藥物半數(shù)致死量(有效量)測定-圖文

藥物半數(shù)致死量(有效量)測定_圖文.ppt【實驗?zāi)康摹繎?yīng)用隨機、重復(fù)、對照的實驗設(shè)計原則，進行設(shè)計及測定藥物的質(zhì)反應(yīng)的量效關(guān)系。掌握測定藥物半數(shù)有效量（ＥＤ50）和/或半數(shù)致死量（ＬＤ50）的方法、原理、實驗步驟、計算過程及意義。測出藥物的ＥＤ50或ＬＤ50及相關(guān)參數(shù)，認識生物個體差異及評價急性毒性大小的方法。【實驗要求】1、掌握小白鼠半數(shù)致死量或半數(shù)有效量測定的基本方法。2、熟悉動物實驗常用的隨機分組和實驗方法。3、掌握Bliss法等半數(shù)致死量或半數(shù)有效量的計算方法?！緦嶒炘怼堪霐?shù)致死量（50％Lethaldose，簡寫為ＬＤ50）是指能夠?qū)е?0%實驗對象死亡的藥物劑量。戊巴比妥鈉為鎮(zhèn)靜催眠藥，隨著劑量加大，相繼出現(xiàn)鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥、麻醉、死亡。無效量最小有效量常用量最小中毒量中毒量致死量量效關(guān)系與相關(guān)概念的示意圖死亡致死量劑量效應(yīng)無效量無效最小有效量治療作用常用量安全范圍極量毒性作用最小中毒量中毒量質(zhì)反應(yīng)的量效曲線睡眠死亡反應(yīng)百分率020408060100劑量LD50ED50質(zhì)反應(yīng)量效關(guān)系曲線思考：何意？何用？1.LD50/ED50的本質(zhì)2.治療指數(shù)（TI）=LD50/ED50Fig.2-3Thefrequencycurveandcumulativefrequencycurveofadrugactioninaquantal-effectexperiment.質(zhì)反應(yīng)量效關(guān)系曲線曲線中實驗動物數(shù)有50％出現(xiàn)陽性結(jié)果（反應(yīng)）所需的劑量，如以死亡為指標(biāo)稱為半數(shù)致死量，如以某種效應(yīng)的有或無則為半數(shù)有效量（50％Effectivedose，ＥＤ50）表示。ＬＤ50/ＥＤ50為半數(shù)致死量與半數(shù)有效量的比值（倍數(shù)）稱為治療指數(shù)（therapeuticindex，TI）。治療指數(shù)與安全范圍一般而言，治療指數(shù)(TI)是表示藥物安全性的指標(biāo)。該數(shù)值越大，表明有效劑量與致死劑量(或中毒劑量)間距離愈大，愈安全，但只適用于治療效應(yīng)和致死效應(yīng)的量效曲線相互平行的藥物，對于兩種量效曲線不平行(斜率不同)的藥物，還應(yīng)參考安全范圍（marginofsafety，MS），即ED95與LD5之間的距離或安全指數(shù)SI(SI=LD5／ED95)來評價藥物的安全性。質(zhì)反應(yīng)實驗中，以對數(shù)劑量為橫坐標(biāo)、反應(yīng)百分率為縱坐標(biāo)繪圖，形成一條對稱的“S”形曲線。

半數(shù)有效量（ED50）：50％的實驗動物有效時對應(yīng)的劑量。

半數(shù)致死量（LD50）：50％的實驗動物死亡時對應(yīng)的劑量。藥物安全性的評價治療指數(shù)（TI）=LD50/ED50安全系數(shù)（SF）＝LD5/ED95可靠安全系數(shù)（CSF）＝LD1/ED99三者數(shù)值大，說明藥物安全性好。質(zhì)反應(yīng)量效關(guān)系曲線與

