1.2.2微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

第1章發(fā)酵工程第2節(jié)二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)必備知識一、微生物的選擇培養(yǎng)二、微生物的數(shù)量測定三、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)拓展延伸高考鏈接模擬演練闡明微生物選擇培養(yǎng)的原理2.進行土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)一、微生物的選擇培養(yǎng)1.選擇培養(yǎng)基（1）概念：允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基（2）原理：人為提供有利于目的菌生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度和pH等)，同時抑制或阻止其他微生物的生長。2.自然界中目的菌的篩選（1）實例：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)中用到的耐高溫的DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出的水生棲熱菌中提取出來的。70～80℃3．微生物的選擇培養(yǎng)(1)方法：對樣品進行充分稀釋，然后將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上。(2)稀釋涂布平板法的操作過程①系列稀釋操作a．編號為1×102～1×107試管中分別盛有9mL無菌水。b．將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。c．取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。②涂布平板操作A.取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面B.涂布器消毒：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中C.涂布器滅菌：將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布D.涂布平板：用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻(3)培養(yǎng)：待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d。微生物的數(shù)量測定1.稀釋涂布平板法①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②計數(shù)原則：一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進行計數(shù)。樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)。在同一稀釋度下，應(yīng)至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值。③計算公式每克樣品中的菌株數(shù)＝eq\f(某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),涂布平板時所用的稀釋液的體積mL)×稀釋倍數(shù)2.顯微鏡直接計數(shù)法一種常用的、快速直觀的測定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。三、微生物的純培養(yǎng)1.實驗原理：①土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶。②配制以尿素為唯一碳源的培養(yǎng)基，能夠在該培養(yǎng)基中生長的細菌就是能分解尿素的細菌2．實驗設(shè)計(1)土壤取樣①土壤要求：酸堿度接近中性且潮濕。②取樣部位：距地表約3～8cm的土壤層。(2)樣品的稀釋測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進行平板培養(yǎng)，當(dāng)?shù)谝淮巫鲞@個實驗時可以將稀釋的范圍放寬一點。(3)微生物的培養(yǎng)與觀察①培養(yǎng)：根據(jù)不同微生物的需要，控制適宜的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。②觀察a．觀察方法：每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而遺漏部分菌落。b．記錄菌落的特征：包括菌落的形狀、大小和顏色等。3．操作提示(1)無菌操作：取土樣的用具在使用前都需要滅菌。(2)做好標(biāo)記：本實驗使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標(biāo)記。例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。(3)制定計劃：對于耗時較長的生物實驗，需要事先規(guī)劃時間，以便提高實驗效率，在操作時有條不紊。4.實驗結(jié)果分析與評價內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)果分析是否有雜菌污染對照組的培養(yǎng)基上無菌落生長未被雜菌污染對照組的培養(yǎng)基上有菌落生長被雜菌污染選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯少于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目。