安捷倫1100中文教程

安捷倫1100中文教程作者:劉世良(站內聯(lián)系TA)

發(fā)布:2006-05-05一、培訓目的：

●基本了解1100LC硬件操作。

●掌握化學工作站的開機，關機，參數設定,學會數據采集,數據分析的基本操作。

二、培訓準備：

1、儀器設備：Agilent1100LC

●G1310A:(單元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。

●G1313A（自動進樣器）。

●G1316A（柱溫箱）。

●G1314A（VWD檢測器）。

●G1362A（示差檢測器）。

●G1315A/B(DAD檢測器)。

●G1321A(FLD檢測器)。

●色譜柱:ZorbaxeclipseXDBC8,150mm×4.6mmi.d。

2、溶劑準備：

●色譜級純或優(yōu)級純乙腈（ACN）或甲醇。

●二次蒸餾水

基本操作步驟:

(一)、開機：

1、打開計算機,進入WindowsNT（或Windows2000）畫面,并運行BootpServer程序。

2、打開1100LC各模塊電源。

3、待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument1Online圖標，化學工作站自動與1100LC通訊，進入的工作站畫面如下所示。

4、從“View”菜單中選擇“MethodandRuncontrol”畫面,單擊”View”菜單中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”標志，來調用所需的界面。

5、把流動相放入溶劑瓶中。

6、打開Purge閥。

7、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數設定菜單，單擊Setuppump選項，進入泵編輯畫面。

8、設Flow：5ml/min，單擊OK。

9、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數設定菜單，單擊Pumpcontrol選項，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開始Purge，直到管線內（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge，直到所有要用通道無氣泡為止。

10、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數設定菜單，單擊PumpControl選項，選中Off，單擊Ok關泵，關閉Purgevalve。

11、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數設定菜單，單擊Setuppump選項，進入Pump編輯畫面，設Flow：1.0ml/min。

12、單擊泵下面的瓶圖標，如圖所示（以二元泵為例），輸入溶劑的實際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積。單擊Ok。

(二)數據采集方法編輯：

1、開始編輯完整方法：

●從“Method”菜單中選擇“Editentiremethod”項，如上圖所示選中除“Dataanalysis”外的三項，單擊Ok，進入下一畫面。

2、方法信息：

●在“MethodComments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。

●單擊Ok進入下一畫面。

3、泵參數設定：（以二元泵為例）

●在“Flow”處輸入流量,如1ml/min，在“SolventB”處輸入70.0,(A=100-B),也可Insert一行”Timetable”,編輯梯度。在“PressureLimitsMax”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護柱子。

●單擊Ok進入下一畫面。

4、自動進樣器參數設定:

●選擇合適的進樣方式,如圖所示，進樣體積1.0ul,洗瓶位置為6號?！癝tandardInjection”----只能輸入進樣體積，此方式無洗針功能?！癐njectionwithNeedleWash”----可以輸入進樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會在洗瓶中洗針。“Useinjectorprogram”---可以點擊Edit鍵進行進樣程序編輯。

●點擊Ok進入下一畫面。

5、柱溫箱參數設定:

●在”Temperature”下面的方框內輸入所需溫度,并選中它,點擊”more>>”鍵,如圖所示,選中”Sameasleft”---使柱溫箱的溫度左右一致。

●點擊ok進入下一畫面。

6、VWD檢測器參數設定:

●在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm,在”Peakwidth(Responsetime)”下方點擊下拉式三角框,選擇合適的響應時間,如>0.1min(2s)。

●在Timetable中可以“Insert”一行，輸入隨時間切換的波長，如1min，波長=300nm。點擊ok進入下一畫面。

7、DAD檢測器參數設定:

●檢測波長:254nm,BW=30nm,參比波長=350nm,BW=100nm;

●檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬BW：一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū)流動相使用前必須進行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產生氣泡。氣泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會造成熒光猝滅。

常用的脫氣方法比較：

氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。

加熱回流法：效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染。

抽真空脫氣法：易抽走有機相。

超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-15min，此法效果最差。

在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機利用膜滲透技術，在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

5、如何防止溶劑瓶內溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？

溶劑的質量或污染以及藻類的生長會堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=4—7）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶內溶劑過濾器的堵塞。

A：請嚴格執(zhí)行溶劑過濾。

B：請勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液

C：如果應用許可，可在溶劑中加入0.0001---0.001M的疊氮化鈉.

D:在溶劑瓶內溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。

E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。

堵塞后的處理法方法：

將過濾頭從組件中取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。

6、Agilent1100LC泵如何維護？

Agilent1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動、流量準確的流動相，及時合理的維護非常重要。

A：流動相使用前請必須脫氣、過濾。

B：使用緩沖鹽時，要加在線Seal-wash選項。

C：關機前，用100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關泵，（適于反相色譜柱）。

D：及時更換PurgeValve內的過濾芯。（當打開PurgeValve時，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。

7、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？

泵頭活塞的標準密封圈能適合于大多數應用，但使用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標準活塞密封圈，特別是長時間使用時，需更換另一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。（p/n0905-14202/pk）

***注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0—200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設為200bar。

8、使用梯度比例發(fā)時要注意那些事項？

當鹽溶液與有機溶劑溶液混合時，鹽溶液能與有機溶劑溶液完全混溶，而不會出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機溶劑中，出現(xiàn)問題。強烈建議：當使用緩沖鹽溶液和有機溶劑時，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。

9、在線真空脫氣機使用要注意那些事項？

一般來說，Agilent1100LC的真空脫氣機無需過多維護，只需注意幾個注意事項就可以了。

A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣機腔體；更換不同類型的溶劑時，要先抽空，再抽滿。B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來。

10、更換色譜柱時要注意什么事項?

在使用HPLC時,應特別注意”柱外效應”對分析結果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數比在氣體中小4~5個數量級，液體流動相的流速也比氣相慢1-2個數量級。因此，樣品進入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應減之最小，獲得理想的分析結果，儀器的流動相管路連接非常重要,一般Agilent1100LC在第一次安裝時,均有受過專業(yè)培訓的安裝工程師負責安裝,各種接頭會處理的非常完美?？蛻糁恍柙诟鼡Q色譜柱時注意接頭處理就可以了，一般柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼卡套接頭或PEEK管線手擰街頭，當完成第一次安張后，不銹鋼卡套已固定死，當接不同的柱子時，要注意柱子接頭處的形狀和長度，否則會產生一個非常大的死體積。

下面是不同廠家柱子接頭的形狀和長度，請參考：

11、手動進樣閥需做那些維護，使用時要注意什么？

對于手動進樣器，當使用緩沖溶液后，或者進濃度差異比較大的樣品時要用專用工具而不是用帶針頭的注射器沖洗進樣口，同時搬動進樣閥數次，每次數毫升。

注意事項