20mg，硫酸亞鐵20mg，硫酸錳20mg，水1000將各成分溶解于水中，煮沸攪拌2min，冷卻至室溫，用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液A.1.5粘合箔；A.2.1包埋有菌種植物乳植桿菌（LactiplaA.2.2無菌水；A.2.3維生素B5（泛酸）標準品；A.2.4維生素B5（泛酸）測定用培養(yǎng)基鹽酸鳥嘌呤20mg，尿嘧啶20mg，L-胱氨酸0.40g，L-色氨酸0.10g，核黃素0.4mg，鹽酸硫胺素0.2磷酸氫二鉀1.00g，三水合磷酸二氫鉀硫酸錳20mg，水1000mL；將各成分溶解于水中，煮沸攪拌2min，冷卻至室溫，用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液A.2.5粘合箔；A.3.1包埋有菌種植物乳植桿菌（LactiplaA.3.2無菌水；200mg，硫酸腺嘌呤20mg，鹽酸鳥嘌呤20mg，尿嘧啶20mg，鹽酸硫胺素2mg，核黃素2mg，煙酸2硫酸鎂0.4g，氯化鈉20mg，硫酸亞鐵20mg，硫酸錳20mg，水1000將各成分溶解于水中，煮沸攪拌2min，冷卻至室溫，用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液A.3.