選擇培養(yǎng)基具有篩選作用樣品的稀釋操作是否成功得到2個或2個以上的菌落數(shù)為30~300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)果應(yīng)該接近5.菌種鑒定：分解尿素的細菌合成的脲酶可以將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。1．稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)法的比較項目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)法主要用具培養(yǎng)基等顯微鏡、血細胞計數(shù)板或細菌計數(shù)板等計數(shù)依據(jù)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)菌株本身優(yōu)點計數(shù)的都是活菌計數(shù)方便、操作簡單缺點操作復(fù)雜、有一定誤差死菌、活菌都計數(shù)在內(nèi)2．選擇培養(yǎng)基的類型類型條件分離得到的菌種改變培養(yǎng)條件70～80℃的高溫水生棲熱菌添加某種化學(xué)物質(zhì)加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌高濃度食鹽金黃色葡萄球菌特殊碳源、氮源石油是唯一碳源能消除石油污染的微生物營養(yǎng)缺陷不加碳源自養(yǎng)型微生物不加氮源固氮菌3.兩種純化方法的比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法主要步驟接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線等比稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器單菌落的獲得從最后劃線的區(qū)域挑取稀釋度合適，整個平板上都可找到單菌落用途分離純化菌種，獲得單菌落①分離純化菌種，獲得單菌落；②用于計數(shù)菌落分布共同點都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細胞菌落，達到分離純化微生物的目的，也可用于觀察菌落特征4.選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基項目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊成分加入某種化學(xué)物質(zhì)加入某種指示劑或化學(xué)藥品目的抑制或阻止其他微生物生長，促進目的微生物生長與微生物的代謝物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定反應(yīng)用途培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別不同的微生物舉例培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細菌生長；用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)尿素分解菌可用伊紅—亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并有金屬光澤)【例1】（2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題）細菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細菌形成的。利用空氣微生物采樣器對某市人員密集型公共場所采樣并檢測細菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯誤的是（

）A．采樣前需對空氣微生物采樣器進行無菌處理B．細菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對3個平板計數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測的細菌氣溶膠濃度比實際值高【答案】D【分析】稀釋涂布平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)?！驹斀狻緼、為防止雜菌感染，接種前需要對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進行滅菌，對實驗操作者的雙手進行消毒，A正確；B、純化培養(yǎng)時，為防止污染培養(yǎng)基和水分蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，B正確；C、微生物計數(shù)時在同一稀釋度下，應(yīng)至少需要對3個菌落數(shù)目在30～300的平板進行計數(shù)，以確保實驗的準(zhǔn)確性，C正確；D、使用稀釋涂布平板法對微生物計數(shù)，數(shù)值往往偏小，原因是兩個或多個細胞連在一起時，在平板上只能觀察到一個菌落，D錯誤?！咀兪?1】（2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于細菌和酵母菌實驗的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D．