胚胎干細(xì)胞及其培養(yǎng)建系

關(guān)于胚胎干細(xì)胞及其培養(yǎng)建系干細(xì)胞

(stemcells,SC)23是一類具有多向分化潛能和自我復(fù)制能力的原始的未分化細(xì)胞，是形成哺乳類動(dòng)物的各組織器官的原始細(xì)胞。第2頁,共19頁，2024年2月25日，星期天按分化潛能：全能干細(xì)胞多能干細(xì)胞單能干細(xì)胞干細(xì)胞的分類按發(fā)育狀態(tài)：胚胎干細(xì)胞成體干細(xì)胞?！?頁,共19頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞

當(dāng)受精卵分裂發(fā)育成囊胚時(shí)，內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)（InnerCellMass）的細(xì)胞即為胚胎干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞具有全能性，可以自我更新并具有分化為體內(nèi)所有組織的能力。第4頁,共19頁，2024年2月25日，星期天第5頁,共19頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞的特點(diǎn)全能性無限擴(kuò)增性遺傳穩(wěn)定性第6頁,共19頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共19頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞應(yīng)用前景1.是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的高效載體第8頁,共19頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞應(yīng)用前景2.用于疾病治療第9頁,共19頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞應(yīng)用前景胚胎干細(xì)胞用來克隆治療技術(shù)路線第10頁,共19頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)建系方法第11頁,共19頁，2024年2月25日，星期天1.胚胎采集分離具有發(fā)育全能性的ES細(xì)胞,要求選擇合適階段的胚胎。采卵時(shí)一般取囊胚。第12頁,共19頁，2024年2月25日，星期天

2.ICM的獲取

從著床前的胚泡中分離內(nèi)細(xì)胞團(tuán),是從早期胚胎建立ES細(xì)胞系的先決條件

直接分離法免疫外科法延遲著床法機(jī)械切割第13頁,共19頁，2024年2月25日，星期天第14頁,共19頁，2024年2月25日，星期天3.內(nèi)胚團(tuán)的離散分離ICM時(shí)可用吸管將其從滋養(yǎng)層細(xì)胞上轉(zhuǎn)移到胰蛋白酶微滴中,大約3～5分鐘ICM細(xì)胞彼此解離。第15頁,共19頁，2024年2月25日，星期天4.胚胎干細(xì)胞的鑒定

常用的檢測(cè)指標(biāo)有堿性磷酸酶、OCT24、細(xì)胞特異性表面抗原(SSEA2l)

等。

測(cè)定胚胎干細(xì)胞的體內(nèi)分化能力是通過制備嵌合體來完成的。第16頁,共19頁，2024年2月25日，星期天

5.培養(yǎng)有飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系

胚胎干細(xì)胞是動(dòng)物個(gè)體發(fā)生過程中具有全能性的原始細(xì)胞,維持ES細(xì)胞的不分化狀態(tài)由細(xì)胞內(nèi)一些結(jié)構(gòu)蛋白和多肽因子進(jìn)行內(nèi)源性調(diào)控。體外培養(yǎng)的ES細(xì)胞,接種在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)時(shí)可以長(zhǎng)時(shí)間保持ES細(xì)胞的原初特性。用作飼養(yǎng)層的細(xì)胞多數(shù)是具有貼附能力的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞、子宮內(nèi)皮細(xì)胞等)無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系飼養(yǎng)層細(xì)胞分泌的因子難以支持某些ES細(xì)胞的增殖。ES細(xì)胞也可在無飼養(yǎng)層細(xì)胞的環(huán)境中建立和維持,培養(yǎng)液中添加LIF因子或使用能分泌LIF的細(xì)胞制備條件培養(yǎng)液均可第17頁,共19頁，2024年2月25日，星期天

胚胎干細(xì)胞系不僅是研究細(xì)胞分化的模型,也是研究某些前體細(xì)胞起源和細(xì)胞譜系演變較理想的實(shí)驗(yàn)體系。第