高效液相色譜儀器維護和保養(yǎng)

關(guān)于高效液相色譜儀器維護和保養(yǎng)溶劑過濾頭的清洗1.取下過濾頭放在(1:4,V/V)的硝酸溶液燒杯中超聲清洗15分鐘;2.取出后用蒸餾水超聲清洗10分鐘;3.用吸球吹出過濾頭中的液體;4.再用蒸餾水超聲清洗10分鐘;5.用吸球吹凈過濾頭中的水份;6.將過濾頭重新插入溶劑瓶中(正相系統(tǒng)注意將過濾頭烘干)流程第2頁,共32頁，2024年2月25日，星期天何時需要使用在線脫氣機第3頁,共32頁，2024年2月25日，星期天脫氣機的操作標(biāo)準(zhǔn)脫氣機

標(biāo)準(zhǔn)脫氣機每個通道體積為12ml，建議排液操作：5ml/min排液6min以上。微脫氣機微脫每個通道體積為1ml，建議排液操作：2ml/min排液5min。切勿用5ml/min流速去排液。第4頁,共32頁，2024年2月25日，星期天使用在線脫氣機須知溶劑

棕色玻璃瓶會避免藻類的生長。

經(jīng)常過濾溶劑以免其中微粒永久性阻塞毛細(xì)管。避免使用下述可腐蝕鋼鐵的溶劑：

堿金屬鹵化物及其酸溶液(如：碘化鋰、氯化鉀等)。

高濃度無機酸，如硝酸、硫酸.

可能含有過氧化物的色譜純醚(如THF、二氧六環(huán)、二丙基乙醚)。這些在使用前必須用干燥氧化鋁過濾除去過氧化物。

含強絡(luò)合劑的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。

四氯化碳與2-異丙醇或四氫呋喃的混合液。第5頁,共32頁，2024年2月25日，星期天防止堵塞溶劑過濾器污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵的運行。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH

4至7)中尤其如此。下列建議將會延長溶劑過濾器的使用壽命并維持泵的運行。使用滅過菌的溶劑瓶來減緩藻類生長。使用新鮮配制的流動相，特別是水溶劑或鹽緩沖液建議不超過兩天。如果應(yīng)用許可，在溶劑中加人0.0001－0.001

M的疊氮化鈉。避免溶劑瓶暴露在直射陽光下。用氬氣置換流動相上層的空氣。

在線脫氣機日常維護,故障診斷第6頁,共32頁，2024年2月25日，星期天在線脫氣機日常維護,故障診斷檢查溶劑過濾器－擰開脫氣機出口或比例閥入口管線，并使液面高于出口30cm此時溶劑會因為重力流出，脫氣機或溶劑過濾頭堵塞時，溶劑會流出不暢或不流出。－查看過濾器是否變色．－臨時取下過濾器，檢查柱前壓力是否正常．清潔溶劑過濾器將堵塞的溶劑過濾器從瓶頭組件中拿下。先用水沖洗殘留之溶劑然后將過濾器放在裝有濃硝酸（35％）的燒杯里浸一小時。用二次蒸餾水徹底沖洗過濾器。建議不使用超聲波清洗機清洗。將過濾器重新裝好。建議定期清洗溶劑過濾器及溶劑瓶，每三個月至少清洗一次。注意：不要使用沒有安裝溶劑過濾器的系統(tǒng)．可能會嚴(yán)重堵塞系統(tǒng)第7頁,共32頁，2024年2月25日，星期天在線脫氣機日常維護Question?1.如何簡單判斷脫氣機脫氣是否正常？2.如何簡單判斷脫氣機腔體或溶劑過濾頭是否堵塞？第8頁,共32頁，2024年2月25日，星期天在線脫氣機日常維護Question?1.如何簡單判斷脫氣機脫氣是否正常？打開Purge閥，設(shè)定泵的流速2ml/min，提起當(dāng)前所使用溶劑瓶內(nèi)的溶劑過濾頭，使之脫離液面一小段時間，此時溶劑傳送管內(nèi)會產(chǎn)生一小段氣泡，放下過濾頭，讓此段氣泡通過脫氣機，如果脫氣機正常，氣泡應(yīng)消失或縮小。2.如何簡單判斷脫氣機腔體或溶劑過濾頭是否堵塞？