血細胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細菌的數(shù)量測定【答案】A【分析】培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。滅菌常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法等?！驹斀狻緼、細菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣，通常酵母菌培養(yǎng)基比細菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比，A正確；B、通常細菌的生長速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定細菌的大于酵母菌的，與細菌的種類有關(guān)，部分細菌的菌落小于酵母菌，B錯誤；C、通常細菌和酵母菌的培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯誤；D、血細胞計數(shù)板適用于真菌的計數(shù)，細菌計數(shù)板用于細菌的數(shù)量測定等，D錯誤。【變式12】（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（

）A．a(chǎn)點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基【答案】D【分析】篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，要用角蛋白氮源培養(yǎng)基?！驹斀狻垦芯磕康氖呛Y選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以在c點取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，所以D正確，ABC錯誤。故選D。【例2】（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒C．接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，是進行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2、按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物的生長。3、消毒和滅菌是兩個不同的概念，消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物的方法殺死物體表面或內(nèi)部的一部分微生物。滅菌則是指使用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子?！驹斀狻緼、不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯誤；B、平板涂布時涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，不屬于消毒，B錯誤；C、使用后的培養(yǎng)基即使未長出菌落也要在丟棄前進行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯誤；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進行生長繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無法生長，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。故選D。【變式21】（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實驗設(shè)計，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【分析】為了篩選可分解尿素的細菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，其它微生物在該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長，可用于分離含脲酶的微生物。【詳解】A、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物，A正確；B、為了篩選可分解尿素的細菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，B正確；C、當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，C正確；D、在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做進一步鑒定，D錯誤。故選D。【變式22】（2022·湖南·高考真題）黃酒源于中國，與啤酒、葡萄酒并稱世界三大發(fā)酵酒。發(fā)酵酒的釀造過程中除了產(chǎn)生乙醇外，也產(chǎn)生不利于人體健康的氨基甲酸乙酯（EC）。EC主要由尿素與乙醇反應(yīng)形成，各國對酒中的EC含量有嚴格的限量標(biāo)準(zhǔn)?；卮鹣铝袉栴}:(1)某黃酒釀制工藝流程如圖所示，圖中加入的菌種a是，工藝b是（填“消毒”或“滅菌”），采用工藝b的目的是。(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，根據(jù)顏色變化，可以初步鑒定分解尿素的細菌。