毛發(fā)中可卡因及其代謝物苯甲酰愛康寧的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗方法

毛發(fā)中可卡因及其代謝物苯甲酰愛康寧的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗方法本技術(shù)規(guī)范規(guī)定了毛發(fā)中可卡因及其代謝物苯甲酰愛康寧的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗方法。本技術(shù)規(guī)范適用于毛發(fā)中可卡因及其代謝物苯甲酰愛康寧的定性及定量分析。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本技術(shù)規(guī)范的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本技術(shù)規(guī)范。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本技術(shù)規(guī)范。GB/T6682分析實(shí)驗室用水規(guī)格和試驗方法GA/T122毒物分析名詞術(shù)語3術(shù)語和定義GA/T122中界定的術(shù)語和定義適用于本技術(shù)規(guī)范。4原理在中性條件下，用有機(jī)溶劑將可卡因及其代謝物苯甲酰愛康寧從毛發(fā)樣品中提出，提取后的樣品用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式進(jìn)行檢測，經(jīng)與平行操作的可卡因和苯甲酰愛康寧對照品比較，以保留時間和兩對母離子/子離子對進(jìn)行定性分析；以定量離子對峰面積為依據(jù)，采用內(nèi)標(biāo)法定量測定。5試劑、儀器和材料5.1試劑5.1.1甲醇：HPLC級。5.1.2乙酸胺：色譜純。5.1.3甲酸：優(yōu)級純。5.1.4丙酮。5.1.5二氯甲烷。5.1.620mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸緩沖液：分別稱取1.54g乙酸銨和1.84g甲酸置于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，pH值約為4。5.1.7可卡因?qū)φ掌贰?.1.8苯甲酰愛康寧對照品。5.1.9內(nèi)標(biāo)為可卡因-d3和苯甲酰愛康寧-d8或其他合適的內(nèi)標(biāo)物。25.1.10可卡因和苯甲酰愛康寧對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：分別精密稱取可卡因和苯甲酰愛康寧對照品各適量，用甲醇配成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于冰箱中冷凍保存，保存時間12個月。試驗中所用其他濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液均從上述儲備溶液用甲醇稀釋而得。置于冰箱中冷藏保存，保存時間3個月。5.1.11內(nèi)標(biāo)物對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：市售可卡因-d3和苯甲酰愛康寧-d8的甲醇溶液質(zhì)量濃度為100μg/mL，置于冰箱中冷凍保存。將可卡因-d3和苯甲酰愛康寧-d8儲備液用甲醇稀釋50倍，得2μg/mL的內(nèi)標(biāo)工作液。置于冰箱中冷藏保存，保存時間3個月。5.2儀器和材料5.2.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。5.2.2超聲波清洗儀。5.2.3離心機(jī)。5.2.4移液器。5.2.5分析天平，感量0.1mg。6測定步驟6.1毛發(fā)樣品預(yù)處理6.1.1毛發(fā)樣品采集貼根(緊貼頭皮)剪取頭頂后部(枕骨部位)的頭發(fā)，所采頭發(fā)平放于清潔紙或鋁箔紙上，標(biāo)記發(fā)根位置，經(jīng)包裹、折疊后，置于紙袋（信封袋）中。記錄個體信息、攝藥史、毛發(fā)顏色、長度特征以及特殊處理情況等。當(dāng)無頭發(fā)可采或個體的頭發(fā)極短時，可采取人體其它部位的毛發(fā)，如腋毛、陰毛、男性胡須等，作為頭發(fā)的替代品。6.1.2毛發(fā)樣品洗滌毛發(fā)樣品依次用二氯甲烷、水和丙酮振蕩洗滌，清洗后的毛發(fā)晾干后剪成約1mm段，供檢。6.1.3毛發(fā)樣品的提取稱取毛發(fā)20mg，加入10μL內(nèi)標(biāo)工作液（可卡因-d3和苯甲酰愛康寧-d82μg/mL加入0.5mL甲醇超聲30min，然后以2500r/min離心3min，將上清液轉(zhuǎn)移至樣品瓶中，待測。6.1.4添加樣品及空白樣品取空白毛發(fā)20mg兩份，一份添加可卡因和苯甲酰愛康寧對照品制得0.5ng/mg添加樣品，一份做陰性對照，按上述操作與待測毛發(fā)平行提取和分析。6.2測定6.2.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀參考條件以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器和不同樣品等實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整：a)色譜柱：AllurePFPPropyl液相色譜柱(2.1mm根100mm根5μm)或等效色譜柱；b)流動相：V(甲醇)︰V(20mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸緩沖液)=80︰20；c)流速：200μL/min；d)柱溫：室溫；e)進(jìn)樣量：5μL；3f)離子源：電噴霧電離-正離子模式（ESI+g)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRMh)離子源電壓（IS5500V；i)碰撞氣（CAD）、氣簾氣（CUR）、霧化氣（GS1）、輔助氣（GS2）均為高純氮?dú)?