關(guān)閉泵，擰開脫氣機出口或比例閥入口管線,此時溶劑會因為重力流出，脫氣機或溶劑過濾頭堵塞時，溶劑會流出不暢或不流出。第9頁,共32頁，2024年2月25日，星期天Agilent1100泵頭(PumpHead)結(jié)構(gòu)圖Holding/LockScrew(PEEK)1234567第10頁,共32頁，2024年2月25日，星期天帶有SealWash的泵頭結(jié)構(gòu)圖

}123第11頁,共32頁，2024年2月25日，星期天如何更換溶劑出口過濾芯Agilent四元／二元/單元泵日常維護

第12頁,共32頁，2024年2月25日，星期天嚴(yán)重污染的溶劑出口過濾芯Agilent四元／二元/單元泵日常維護第13頁,共32頁，2024年2月25日，星期天如何更換活塞桿密封圈Agilent四元／二元/單元泵日常維護

第14頁,共32頁，2024年2月25日，星期天多通道梯度閥（MCGV）操作要點

當(dāng)鹽溶液和有機溶劑混合時，鹽溶液可能與有機溶劑完全混溶，而不會出現(xiàn)沉淀。但是在梯度閥的混合點，但是在梯度閥的混合點，重力作用使鹽顆粒沉淀下來。通常，閥的A通道用于水相/鹽溶液，而泵的B通道用于有機溶劑。如果使用的是這樣的配置，鹽將落回到鹽溶液中，并被溶解。當(dāng)泵使用的不同配置（例如，D-鹽溶液，A-有機溶劑）時，鹽可能會落到有機溶劑中，從而出現(xiàn)問題。

Agilent1100四元泵中使用鹽溶液和有機溶劑時，建議將鹽溶液接到下面的口上，有機溶劑接到上面的梯度閥口上。有機溶劑通道最好直接在鹽溶液通道的上面。建議定期用水沖洗所有MCGV通道，以去除在閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。四元／二元/單元泵日常維護

第15頁,共32頁，2024年2月25日，星期天更好地使用四元泵

將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面(或較高處)。當(dāng)在四元泵上使用鹽溶液或有機溶劑時，建議將鹽溶液接在底部得梯度閥口上，將有機溶劑接在上面得梯度閥口上。有機通道最好在鹽溶液通道得上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出得鹽結(jié)晶。操作泵之前，用至少兩個體積（標(biāo)準(zhǔn)脫氣機30ml，對微脫氣機10ml）沖洗真空脫氣機

,特別是當(dāng)泵關(guān)閉了一段時間后（例如，過夜），以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時。防止溶劑過濾器堵塞及長菌，當(dāng)慮器表面有黑色或黃色污染層說明慮器發(fā)生了堵塞，請立即清洗或更換之。定期檢查排液閥的慮芯。檢查方法：擰開排液閥，以水作流動相，流速5ml/min，若壓力大于10bar,則須立即更換。

四元／二元/單元泵日常維護

第16頁,共32頁，2024年2月25日，星期天泵的使用須知更好地使用泵當(dāng)使用低流速時（不高于0.2

ml/min）檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏（用壓力測試或漏液測試）。每當(dāng)更換泵密封墊時排液閥慮芯也應(yīng)更換。更換活塞密封墊時檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導(dǎo)致輕度滲漏，并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。使用緩沖溶液時，關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當(dāng)需要長時間使用0.1摩爾或更高濃度得緩沖液時，最好選用密封墊清洗附件，以減少對密封墊及活塞桿的磨損。更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對其進行磨合，但磨合不適用于正相密封墊。第17頁,共32頁，2024年2月25日，星期天泵的使用須知