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶可用于降解黃酒中的尿素，脲酶固定化后穩(wěn)定性和利用效率提高，固定化方法有（答出兩種即可）。(3)研究人員利用脲酶基因構(gòu)建基因工程菌L，在不同條件下分批發(fā)酵生產(chǎn)脲酶，結(jié)果如圖所示。推測是決定工程菌L高脲酶活力的關(guān)鍵因素，理由是。(4)某公司開發(fā)了一種新的黃酒產(chǎn)品，發(fā)現(xiàn)EC含量超標(biāo)。簡要寫出利用微生物降低該黃酒中EC含量的思路?！敬鸢浮?1)酵母菌消毒目的是殺死啤酒的中大多數(shù)微生物，并延長其保存期(2)酚紅化學(xué)結(jié)合法、包埋法、物理吸附法(3)pH兩圖中脲酶活力隨時間變化的曲線基本一致，而維持pH在6.5不變與pH從6.5降為4.5相比較而言，酶活力值始終要高(4)方案一：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生EC降解酶的細菌，從細菌中分離得到EC降解酶，純化的EC降解酶進行固定化操作后，加入該黃酒中。方案二：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生脲酶的細菌，從細菌中分離得到脲酶，純化的脲酶進行固定化操作后，在黃酒工藝流程的發(fā)酵環(huán)節(jié)中加入?！痉治觥坑捎诩毦纸庠谀蛩氐倪^程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，pH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，指示劑變紅?！驹斀狻浚?）制造果酒利用的是酵母菌的無氧呼吸，加入的菌種a是酵母菌。過濾能除去啤酒中部分微生物，工藝b是消毒，目的是殺死啤酒的中大多數(shù)微生物，并延長其保存期。（2）由于細菌分解尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，pH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，故在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可以鑒別尿素分解菌。固定化酶實質(zhì)上是將相應(yīng)酶固定在不溶于水的載體上，實現(xiàn)酶的反復(fù)利用，并提高酶穩(wěn)定性，酶的各項特性（如高效性、專一性和作用條件的溫和性）依然保持。固定化酶的方法包括化學(xué)結(jié)合法、包埋法、物理吸附法等。（3）對比兩坐標(biāo)曲線，兩圖中脲酶活力隨時間變化的曲線基本一致，說明培養(yǎng)時間不是決定因素；而維持pH在6.5不變與pH從6.5降為4.5相比較而言，酶活力值始終要高，說明pH為6.5時，有利于酶結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，故pH是決定工程菌L高脲酶活力的關(guān)鍵因素。（4）從坐標(biāo)圖形看，利用脲酶消除其前體物質(zhì)尿素可降低該黃酒中EC含量。配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生EC降解酶的細菌，從細菌中分離得到EC降解酶，純化的EC降解酶進行固定化操作后，加入該黃酒中。或者配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生脲酶的細菌，從細菌中分離得到脲酶，純化的脲酶進行固定化操作后，在黃酒工藝流程的發(fā)酵環(huán)節(jié)中加入。1．微生物合成的油脂是制備生物柴油的新型原料。為篩選出產(chǎn)油脂的細菌，某小組進行了如圖所示的實驗。物質(zhì)甲可將菌體內(nèi)的油脂染成黑色。下列分析正確的是（）A．應(yīng)將土壤菌液系列稀釋、滅菌后再涂布到培養(yǎng)基A上B．培養(yǎng)基A、B、C都以油脂作為唯一的碳源C．培養(yǎng)基B中的菌落2和菌落4是產(chǎn)油脂的目的菌D．挑選培養(yǎng)基B中的目的菌接種到固體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)【答案】C【分析】選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基?！驹斀狻緼、滅菌會殺死土壤菌液中的目的菌，A錯誤；B、該實驗的目的是篩選能合成油脂的細菌，因此選擇培養(yǎng)基中不能加入油脂，B錯誤；C、依據(jù)題圖可知，菌落2和菌落4的細胞被染成黑色，說明這兩個菌落的微生物都產(chǎn)生了油脂，C正確；D、一般微生物的擴大培養(yǎng)采用液體培養(yǎng)基，D錯誤。2．尿酸氧化酶能分解尿酸（C5H4N4O3）。為獲取尿酸氧化酶高產(chǎn)菌株用以研制治療高尿酸血癥的酶類藥物，科研人員從某泥土中取樣后富集培養(yǎng)，3天后吸取培養(yǎng)液梯度稀釋到106，然后接種到固體培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)。挑取單菌落檢測尿酸氧化酶的酶活力（用每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol尿酸所需要的酶量表示），結(jié)果如表所示。下列最適合作為實驗?zāi)康木涞氖牵?/p>