，使用前調(diào)節(jié)各氣流流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求；j)去簇電壓（DP）、碰撞能量（CE）應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度；k）可卡因、苯甲酰愛康寧和內(nèi)標(biāo)物的定性離子對、定量離子對和保留時間見表1。表1可卡因、苯甲酰愛康寧和內(nèi)標(biāo)物的定性離子對、定量離子對、去簇電壓(DP)、碰撞能量(CE)和保留時間6.2.2定性分析在相同的試驗條件下，待測樣品中出現(xiàn)兩對定性離子對色譜峰，其保留時間與添加樣品中目標(biāo)物保留時間比較，相對誤差在±2%內(nèi)，且相對離子對豐度比與添加樣品中的相對離子對豐度比之相對誤差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)物。表2相對離子對豐度比的最大允許相對誤差(%)6.2.3定量分析6.2.3.1定量方法根據(jù)待測樣品中可卡因和苯甲酰愛康寧的濃度情況，用空白毛發(fā)添加相應(yīng)可卡因和苯甲酰愛康寧對照品，采用內(nèi)標(biāo)法，以定量離子對峰面積進(jìn)行定量測定。定量方法可采用工作曲線法或單點(diǎn)校正法。采用工作曲線法時待測樣品中可卡因和苯甲酰愛康寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)在工作曲線的線性范圍內(nèi)。配制系列質(zhì)量分?jǐn)?shù)的可卡因和苯甲酰愛康寧毛發(fā)質(zhì)控樣品，按“6.1.3”進(jìn)行樣品處理，按“6.2.1”條件進(jìn)行測定，以可卡因、苯甲酰愛康寧和內(nèi)標(biāo)定量離子對峰面積比為縱坐標(biāo)，毛發(fā)中可卡因和苯甲酰愛康寧質(zhì)量分?jǐn)?shù)為橫坐標(biāo)繪制工作曲線，用工作曲線對待測樣品中可卡因和苯甲酰愛康寧質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行定量。采用單點(diǎn)校正法時待測樣品中可卡因和苯甲酰愛康寧的質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)在添加樣品中可卡因和苯甲酰愛康寧質(zhì)量分?jǐn)?shù)的土50%內(nèi)。6.2.3.2結(jié)果計算6.2.3.2.1內(nèi)標(biāo)-工作曲線法以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比(Y)為縱坐標(biāo)、目標(biāo)物質(zhì)量分?jǐn)?shù)(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程。根據(jù)各樣品中目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積值，按式(1)計算出待測樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分C=Ya………………(1)式中：C——待測樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/mg)；Y——待測樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比；a——線性方程的截距；b——線性方程的斜率。6.2.3.2.2內(nèi)標(biāo)-單點(diǎn)校正法根據(jù)待測樣品和添加樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積值，按式(2)計算出待測樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。C=………………(2)式中：C——待測樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/mg)；A——待測樣品中目標(biāo)物的峰面積；A添加樣品中目標(biāo)物的峰面積；Ai——待測樣品中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；Ai添加樣品中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；c——添加樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/mg)。6.2.3.3平行試驗待測樣品同時平行測定兩份，雙樣相對相差按公式(3)計算：RD（%）=—————x100………………(3)——C式中：RD——相對相差；C1、C2——兩份待測樣品平行定量測定的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；——C——兩份待測樣品中平行定量測定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值。56.2.4空白試驗用空白毛發(fā)進(jìn)行空白試驗。7結(jié)果評價7.1定性結(jié)果評價7.1.1陰性結(jié)果評價如果添加樣品中檢出可卡因和苯甲酰愛康寧成分，待測樣品中未檢出可卡因和苯甲酰愛康寧成分，則陰性結(jié)果可靠；如果添加樣品中未檢出可卡因和苯甲酰愛康寧成分，則陰性結(jié)果不可靠。7.1.2陽性結(jié)果評價如果待測樣品中檢出可卡因和苯甲酰愛康寧成分，且空白樣品無干擾，則陽性結(jié)果可靠；如果待測樣品中檢出可卡因和苯甲酰愛康寧成分，且空白樣品亦呈陽性，則陽性結(jié)果不可靠。7.2定量結(jié)果評價平行試驗中兩份檢材的雙樣相對相差不得超過30%，結(jié)果按兩份檢材質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值計算，否則需要重新測定。8方法檢出限和定量下限本技術(shù)規(guī)范毛發(fā)中可卡因、苯甲酰愛康寧的