當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件時，由于該附件中也有密封墊，這樣就會增加活塞桿運動時的阻力。所以開泵前一定要用10％異丙醇，并將其流速調(diào)至約20滴/分鐘使這溶液流過沖洗裝置。

10％異丙醇有助于降低水的表面張力，并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。

當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10％異丙醇，會使密封墊及活塞桿的壽命減短。第18頁,共32頁，2024年2月25日，星期天泵的使用須知密封墊磨合操作：1.以異丙醇作為溶劑并將其管道直接連接到主動閥。2.連接阻尼管于排液閥的出口，阻尼管的另一端置于廢液瓶中。3.打開排液閥，并用異丙醇以2ml/min的流速沖洗系統(tǒng)10分鐘。4.關(guān)閉排液閥，設(shè)置流速使壓力達到350bar，并使系統(tǒng)在此壓力下保持15分鐘。5.關(guān)閉泵，緩慢打開排液閥釋放壓力，重新連接管路，然后沖洗系統(tǒng)中的異丙醇。注意，只有反相密封墊才需此操作，而正相密封墊因其最高只耐受200bar,所以此操作會損害它。第19頁,共32頁，2024年2月25日，星期天5重新連接色譜柱，設(shè)定適當(dāng)流速，當(dāng)流動相流出約30倍于色譜柱體積，并且檢測器基線平衡后，流動相更換完畢流動相的更換——更換互溶流動相1將新流動相置于儲液瓶中2打開放空閥，啟動泵使新的流動相從入空閥出口流出20ml左右3關(guān)閉放空閥，然后將進樣閥與色譜柱相連接端卸開，用小容器放置于進樣閥的出口處4啟動恒流泵，讓流動相從進樣閥出口流出10ml左右第20頁,共32頁，2024年2月25日，星期天流動相的更換——換緩沖液流動相1用水更換色譜系統(tǒng)中緩沖液2用水含量在10%~60%范圍的溶劑沖洗色譜柱中的鹽3用新流動相更換水或沖洗色譜柱溶劑流程第21頁,共32頁，2024年2月25日，星期天檢測器使用注意事項及日常維護可變波長紫外檢測器使用注意事項.

如果流動池被污染可先用以下方法處理:在不連接色譜柱的情況下先用高純水沖洗20分鐘，然后用5％硝酸沖洗2小時，最后再用高純水沖洗至流出液中性即可。如上述方法不果，就需更換流動池的檢測窗。上述處理方法也適用于DAD的流動池。第22頁,共32頁，2024年2月25日，星期天檢測器使用注意事項及日常維護熒光檢測器使用注意事項及日常維護.

由于水性流動相長時間留在流動池會有藻類生長，而藻類會產(chǎn)生熒光，所以可添加有機溶劑如5％的乙腈或甲醇。如懷疑流動池被污染可用以下步驟清洗之：1用雙蒸水沖洗30分鐘以上.2用注射器注射65％硝酸入流動池并使其留在流動池約1小時。（注意，為了防止過壓，請緩慢注射).3用雙蒸水沖洗干凈。第23頁,共32頁，2024年2月25日，星期天HPLC日常維護－總結(jié)定期清洗溶劑過濾頭（35％濃硝酸浸泡1小時，不要使用超聲波清洗）流動相應(yīng)經(jīng)過0.45um或更小孔徑的濾器過濾，如果使用濾膜，注意有機膜與水膜的區(qū)別(聚四氟乙烯能適用于所有溶劑)根據(jù)情況更換Purge閥內(nèi)的在線過濾頭（Purge閥打開，純水5ml/min，壓力超過10bar時需更換）注意清洗在線脫氣機及比例閥，尤其是長期使用水相或緩沖鹽的通路，使用純水沖洗后，再使用甲醇沖洗，可以打開Purge閥，使用5ml/min的流速。污染比較嚴(yán)重時，可以使用IPA清洗。