）菌落1234酶活力100501420A．菌落1 B．菌落2 C．菌落3 D．菌落4【答案】C【分析】微生物分離時，利用該分離對象對某一營養(yǎng)物質(zhì)的“嗜好”，專門在培養(yǎng)基中加入該營養(yǎng)物質(zhì)，使該微生物大量增殖．這些物質(zhì)主要是一些特殊的碳源、氮源，如纖維素可用來富集纖維素分解微生物，尿素可用來富集尿素分解微生物。【詳解】分析題意，酶活力用每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol尿酸所需要的酶量表示，故所需酶量越少，說明酶活力越大，可知菌落3的酶活力最高，可作為實驗所需的目的菌，C符合題意。故選C。3．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯誤的是（

）A．涂布接種時，需將涂布器沾酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用B．分離計數(shù)時，可用稀釋涂布平板法對需計數(shù)的微生物進行分離C．觀察菌落時，不需要將培養(yǎng)皿蓋拿掉D．培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對微生物的生長越有利【答案】D【分析】稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過梯度稀釋后，進行涂布接種，將涂布器沾酒精后在酒精燈外焰上引燃，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進行計數(shù)。【詳解】A、涂布接種時，涂布器應(yīng)從盛酒精的燒杯中取出，并在火焰上引燃，冷卻后再進行涂布接種，A正確；B、稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，因此可用稀釋涂布平板法對需計數(shù)的微生物進行分離，B正確；C、為防止空氣中的雜菌污染培養(yǎng)物，觀察菌落時，不能打開培養(yǎng)皿的蓋子，C正確；D、按照微生物對營養(yǎng)基質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度適宜，對微生物的生長有利，如果營養(yǎng)物質(zhì)濃度過高會導(dǎo)致微生物失水，影響其生長繁殖，D錯誤。故選D。4．物質(zhì)Y是一種會污染土壤的含氮有機物，Y在培養(yǎng)基中達到一定量時培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解Y的細菌。在篩選目的菌的培養(yǎng)基中觀察到幾個菌落（如圖所示）。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．應(yīng)首選菌落①中的菌株進一步純化B．將所選取土壤滅菌后用無菌水稀釋涂布于培養(yǎng)基C．圖中菌落都具有能夠降解Y的能力D．圖中培養(yǎng)基可用牛肉膏、蛋白胨配制【答案】A【分析】篩選培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)δ承┗瘜W(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的，能選擇性地區(qū)分這種微生物的培養(yǎng)基。利用選擇培養(yǎng)基，可使混合菌群中的目標(biāo)菌種變成優(yōu)勢種群，從而提高該種微生物的篩選效率?！驹斀狻緼、據(jù)圖可知，①菌落最小，周圍透明圈最大，說明①菌落分解Y的能力最強，所以應(yīng)該選擇①菌落進一步純化，A正確；B、土壤稀釋液中含有接種的微生物，不能滅菌，B錯誤；C、據(jù)圖可知，圖中菌落③周圍未形成透明圈，不能降解Y，C錯誤；D、實驗?zāi)康氖呛Y選出能降解Y的細菌，所以不能加入牛肉膏、蛋白胨，只能以Y作為唯一氮源，D錯誤。故選A。5．黃河入?？谑徒到饩暮Y選是修復(fù)石油污染，保護黃河的重要工作，如圖表示篩選石油降解菌的過程。下列敘述正確的是（

）A．圖示接種方法為稀釋涂布平板法，據(jù)結(jié)果推測1g土壤中石油分解菌數(shù)最多為1.6×106個B．分離、純化石油分解菌時，還可采用平板劃線法且該方法也需要進行③步驟操作C．稀釋涂布時，利用涂布器從盛有菌液的試管中蘸取菌液，進行涂布D．進行步驟⑤時，應(yīng)用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)④中的石油降解菌，并檢測菌的數(shù)量和石油降解能力【答案】D【分析】1、每克樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。2、常用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中稀釋涂布平板法分離純化土壤中微生物的步驟為土壤取樣→溶化→梯度稀釋→涂布平板。3、由題圖可知，①稱取10g土壤；②10g土壤加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中制備土壤懸浮液，稀釋了101；③進行梯度稀釋，即依次稀釋至101、102、103稀釋度；④使用稀釋涂布平板法篩選菌株，接種了104稀釋度菌液0.1mL，長出16個菌落；推測1g土壤中石油分解菌數(shù)=16÷0.1×104÷10=1.6×105個；⑤鑒別優(yōu)質(zhì)菌種，保存?zhèn)溆茫茰y使用甘油管藏法或臨時保存法?！驹斀狻緼、根據(jù)題圖分析可知，圖示接種方法為稀釋涂布平板法，涂布平板的稀釋度為104，據(jù)結(jié)果推測1g土壤中石油分解菌數(shù)=16÷0.1×104÷10=1.6×105個，A錯誤；B、根據(jù)題圖分析可知，③進行梯度稀釋，雖然分離、純化石油分解菌時，可以采用稀釋涂布平板法，也可以采用平板劃線法，但平板劃線法不需要進行梯度稀釋，也就是不需要進行③步驟操作，B錯誤；C、稀釋涂布時，先取少量菌夜（不超過0.1ml）滴加到培養(yǎng)基表面，再將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻，用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，而不是利用涂布器從盛有菌液的試管中蘸取菌液，進行涂布，C錯誤；D、根據(jù)題圖分析可知，⑤鑒別優(yōu)質(zhì)菌種和保存?zhèn)溆?