環(huán)境微生物學實驗報告

本文格式為Word版下載后可任意編輯和復制第第頁環(huán)境微生物學實驗報告一、試驗目的

（1）了解一般光學顯微鏡的構造及原理，把握顯微鏡的操作及保養(yǎng)方法。（2）觀看、識別幾種原核微生物。真核微生物的個體形態(tài)，學會生物圖的繪制。

二、試驗器皿與材料

（1）器皿：顯微鏡、擦鏡紙、二甲苯。

（2）材料：示范片：細菌三形（球狀、桿狀、螺旋狀）、弧狀（硫酸鹽還原菌）、絲狀（浮游球衣菌等）、細菌鞭毛及細菌莢膜。放線菌、顫藍細菌、微囊藍細菌或念珠藍細菌等。

三、試驗步驟

（1）將標本片放在載物臺上，使觀看的目的物置于圓孔正中央。（2）將鏡頭換成低倍鏡，將粗調整器向下旋轉（或載物臺向上旋轉），眼睛凝視物鏡。當物鏡的尖端距離載玻片約0.5cm處時停止旋轉。

（3）左眼對著目鏡觀看，將粗調整器向上旋轉，假如見到目的物，但不非常清晰，可用細調整器調整，直至目的物清楚。此時找到目的物并移至中央。（4）換成高倍鏡，觀看目的物，旋轉細調整鈕，直至視野清楚。（5）觀看示范片，繪出其形態(tài)圖。

四、思索題

（1）使用油鏡時，為什么要先用低倍鏡觀看？答：為了找到目的物并移動到中央。

（2）要使視野光明，除采納光源外，還可實行哪些措施？

答：調大孔徑光闌，調整光源。假如是用反光鏡的顯微鏡，用凹面鏡可使視野光明。

五、生物圖

試驗二、微生物培育基的配制與滅菌

一、試驗目的

（1）熟識玻璃器皿的洗滌和滅菌前的預備工作。

（2）了解配置微生物培育基的基本原理，把握配置、分裝培育基的方法。（3）學會各類物品的包裝、配置（稀釋水等）和滅菌技術。

二、試驗器皿與材料

（1）試驗器皿：高壓蒸汽滅菌器、干燥箱、煤氣燈、培育皿、試管、刻度移液管、錐形瓶、燒杯、兩桶、藥物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉網、藥匙、鐵架、表面皿、pH試紙和棉花等。

（2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和瓊脂等。

三、試驗原理

培育基是微生物生長的基質，是根據微生物養(yǎng)分、生長繁殖的需要，由碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鈉、鈣、鎂、鐵及微量元素和水，按肯定的體積分數配置而成。調整合適的pH，經高溫滅菌后以備培育微生物之用。由于微生物種類及代謝類型的多樣性，因而培育基種類也多，它們的配方及配制方法也各有差異，但一般的配制過程大致相同。

四、試驗步驟

1、取100mL蒸餾水倒入錐形瓶；

2、稱取牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，瓊脂20g；3、用100g/LNaOH調整pH至7.2~7.4；4、蓋上棉塞，121℃下滅菌15~20min。

五、思索題

1、固體培育基加瓊脂后加熱溶化時要留意哪些問題？答：（1）加熱器功率不能太高，也不能太低。太高，簡單沸騰和把培育基燒

焦；太低，培育基簡單凝固。

（2）受熱要勻稱，可以墊上石棉網，要用玻璃棒不停緩慢攪拌。

（3）加熱完畢后，要在合適的溫度（60℃左右）倒平板，防止凝固。2、培育基中加瓊脂的作用是什么？答：瓊脂的作用就是讓培育基凝固。3、如何檢查培育基滅菌是否徹底？

答：將滅菌后的培育基按滅菌鍋內不同位置,每處抽取數管標號,置25至30

攝氏度培育一周左右進行檢查,若培育基無什么變化說明滅菌效果較好

試驗三、細菌的革蘭氏染色

一、試驗目的

（1）了解細菌的涂片及染色在微生物學試驗中的重要性。

（2）學會細菌染色的基本操作技術，從而把握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。

二、染色原理

微生物細胞由蛋白質、核酸等兩性電解質及其他化合物組成。所以，微生物表現(xiàn)出兩性電解質的性質。兩性電解質兼有堿性基和酸性基，在酸性溶液中解離出堿性基，呈堿性帶正電；在堿性溶液中解離出酸性基，呈酸性帶負電。經測定，細菌等電點（pI）在2~5之間時，大多以兩性離子存在，當細菌在中性、堿性或偏酸性溶液中時，細菌帶負電荷，所以簡單與帶正電荷的堿性染料結合，故用堿性染料染色的為多。

微生物體內各結構與染料結合力不同，故可用各染料分別染微生物的各結構以便觀看。

三、試驗器皿、試劑、材料

（1）器皿：顯微鏡、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。

（2）試劑：草酸銨結晶紫染液、革蘭氏碘液、體積分數為95%的乙醇、質量濃度為5g/L的沙黃染色液等。

（3）材料：枯草桿菌、大腸桿菌。

四、試驗步驟

（1）涂片：載玻片滴一滴蒸餾水蘸菌染勻（2）初染：用草酸銨結晶紫染液染色1~2min后水洗（3）媒染：用革蘭氏碘液染色1~2min后水洗

（4）脫色：滴加體積分數為95%的乙醇，約45s后水洗（5）復染：滴加番紅染色2~3min后水洗并干燥（6）鏡檢：用顯微鏡觀看菌體形態(tài)

五、思索題