一般的流程，例如

A：BufferB:MeOHC:WaterD:CH3CN

分析：A:B:D=20:30:50

清洗：C100%30min，B100%30min

第24頁,共32頁，2024年2月25日，星期天安裝有sealwash組件的，無論是否使用緩沖鹽，開泵之前都應(yīng)該使之充滿流動的液體（10%IPA水溶液）并調(diào)流速為20滴/分鐘。正相色譜、反相色譜切換時應(yīng)使用IPA過渡，長期使用正相，應(yīng)更換正相柱塞密封墊樣品進樣之前最好過濾，如果樣品量太少，可以適當(dāng)抬高進樣針的位置流動相pH大于9.5或小于2.3時，進樣閥應(yīng)更換tefzel轉(zhuǎn)子密封圈注意不同檢測器流通池耐壓問題，盡量避免使用pH>9.5的流動相，以防腐蝕流通池石英窗，避免使用可能析晶的流動相，防止流通池堵塞

VWD40barDAD120barMWD120barFLD20barRID5bar

RID、FLD永遠是最后一個檢測器注意不同廠家接頭問題，防止?jié)B漏或毀壞色譜柱和接頭

HPLC日常維護第25頁,共32頁，2024年2月25日，星期天HPLC常用的色譜柱接頭0.090in.0.130in.0.090in.0.170in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090in.0.080in.TroubleshootingLCFittings,PartII.J.W.DolanandP.Upchurch.LC/GCMagazine6:788(1988)HPLC日常維護－總結(jié)第26頁,共32頁，2024年2月25日，星期天HPLC故障診斷系統(tǒng)壓力過高。1首先擰開排液閥，以純水作流動相并設(shè)流速為5ml/min若壓力超過10bar，應(yīng)先更換排液閥的慮芯。2若排液閥的慮芯沒有堵塞，卸下色譜柱，然后用一兩通代替色譜柱，以水作流動相設(shè)流速為1ml/min。通常壓力不會超過20bar,否則系統(tǒng)可能有堵塞。3若上述的壓力超過20bar,我們可按照從后到前的原則，也就是說先卸下進流動池的連接管接頭，開泵后，若壓力正常則流動池堵塞若仍不正?？蓪⑦@段管另一端也卸下，開泵后再觀察壓力情況。同樣道理，我們就可以找到堵塞的地方。容易堵塞的地方：流動池入口管；自動進樣器的針及針座；柱溫箱第27頁,共32頁，2024年2月25日，星期天HPLC故障診斷系統(tǒng)壓力過低，不穩(wěn)定或沒液流。首先擰開排液閥，設(shè)流速1~2ml/min后開泵，觀察有無液流，若有再仔細(xì)觀察液流是否有倒吸現(xiàn)象如不能確定可用量筒測量流速的準(zhǔn)確性。如上述無液流，或流速不準(zhǔn)多數(shù)為主動閥閥芯或主動閥故障，或泵有嚴(yán)重漏液。怎樣是大致判斷主動閥抑或其閥芯故障？可用以下方法：當(dāng)泵運轉(zhuǎn)時用手指輕捏主動主體，正常的主動閥能感到有節(jié)奏的脈動，如果沒有，主動閥有問題。如果有則可以將主動閥閥芯取出進行超聲波清洗，如仍有問題，可更換閥芯。注意，千萬不要把整個主動閥放入超聲波清洗這樣會損壞主動閥。若上述流速準(zhǔn)確但擰緊排液閥后壓力不穩(wěn)定，請仔細(xì)檢查有無漏液。(通常漏液地方：各接口包括色譜柱，泵，進樣閥等)。第28頁,共32頁，2024年2月25日，星期天HPLC故障診斷保留時間不穩(wěn)定。首先觀察保留時間是否有規(guī)律的變化，并同時觀察壓力是否穩(wěn)定

若壓力穩(wěn)定而保留時間呈有規(guī)律變化，多數(shù)是色譜柱未平衡好，特別是