，無論使用甘油管藏法或臨時保存法，都要應(yīng)用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)④中的石油降解菌，獲得菌液，而鑒別優(yōu)質(zhì)菌種就是要檢測菌的數(shù)量和石油降解能力，D正確。故選D。6．為探究校內(nèi)植物園土壤中的細菌種類，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開展相關(guān)實驗。下列有關(guān)敘述正確的是（

）A．采樣時只需采集植物園中某一地點的土壤樣本B．活細菌數(shù)目可通過稀釋涂布平板法和平板劃線法來測定C．土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落D．可根據(jù)菌落的顏色、形態(tài)和大小來初步鑒定細菌種類【答案】D【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落?！驹斀狻緼、本實驗?zāi)康氖翘骄啃?nèi)植物園土壤中的細菌種類，故應(yīng)隨機采集植物園中多個不同地點的土壤樣本，A錯誤；B、平板劃線法不能用于統(tǒng)計活菌數(shù)目，B錯誤；C、土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時，才能將聚集的細菌分散開，有助于在培養(yǎng)基表面形成單菌落，而非稀釋倍數(shù)越低越越易得到，C錯誤；D、不同種類細菌的菌落特征一般不同，鑒定細菌種類時，可根據(jù)菌落的顏色、形態(tài)和大小來初步鑒定細菌種類，D正確。故選D。7．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用技術(shù)的敘述，正確的是（）A．培養(yǎng)微生物所用的培養(yǎng)基中都必須含有水、無機鹽、碳源和氮源等基本營養(yǎng)成分B．若要檢測飲水機的直飲水中大腸桿菌是否超標(biāo),待檢測水樣需要經(jīng)過滅菌后再檢測C．采用稀釋涂布平板法接種后,不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單菌落D．分離土壤中分解尿素菌純培養(yǎng)后,利用含酚紅的尿素培養(yǎng)基可作進一步鑒定【答案】D【分析】無菌技術(shù)的主要內(nèi)容①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌；③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸?！驹斀狻緼、自養(yǎng)型微生物不需要提供碳源，A錯誤；B、若要檢測飲水機的直飲水中大腸桿菌是否超標(biāo)，待檢測水樣需要直接進行檢測，待檢測水樣不能進行滅菌處理，B錯誤；C、采用稀釋涂布平板法接種后，稀釋到合適的濃度的菌液才可在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯誤；D、分解尿素的細菌能合成脲酶，催化尿素分解產(chǎn)生的NH3可以作為細菌生長的氮源。如果培養(yǎng)基中加入了酚紅指示劑，尿素分解的產(chǎn)物NH3會使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此，可用酚紅指示劑對分解尿素的微生物進行鑒定，D正確。故選D。8．以下說法正確的是（

）A．土壤中的尿素分解菌之所以能分解尿素是因為它們能合成尿素酶B．用尿素為唯一氮源加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基，培養(yǎng)細菌后指示劑變成紅色C．用尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基加入酚紅指示劑的目的是做細菌的營養(yǎng)成分D．檢測土壤中細菌總數(shù)的操作時，應(yīng)選擇菌落數(shù)在300以上的實驗組進行計數(shù)【答案】B【分析】土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)實驗中，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，計數(shù)的關(guān)鍵是經(jīng)梯度稀釋后的倍數(shù)要合適，計數(shù)時通常選擇30300之間的實驗組平板進行計數(shù)?！驹斀狻緼、土壤中的尿素分解菌之所以能分解尿素是因為它們能合成脲酶，A錯誤；B、由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，指示劑變成紅色，B正確；C、酚紅指示劑不能作為細菌的營養(yǎng)成分，C錯誤；D、檢測土壤中細菌總數(shù)的操作時，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30300之間的實驗組進行計數(shù)，D錯誤。故選B。9．下列有關(guān)“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)”實驗的敘述，正確的是（）A．實驗中采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，可以用于制取土壤稀釋液B．測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡直接計數(shù)法C．