藥物安全性的評價實驗的觀察指標(biāo)：ＬＤ50：規(guī)定的觀察時間內(nèi)記錄動物的死亡數(shù)為指標(biāo)，記錄并統(tǒng)計動物的死亡率。ＥＤ50：以翻正反射消失作為判斷動物睡眠的指標(biāo)。把受試小白鼠輕輕地置于仰臥位，如果在半分鐘內(nèi)不能翻正，即認為小白鼠處于睡眠狀態(tài)。記錄并統(tǒng)計動物睡眠發(fā)生率。【實驗試劑與器材】小鼠罩重量稱注射器（1.0ml）及針頭戊巴比妥鈉苦味酸（標(biāo)記動物號用）【實驗方法與步驟】預(yù)試：目的是找到0％（Ｄmin）和100％（Ｄmax）死亡的大致劑量范圍。給藥量：0.2ml/10g體重。正式實驗：在此劑量范圍內(nèi)安排５～６個對數(shù)劑量實驗組，便于用對數(shù)劑量對死亡數(shù)百分率作圖和計算數(shù)據(jù)。本實驗備有：50,40,32,25.6,20.5,16.4五個劑量組(組間公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。每個同學(xué)做4～5個連續(xù)的濃度，每濃度一只小鼠。實施：規(guī)范操作，觀察計時；分工合作，統(tǒng)一計算分組及給藥取小鼠50只（18～22克），雌雄各半，不同性別動物按體重隨機分成五組。每組各動物稱重，標(biāo)記后分別按設(shè)計的容積和濃度腹腔注射給藥。ＬＤ50（或ＥＤ50）測定時是否要設(shè)對照組，應(yīng)視藥物性質(zhì)等情況而定。必須注意：正式實驗如單人操作時宜從濃度偏高的劑量組開始給藥！起效快和對后續(xù)實驗有重要提示作用。思考！觀察與記錄記錄觀察時間內(nèi)實驗動物的癥狀、死亡（或有效）時間。整個實驗應(yīng)記錄的事項：日期、藥物名稱、批號及制藥單位、配藥的溶劑、藥液濃度、給藥途徑、給藥容積及給藥劑量、動物名稱、性別及體重、實驗時室溫、給藥時間、中毒癥狀及出現(xiàn)的時間、死亡表現(xiàn)及時間、各組死亡率、計算所得的ＬＤ50（或ＥＤ50）。預(yù)實驗結(jié)果40mg/kg組：(0.2ml/10g)腹腔注射給藥5～15分鐘內(nèi)，出現(xiàn)翻正反射消失(睡眠)；劑量實驗鼠數(shù)睡眠鼠數(shù)反應(yīng)百分率ED50（mg/kg）（％）（mg/kg）50104010321025.61021.810不同劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠的影響實驗分組、記錄和統(tǒng)計如增加記錄起效和維持時間，翻正反射消失的深度可獲得對量效關(guān)系和個體差異的更深刻認識。Bliss法計算軟件界面Bliss法運算圖形結(jié)果輸出Bliss法運算數(shù)據(jù)結(jié)果輸出【注意事項】1.本實驗為定量藥物效價測定，要求較高的精確性，在實驗過程中要求實驗者做到盡可能的精確程度。2.為了減少誤差，需嚴(yán)格控制除藥物劑量外的所有非處理因素，如最好由一人給藥。3.動物種類、體重范圍、給藥途徑、實驗觀察時間等因素對ＬＤ50及ＥＤ50的測定結(jié)果都有影響，在報告結(jié)果時都應(yīng)加以注明。

國際對動物實驗的3Rs原則：

即取代(Replacement)、精致(Refinement)和簡約(Reduction)，要求生命科學(xué)研究應(yīng)采取其他手段代替動物實驗、改進實驗方法、減少動物數(shù)量和痛苦，以符合道德方面的考量。

實驗設(shè)計三大原則：隨機、重復(fù)、對照均衡隨機法分組：先按易控制的因素（性別、年齡、體重等）均衡分檔。然后在每一檔隨機取出等量的動物分配到各組，使難控制的因素（活潑程度、饑飽、疲勞程度等）得到隨機安排?！咀⒁馐马棥孔鳂I(yè)：實驗測定的戊巴比妥鈉ED50以及上述例子LD50有關(guān)數(shù)據(jù)求出：治療指數(shù)TI＝LD50/ED50＝安全指