革蘭氏染色法

關于革蘭氏染色法一目的要求：

1、學習并初步掌握革蘭氏染色法。

2、了解革蘭氏染色法的原理極其在細菌分類鑒定中的重要性。二基本原理：革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學家ChristainGran創(chuàng)立的，基本步驟是：

1、初染：結晶紫染色

2、媒染：碘液媒染

3、脫色：乙醇脫色

4、復染：番紅復染第2頁,共15頁，2024年2月25日，星期天

經(jīng)此法染色后，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；細胞中初染劑被脫色劑洗脫而染上復染劑的顏色（紅色）的細菌為革蘭氏陰性菌。GramstainofGram-GramstainofGram+第3頁,共15頁，2024年2月25日，星期天實驗原理：細菌對革蘭氏染色的不同反應是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。初染后，所有細菌都被染成初染劑的藍紫色。碘作為媒染劑，它能與結晶紫結合成結晶紫—碘的復合物，增強染料與細菌的結合力。當用脫色劑處理時，革蘭氏陽性菌的細胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結構組成，壁厚、類脂質含量低，用乙醇脫色時細胞壁脫水，使肽聚糖層的網(wǎng)狀結構孔經(jīng)縮小，透性降低，從而使結晶紫—碘的復合物不易被洗脫而保留在細胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復染后仍保留初染劑的藍紫色。革蘭氏陰性菌則不同，由于其細胞壁肽聚糖層較薄、類脂質含量高，所以當脫色處理時，類脂質被乙醇溶解，細胞壁透性增大，使結晶紫—碘的復合物比較容易被洗脫出來，用復染劑復染后，細胞被染上復染劑的紅色。第4頁,共15頁，2024年2月25日，星期天StructureofaGram-NegativeCellWallStructureofaGram-PositiveCellWall

第5頁,共15頁，2024年2月25日，星期天

三、器材：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，革蘭氏染色液，載玻片，顯微鏡等四、操作步驟：

1、涂片：將大腸桿菌（24h）和金黃色葡萄球菌（24h）分別涂片、干燥、固定。

2、染色：（1）初染：加草酸銨結晶紫一滴，約一分鐘，水洗（2）媒染：滴加碘液沖去殘水，并覆蓋一分鐘，水洗（3）脫色：將水甩凈，并襯以白背景，用95%乙醇滴洗至剛剛無紫色為止，約20—30秒，立即用水沖凈乙醇（4）復染：用番紅液染1--2分鐘，水洗第6頁,共15頁，2024年2月25日，星期天3、鏡檢：干燥后，油鏡觀察。以分散開的細菌顏色為準，革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。4、混合制片觀察：一載玻片上兩種菌混合制片，對比觀察。第7頁,共15頁，2024年2月25日，星期天步驟1：涂片

第8頁,共15頁，2024年2月25日，星期天步驟2：干燥

第9頁,共15頁，2024年2月25日，星期天步驟四染色

步驟三固定第10頁,共15頁，2024年2月25日，星期天crystalvioletstainwashwithwater

結晶紫染色水洗第11頁,共15頁，2024年2月25日，星期天Stainwithgram'siodinesolution

碘液復染Decolorizebyadding95%alcohol95%酒精脫色第12頁,共15頁，2024年2月25日，星期天CounterstainwithSafranin沙黃復染Resultsofstain染色結果第13頁,共15頁，2024年2月25日，星期天五注意事項

1）注意涂片不宜過。

2）火焰固定溫度要適宜。

3）注意控制好脫