分離土壤中能分解尿素的細菌時，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基D．若實驗組菌落平均數(shù)為37個/平板，空白對照平板上有3個菌落，則本組菌落數(shù)的平均值為34個/平板【答案】C【分析】絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的微生物。稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。【詳解】A、實驗中采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后會殺死所有微生物，無法分離得到分解尿素的細菌，A錯誤；B、測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用稀釋涂布平板法，B錯誤；C、以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，尿素分解菌可以分解尿素作為氮源而能存活下來，其他不能分解尿素的微生物因為缺乏氮源而無法生存，從而達到篩選、分離尿素分解菌的目的，C正確；D、空白對照平板上有菌落，說明培養(yǎng)基滅菌不合格，那么實驗組平板上得到的菌落數(shù)據(jù)也是不準(zhǔn)確的，D錯誤。故選C。10．如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細菌的過程示意圖。下列敘述錯誤的是（

）A．步驟②的液體培養(yǎng)基含有的唯一氮源是尿素B．步驟③的平板培養(yǎng)基是加入了適量尿素的LB固體培養(yǎng)基C．步驟③采用稀釋涂布平板法接種，期待獲得能分解尿素細菌的單菌落D．步驟④挑?、壑芯浞謩e接種，可通過溶液pH的變化比較細菌分解尿素的能力【答案】B【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。【詳解】A、步驟②為選擇培養(yǎng)，該液體培養(yǎng)基中含有的唯一氮源是尿素，A正確；B、步驟③的平板培養(yǎng)基是應(yīng)該是以尿素作為唯一氮源的固體培養(yǎng)基，其目的是篩選出分解尿素的微生物，而LB固體培養(yǎng)基中本身就含有氮源，B錯誤；C、步驟③采用稀釋涂布平板法接種，其目的是通過梯度稀釋獲得能分解尿素細菌的單菌落，C正確；D、步驟④挑?、壑芯浞謩e接種，可通過溶液pH的變化比較細菌分解尿素的能力，尿素在分解過程中會產(chǎn)生氨和二氧化碳，進而會導(dǎo)致培養(yǎng)基中pH發(fā)生變化，D正確。故選B。11．尿素含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥，進入土壤能被某類細菌分解。研究人員擬從土壤中分離該類細菌并大量培養(yǎng)，操作流程如下圖。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．不同的微生物均選104、105、106倍的土壤稀釋液進行平板培養(yǎng)B．為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，對每個平板的菌落都要計數(shù)并取平均值C．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可以初步鑒定尿素分解菌D．④每次劃線前都需要灼燒接種環(huán)，其目的都是防止雜菌污染【答案】C【分析】培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，故選擇應(yīng)以尿素作為唯一氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物?！驹斀狻緼、由于土壤中細菌比真菌多，在測定土壤中細菌數(shù)量時，一般選用104、105、106倍稀釋的稀釋液進行平板培養(yǎng)，A錯誤；B、對微生物進行分離、計數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細菌數(shù)時，往往選取30～300的平板進行計數(shù)，B錯誤；C、要分離獲得分解尿素的細菌，培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，可初步鑒定尿素分解菌，C正確；D、每次劃線前均需灼燒接種環(huán)，其中第一次劃線前的灼燒是為了殺死接種環(huán)上的雜菌，之后劃線前的灼燒都是為了殺死上次劃線殘留的菌種，D錯誤。故選C。12．某生物興趣小組完成了“土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)”實驗，具體操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．振蕩的目的是增加尿素分解菌的濃度B．純化培養(yǎng)階段使用選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以尿素為唯一氮源C．中間試管涂布的3個平板的菌落平均數(shù)大于160個D．由圖中數(shù)據(jù)可知土樣中的菌株數(shù)約為個【答案】A【分析】每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)?！