減數(shù)分裂相關(guān)基因HFM1、STAG3和TET1變異與原發(fā)性卵巢功能不全的相關(guān)性研究

減數(shù)分裂相關(guān)基因HFM1、STAG3和TET1變異與原發(fā)性卵巢功能不全的相關(guān)性研究第一部分全基因外顯子組測序發(fā)現(xiàn)原發(fā)性卵巢功能不全的新致病基因HHFM1[目的]全基因外顯子組測序技術(shù)（Whole-exomesequencing,WES）為篩查復(fù)雜疾病的易感基因提供了一個高效精準(zhǔn)的手段,本研究運用WES對中國漢族非近親婚配POI家系進(jìn)行全基因組測序分析,探尋候選致病基因與POI的關(guān)系。[方法]對1個中國漢族非近親婚配家系中的2個典型POI臨床表型姐妹患者及其生物學(xué)父母進(jìn)行全基因組外顯子測序,所獲測序數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫hg19進(jìn)行序列比對,采用常染色體隱性遺傳模式進(jìn)行易感基因篩選,利用Sanger測序?qū)ν蛔兾稽c進(jìn)行驗證,并且在69例中國漢族散發(fā)性POI患者和316例種族及年齡相匹配的正常對照中進(jìn)行易感基因變異篩查。[結(jié)果]通過WES及后期數(shù)據(jù)分析過濾,發(fā)現(xiàn)該POI家系的2個姐妹患者均攜帶位于1號染色體的HFM1基因復(fù)合雜合突變,來自父方的錯義突變c.2651T>G（p.Ile884Ser）及來自母方的剪切位點突變c.1686-1G>C,符合常染色體隱性遺傳模式;通過69例中國漢族散發(fā)性POI患者和匹配的316例對照中進(jìn)行HFM1基因全部外顯子區(qū)域變異篩查,在1例散發(fā)性POI患者中發(fā)現(xiàn)了HFM基因復(fù)合雜合突變,分別為p.Gly736Ser和c.3929₃930delinsG。[結(jié)論]本研究首次發(fā)現(xiàn)減數(shù)分裂基因HFM1突變與POI密切相關(guān),為POI發(fā)病機制研究開辟了新的研究思路。利用WES技術(shù)對POI家系或散發(fā)POI病例進(jìn)行候選基因篩查是POI遺傳病因?qū)W研究的有效方法之一。第二部分減數(shù)分裂基因STAG3與中國漢族原發(fā)性卵巢功能不全的相關(guān)性研究[目的]STAG3是重要的減數(shù)分裂基因,編碼一個減數(shù)分裂特異相關(guān)的cohesin環(huán)狀蛋白復(fù)合體亞單位,參與減數(shù)分裂過程中染色單體的正確分離。本研究旨在探討減數(shù)分裂基因STAG3突變在中國漢族POI發(fā)病中的作用。[方法]采用illuminaHiseq2000測序平臺對218例中國漢族散發(fā)POI患者進(jìn)行STAG3基因靶向測序,對于STAG3基因編碼區(qū)突變,進(jìn)行相應(yīng)的Sanger法直接測序驗證,并在240個對照組中進(jìn)行Sanger測序驗證。經(jīng)過質(zhì)量控制和過濾篩選,將數(shù)據(jù)與基因組STAG3參考序列（選用hg19版本,NM₀01282716）進(jìn)行比對。[結(jié)果]未發(fā)現(xiàn)距外顯子30bp以內(nèi)的剪切位點變異;Sanger法直接測序驗證中僅支持高通量測序發(fā)現(xiàn)的無臨床意義的常見變異點,未發(fā)現(xiàn)罕見變異點。[結(jié)論]STAG3基因變異可能存在種族間的差異,STAG3基因變異與中國漢族POI的發(fā)病無關(guān),尚需不同種族的大樣本前瞻隊列研究進(jìn)一步證實STAG3在POI發(fā)病中的作用。第三部分減數(shù)分裂調(diào)控基因TET1與原發(fā)性卵巢功能不全的相關(guān)性研究[目的]減數(shù)分裂啟動及同源染色體配對、聯(lián)會、重組和分離時所發(fā)生的任何錯誤,均可造成配子發(fā)生停滯或障礙,導(dǎo)致不育。本研究旨在探討減數(shù)分裂調(diào)控基因TET1與中國漢族POI之間的相關(guān)性。[方法]采用Sanger直接測序法對我中心96例中國漢族散發(fā)性POI患者及176例與之匹配的對照進(jìn)行TET1基因變異篩查,結(jié)合參考文獻(xiàn)和在線蛋白結(jié)構(gòu)和功能預(yù)測,分析TET1基因變異在POI發(fā)病中的作用。[結(jié)果]在3個散發(fā)性POI患者中發(fā)現(xiàn)了位于10號染色體TET1基因的3個新發(fā)變異點,分別為c.832G>A/p.Glu278Lys,c.1058C>A/p.Ala353Glu,c.1219G>C/p.Glu407Gln,均為雜合錯義突變,在對照組及公共數(shù)據(jù)庫中均未發(fā)現(xiàn)（thedbSNP,the1000GenomesProject,theNHLBI-ESP,ExAC）。通過PhyloP預(yù)測軟件對不同物種間突變核苷酸的保守性分析發(fā)現(xiàn),3個核苷酸位點保守性較低;Alamut軟件中Polyphen-2、SIFT和MutationTaster對各變異點的功能預(yù)測顯示,c.832G>A/p.