驹斀狻緼、振蕩的目的是提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)充分接觸微生物，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，其目的并不是增加尿素分解菌的濃度，A錯誤；B、只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，該實驗的目的是對土壤中分解尿素的細菌進行分離和計數(shù)，故應(yīng)選用尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，B正確；C、由圖觀察可知，用于計數(shù)的試管稀釋倍數(shù)大于中間試管的稀釋倍數(shù)，據(jù)此推測，中間試管涂布的3個平板的菌落平均數(shù)大于160個，C正確；D、平均菌落數(shù)為160個，該過程中稀釋的倍數(shù)為，為，取進行涂布操作，因此由圖示菌落計數(shù)結(jié)果可知10克土樣中的菌株數(shù)約為個，D正確。故選A。13．幽門螺桿菌是一種致病菌（該菌對萬古霉素、兩性霉素B等抗生素不敏感，對青霉素高度敏感），其危害主要是引起胃黏膜的炎癥，形成急慢性胃炎及消化道潰瘍。體檢時可通過14C尿素呼氣實驗來檢測幽門螺桿菌感染情況。受試者口服14C標(biāo)記的尿素膠囊后，定時收集受試者呼出的氣體并測定其中是否含有14CO2以及量的多少，作為診斷指標(biāo)。請回答下列問題：(1)幽門螺桿菌能夠以14C標(biāo)記的尿素為氮源，是因為其能產(chǎn)生，若要將提取的幽門螺桿菌進行擴大培養(yǎng)，配制培養(yǎng)基將僅允許幽門螺桿菌生長，同時抑制其他微生物生長，因此，該培養(yǎng)基又稱為培養(yǎng)基。(2)醫(yī)生為準(zhǔn)確測定患者胃內(nèi)的幽門螺桿菌數(shù)量，采取下列圖示方法進行計數(shù)，此方法常用到的接種工具是，已知步驟④獲得的三個平板的菌落數(shù)分別為90、95、100，對照組平板為0。則1ml胃液提取物中平均幽門螺桿菌數(shù)量約為個，該方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，其原因是。(3)經(jīng)測定患者胃液中的幽門螺桿菌呈陽性，醫(yī)生提供的治療方案是患者需連續(xù)服用（填抗生素名稱）兩周至14C檢測呈陰性后停藥。研究表明，幽門螺桿菌可以通過消化道傳染，為避免傳染給他人，醫(yī)生還建議患者就餐時?！敬鸢浮?1)脲酶選擇(2)涂布器9.5×106當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落(3)青霉素使用公筷【分析】培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物?！驹斀狻浚?）幽門螺桿菌能夠以尿素為氮源，是因為其能產(chǎn)生脲酶，脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘?；選擇培養(yǎng)基是指能夠抑制其它微生物生長，同時保證所需微生物生長，故配制培養(yǎng)基將僅允許幽門螺桿菌生長，同時抑制其他微生物生長，因此，該培養(yǎng)基又稱為選擇培養(yǎng)基。（2）據(jù)圖可知，圖中的菌落在平板上分布均勻，接種方法是稀釋涂布平板法，接種工具是涂布器；分析題意，對照組平板為0，說明培養(yǎng)基滅菌徹底，且微生物計數(shù)時應(yīng)選擇菌落在30－300之間的菌落進行計數(shù)，圖示過程稀釋了104倍，則1ml胃液提取物中平均幽門螺桿菌數(shù)量約為（90+95+100）÷3÷0.1×104=9.5×106個；由于個別菌落可能是由兩個或多個細菌形成的，在平板上觀察計數(shù)時只是一個菌落，所以運用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實際值偏小。（3）幽門螺桿菌屬于原核生物，能被青霉素殺死，故，醫(yī)生提供的治療方案是患者需連續(xù)服用青霉素兩周至14C檢測呈陰性后停藥；研究表明，幽門螺桿菌可以通過消化道傳染，為避免傳染給他人，醫(yī)生還建議患者就餐時應(yīng)注意用公筷等。14．人體每天產(chǎn)生的尿酸有2/3通過腎排出，其余1/3則通過腸道排泄，其中腸道菌群對尿酸的代謝起著重要作用。利用腸道細菌降解尿酸可為高尿酸血癥的治療提供新思路?；卮鹣铝袉栴}。(1)研究人員需要從（填“高”或“低”）尿酸人群的糞便中采集標(biāo)本，制備成菌液保存。要測定菌液中細菌的數(shù)目，可在顯微鏡下用計數(shù)板直接計數(shù)；除此之外還可以采用，該方法的測量值與實際值相比一般會偏小。(2)本實驗用到的尿酸選擇培養(yǎng)基需要進行（填滅菌方式）處理；培養(yǎng)皿需要進行（填滅菌方式）處理。(3)高效尿酸降解菌的馴化過程采用濃度梯度法把菌液分別接種于不同濃度尿酸（1.7mmol/L，1.9mmol/L、2.1mmol/L，2.3mmol/L）選擇培養(yǎng)液中，每組3個平行樣本，厭氧條件下37℃，220r/min搖床培養(yǎng)48h。每組3個平行樣本的目的是；在厭氧條件下培養(yǎng)的原因是。(4)通過馴化篩選獲得1株腸道細菌，命名為S3A，其在不同尿酸濃度馴化培養(yǎng)基中均可生長且尿酸降解率如下表，通過分析可得到的結(jié)論是。培養(yǎng)基初始尿酸濃度/（mmol·L1）降解后培養(yǎng)基尿酸濃度/（mmol·L1）尿酸降解率/%1.74±0.061.18±0.0432.21.89±0.041.19±0.0337.02.05±0.091.20±0.0641.52.26±0.081.13±0.0450.0【答案】(1)低細菌或血細胞稀釋涂布平板法(2)高壓蒸汽滅菌干熱滅菌（或高壓蒸汽滅菌）(3)依據(jù)平行重復(fù)原則，排除偶然因素對實驗結(jié)果的干擾該菌為腸道菌群，代謝類型為異養(yǎng)厭氧型，需要提供無氧條件(4)培養(yǎng)基中尿酸濃度越高，S3A菌的尿酸降解率越